茶叶中没食子酸、儿茶素类和生物碱的 HPLC检测方法研究

比较 ZorbaxSB-C18与 TSKgelODS-100Z这2种色谱柱对12个组分的分离效果,从洗脱方式、流动相pH 值、柱温与流速等方面优化色谱条件,并对其进行方法学考查以及茶样测定应用,从而建立了一种同时测定茶叶中没食子酸（GA）、8种儿茶素类（GC、EGC、C、EGCG、EC、GCG、ECG、CG）与3种生物碱（可可碱、茶碱、咖啡碱）的高效液相色谱（HPLC）检测方法。确立的最优色谱条件为：采用 TSKgelODS-100Z （4．6mm×150mm,5μm）色谱柱,流动相为2‰甲酸水溶液（A 相）和甲醇（B相）,洗脱方式为83％A （0 min）→75％A （5min）→73％A （7min）→58％A （16min）→83％A （18min）,柱温为40℃,流速为1．0mL ·min－1,检测波长为280nm。茶叶中各组分回归方程的相关系数均在0．9990以上,保留时间与峰面积的精密度RSD 分别小于0．105％与4．076％,加标回收率在97．767％～104．766％。该方法具有良好的线性关系、精密度和回收率,对待测组分的分离效果好,适用于茶叶中没食子酸、儿茶素类及生物碱含量的准确测定。     

茶叶中L-茶氨酸HPLC-PDAD分析方法的建立

以0.05%三氟乙酸和50%乙腈为流动相,应用HPLC-PDAD建立了茶叶中未衍生化L-茶氨酸的分析方法.结果表明,L-茶氨酸的紫外吸收波长范围在190～240 nm之间,且在199 nm具有最大吸收峰.在0.02～1.00 mg·mL-1范围内,L-茶氨酸峰面积与浓度之间有良好的线性关系,回归方程为:Y=5.8343×106X 1.8201×105(r2=0.9991).6大茶类各样品L-茶氨酸含量(RSD)在0.24%～1.74%之间,平均加标回收率为99.21%～101.28%.     

HPLC-ELSD法快速检测白茶等3种茶叶中L-茶氨酸的含量

[目的]为L-茶氨酸提取制备提供可靠的检测手段。[方法]采用高效液相色谱蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）快速定量测定白茶、碧螺春、翠竹中L-茶氨酸的含量。[结果]试验表明,在反相C18色谱柱上,以0.15%三氟乙酸（含0.06%七氟丁酸）水溶液-乙腈溶液（88∶12）作为流动相,能有效检测L-茶氨酸,L-茶氨酸浓度在0.2～1.0 mg/ml时,其峰面积（Y）与相应的浓度（X）呈线性关系,线性方程为Y=2×10-7X＋0.005 7,相关系数为0.999 6。L-茶氨酸的平均回收率为99.55%～100%,相对标准偏差为0.39%～1.00%。[结论]该方法精密度、准确度好,稳定性高,能简便、快速、准确地测定茶叶中L-茶氨酸的含量。     

茶叶儿茶素提取和纯化研究

选用不同极性的溶剂，综合提取粗老绿茶中的粗脂类和粗儿茶素；用正交试验设计，优化各提取工艺参数，得到得率为２．３２％～２．４％的粗咖啡碱，２．６％～２．７％的脂溶性色素和得率为２３．８７％，含量为４７．５％，儿茶素相对提取率为８３．５％的粗儿茶素制品Ｉ。用活性碳对制品Ｉ进行纯化，得到得率为１５．０６％，儿茶素回收率为８６．９％，含量为６４．０％的儿茶制品Ⅱ，再用硅胶吸附纯化，得到儿茶素回收率为９０．     

茶叶植物中儿茶素和嘌呤碱的高效液相色谱法分析

采用高效液相色谱法,对多种茶叶植物中的儿茶素和嘌呤碱进行了测定.结果表明,采用Partisil ODS色谱柱分离和测定儿茶素时,以水、甲醇、甲酸和二甲基甲酰胺作流动相,流量和浓度线性梯度洗脱;分离和测定嘌呤碱时,以甲醇∶水=40∶60(体积比)作流动相,等强度洗脱.在选定的色谱条件下每种成分在各自的浓度范围内均具有较好的线性关系,样品的回收率为93.65%～98.95%,相对标准差为0.69%～2.26%.     

