水貂株犬瘟热病毒融合蛋白基因的克隆与序列分析

以犬瘟热病毒水貂分离株RNA为模板,经RT-PCR反应,扩增出融合蛋白基因的1053bp DNA片段,通过T-A克隆技术,成功构建克隆载体PMD-18T/F。序列分析表明:分离株与01-2689株、2544-Han95株、A75-17株、DOGDK91C株、00-2601株、ONP株、PDV-2株核苷酸序列同源性分别为94.3%、93.5%、94.4%、93.6%9、5.3%、97.3%和94.5%;氨基酸序列同源性分别为97.2%、96.6%、97.4%、97.4%、97.4%、97.2%和98.0%。抗原指数分析表明分离株与疫苗ONP株、强毒A75-17株在40-50位氨基酸间存在明显差异。     

弓形虫GJS株表面抗原1基