超高效液相色谱法同时检测茶叶中的没食子酸、咖啡碱和儿茶素

通过优化前处理提取条件和超高效液相色谱分离方法,建立了茶叶中没食子酸、咖啡碱和8种儿茶素定性和定量方法。结果表明,选用ACQUITY UPLC BEH C_(18)(1.7μm,2.1 mm×50 mm)色谱柱,色谱条件为柱温30℃,流速0.2 mL/min,流动相选择0.1%甲酸水-0.1%甲酸甲醇溶液,检测波长278 nm,10种组分在0.05～10.00 mg/L具有良好的线性关系,绿茶样品中各组分含量的相对偏差RSD在1.77%～5.89%,表明该方法简洁快速,且精密度好。     

茶氨酸检测分析方法研究进展

茶氨酸作为茶叶中的特征氨基酸是构成茶叶滋味的重要组成部分,其对人体具有多种保健功能,因此对茶氨酸的检测与分析显得十分重要.本文综述了近年来国内外在茶氨酸检测分析方面的研究进展.     

贵定鸟王种和福鼎种茶叶中茶氨酸含量的比较研究

为了探明贵定本地茶种鸟王茶与引进的福鼎茶的化学成分差异,利用高效液相色谱法测定和比较两种茶叶中茶氨酸的含量差异.采用C18色谱柱,流动相为甲醇和三氟乙酸溶液(体积分数为0.05％),流速为0.8 mL/min,紫外检测波长为208 nm,柱温室温,外标法定量.结果显示,在不同茶叶类型不同采摘时期,鸟王种的茶氨酸的含量均明显高于福鼎种,两种茶叶的茶氨酸含量有显著性差异.     

HPLC法同时测定茶叶中儿茶素类和咖啡因的含量

为茶叶产品的等级评价和质量控制提供科学依据,采用高效液相色谱发同时测定市售与种茶叶中没食子酸(GA)、表儿茶素(EC)、儿茶素(+C)、表没食子儿茶素(EGC)、没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)、没食子儿茶素(GC)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)以及咖啡因(CAF)含量。结果表明:在Agilent C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm),乙腈、甲醇、0. 5%乙酸溶液为流动相进行梯度洗脱,柱温30℃,UV检测波长为275 nm条件下检测,各目标物(GA、GC、EGC、+C、CAF、EGCG、EC、GCG和ECG)的重复性RSD为0. 41%～2. 12%;样品加标平均回收率为94. 68%～104. 40%,相对标准偏差(RSD)为0. 89%～5. 78%。该方法简单、快速、准确、重现性好,茶叶中各目标物均能得到较好的分离,可用于儿茶素类和咖啡因的定量检测。市售5种茶叶中咖啡因的含量均最高,为36. 15～87. 26 mg/kg,绿茶中的儿茶素类物质明显比红茶丰富。     

黔茶1号碾茶加工中氨基酸及儿茶素组分的动态变化

分析碾茶加工中氨基酸及儿茶素组分含量的变化情况,探究主要呈味物质的变化规律,为碾茶加工优化提供理论依据。以黔茶1号茶树品种鲜叶为原料制成碾茶,采用高效液相色谱法对碾茶加工中氨基酸及儿茶素组分进行检测。结果表明：碾茶加工阶段分别检测出18种氨基酸组分,6种儿茶素组分。氨基酸组分在加工过程中呈波动趋势,总量逐步下降,杀青阶段变化最为显著;呈味氨基酸含量整体下降,鲜、甜、苦味氨基酸在杀青阶段降幅分别为51%、54%、61%,说明呈味氨基酸对工艺的温度敏感性存在差异;儿茶素组分含量在加工中整体呈下降趋势,其中表儿茶素含量下降最显著;呈苦涩味的儿茶素在摊青及杀青阶段显著下降,尤以杀青阶段降幅较大。以黔茶1号为原料加工碾茶,摊青可有效降低碾茶的苦涩味,杀青会大幅降低氨基酸含量及儿茶素含量,进一步降低苦涩而显鲜爽,干燥阶段是固定已形成的良好品质的重要阶段。     

不同品种茶树愈伤组织的培养与茶氨酸的积累

通过对福鼎大白、福云595、福安大白、福鼎大毫、福云六号5个茶树品种愈伤组织的继代培养,研究其愈伤组织生长与茶氨酸积累规律,建立Logistic数学模型.结果表明:愈伤组织生长量与茶氨酸含量呈显著正相关(P<0.01);福鼎大白的愈伤组织生长量与茶氨酸质量分数最高,分别是2.26g·瓶-1、176.143mg·g-1;愈伤组织生长量与茶氨酸含量的大小顺序均为福鼎大白茶、福云595、福安大白、福鼎大毫和福云六号;茶氨酸的最佳收获时间为培养后24-28d.     

茶渣对儿茶素的吸附动力学

以茶渣为吸附剂,分别用拟一级动力学方程和拟二级动力学方程对其选择性吸附过程进行拟合,探讨茶渣分别对以表没食子儿茶素没食子酸酯( epigallocatechin gallate , EGCG)为主的儿茶素组分、咖啡碱的吸附和解吸附动力学特性.结果发现：拟二级动力学模型能更好地描述该吸附过程;吸附后茶汤中咖啡碱与总儿茶素比值由原来的0.164降至0.079;经40％乙醇解吸后,所得解吸液中酯型儿茶素占原溶液中酯型儿茶素的86.99％,咖啡碱为24.24％;茶渣柱层析穿透实验表明,咖啡碱最早穿透,其次为简单儿茶素,酯型儿茶素穿透最晚,进一步证明茶渣对以 EGCG 为主的酯型儿茶素吸附作用最强,脱咖啡碱效果显著;解吸实验表明,40％乙醇可充分解吸茶渣所吸附的酯型儿茶素.因此,在本实验条件下,解吸附可先用10％乙醇淋洗出咖啡碱,再用40％乙醇洗脱酯型儿茶素,可望得到富含酯型儿茶素的高纯度儿茶素类产品.     

儿茶素和茶黄素在安茶加工、陈化过程中的变化

以不同年份和加工过程中的安茶为研究材料,采用高效液相色谱技术对儿茶素和茶黄素在储存、加工中的变化进行定量分析,结合感官审评,对加工和存放过程中物质变化和感官进行分析。结果表明,儿茶素与茶黄素含量在加工过程中和陈化期间均有降低的趋势,储存6年的安茶呈现出明显的陈醇特点。研究结果对于适度陈化安茶,提高产品质量,推动安茶产业的发展具有重要的意义。     

115份贵州茶树资源氨基酸和茶氨酸分析与特异资源筛选

为筛选高氨基酸和高茶氨酸茶树资源,探明贵州茶树资源氨基酸和茶氨酸特性,本研究分别利用分光光度法和高效液相色谱法测定115份贵州地方茶树资源春季一芽二叶生化样的氨基酸总量和茶氨酸含量。结果表明：115份茶树资源的氨基酸总量在0.95%～7.96%,平均值为3.40%;茶氨酸含量在0～3.80%,平均值为1.58%;茶氨酸占比在0～67.66%,且集中分布于40%～<60%。在这115份茶树资源中,发现特异高氨基酸(氨基酸总量≥5%)茶树资源11份、特异高茶氨酸(茶氨酸含量≥3%)茶树资源3份。不同地方的茶树资源,其氨基酸总量和茶氨酸含量存在较大差异,其中,贵定、黎平和石阡的茶树资源表现出较高的氨基酸总量和茶氨酸含量,而三都和普安的茶树资源氨基酸总量和茶氨酸含量显著(P<0.05)低于其他地方。来自三都的突肋茶(Camellia costata)资源表现出更原始的生化性状,均未检测出茶氨酸。聚类分析结果显示,115份茶树资源可分为5类,其中,石苔14号以远高于其他资源的氨基酸总量和茶氨酸含量单独分为一类。     

茶树芽叶儿茶素含量与转录因子 MYB、bHLH关联分析

以茶树芽叶为试验材料,用高效液相色谱检测儿茶素含量,用高通量测序技术分析转录因子MYB、 bHLH 表达差异,应用数据统计分析儿茶素含量与转录因子MYB、bHLH 表达的关联性。结果表明院3 个转录因子 MYB 基因comp150334_c1、comp143073_c0、comp130756_c0 与儿茶素总量、酯型儿茶素含量的关联系数均在0.80 以 上;3 个转录因子MYB 基因comp166178_c0、comp159173_c0、comp109329_c0,3 个转录因子bHLH 基因 comp159534_c2、comp159225_c0、comp142932_c0 与儿茶素总量、酯型儿茶素含量的关联系数均在0.75 以上,这将为 研究茶树儿茶素生物合成过程的关键转录因子基因提供理论依据。     

湖北省地方审定茶树品种中儿茶素含量分析

以12个湖北省地方审定茶树品种为供试材料,采用高效液相色谱法（HPLC）检测分析8种主要儿茶素组分含量。结果表明,儿茶素各组分变异系数在1973%～6717%之间,变异幅度较大;非酯型儿茶素组分含量间的变化趋势不明显,而酯型儿茶素各组分含量大小为EGCG>GCG>ECG>CG。基于儿茶素品质指数进行聚类分析显示,鄂茶1号、鄂茶8号、鄂茶10号3个茶树品种可以作为适制名优绿茶的品种;五峰212、五峰310、鄂茶3号、鄂茶6号4个茶树品种EGCG含量高,可用于开发特殊茶饮;鄂茶2号儿茶素品质指数最低,适制红茶,但其EGC和儿茶素总量最高,应在今后的生产和育种中善加利用。     

白茶萎凋过程中儿茶素合成关键酶基因表达分析

[目的]研究白茶萎凋过程中茶多酚、儿茶素组分含量变化与其合成途径中关键酶基因的动态表达,为优化白茶的萎凋工艺提供参考依据.[方法]以不同萎凋阶段的白茶为原料,分别采用福林酚(Folin-Ciocalten)比色法和高效液相色谱法(HPLC)测定茶多酚、儿茶素组分含量的变化,并以实时荧光定量PCR检测白茶萎凋过程中与儿茶素物质代谢合成相关基因(PAL、C4H、CHS、CHI、F3'5'H、FYH、F3H、DFR、LAR、ANS、ANR和UGGT)的相对表达量.[结果]白茶萎凋过程中茶多酚含量呈逐渐降低趋势,儿茶素组分中表儿茶素(EC)、没食子儿茶素(GC)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)含量整体上呈先上升后下降的变化趋势,且均在萎凋历时32h出现最大值.实时荧光定量PCR检测结果表明,儿茶素生物合成途径关键酶基因PAL、C4H、CHI、F3H、F3'H、F35'H、DFR、LAR、ANR和UGG丁均在萎凋历时32 b呈上调表达,CH基因则随萎凋历时的增加呈下调表达趋势,ANS基因表达在整个萎凋过程中呈先上升后下降的变化趋势,在萎凋历时16 h达最大值.白茶萎凋过程中儿茶素合成途径关键基因表达水平具有调控儿茶素生物合成的作用.[结论]在白茶萎凋过程中,儿茶素生物合成途径关键酶基因PAL、C4H、F3H、FYH、DFR、LAR、ANR的表达与儿茶素组分单体EC、GC、EGC的积累规律基本一致,其最大值均出现在萎凋历时32 h,因此在制茶时可适当缩短萎凋时长,以提高白茶品质.     

茶叶中儿茶素薄层色谱分离所用展开剂的优化

室温条件下,以硅胶板为固定相,用5种展开剂(体积比9:9:2的甲苯-丙酮-甲酸、5.0:10.0:1.0:0.5的甲苯-甲酸乙酯-甲醇-甲酸、8.0:5.0:15.0:0.3的甲苯-三氯钾烷-丙酮-甲酸、12.5:7.5:1.8:0.6的三氯钾烷-丙酮-甲醇-水、12.5:7.5:1.8:0.6的三氯钾烷-丙酮-甲酸-水)对茶叶中的儿茶素进行薄层色谱分离,筛选出其中较优的展开剂后,进一步优化其配比,并用其分离绿茶和白茶提取物中的儿茶素以进行验证.结果表明,以体积比12.5:7.5:2.2的三氯甲烷-丙酮-甲酸为展开剂,茶叶内主要的4种儿茶素单体(EGCg、EGC、ECg、EC)可得到良好分离,绿茶与白茶提取物中的儿茶素能较好地得以分离.     

茶儿茶素-香草醛酸性试剂检测方法的研究

香草醛酸性试剂比色法是检测儿茶素含量最常见方法,但其准确性及实用性一直受到质疑.利用溶剂萃取、TLC和HPLC等方法,对儿茶素-香草醛酸性试剂显色方法的特异性、准确性进行了研究.结果显示,儿茶素类显色反应的灵敏度远高于黄酮醇、二氢黄酮醇和茶皂素类,又由于这些物质在茶叶中的含量很低,因此不会干扰儿茶素总量的测定.通过对显色试剂中酸的种类、酸浓度、显色温度和显色时间的研究,得出儿茶素检测的最佳方法:采用1%香草醛-浓盐酸试剂,在室温下反应5min,以Y(A505)=aX+b公式计算茶树中儿茶素的总含量.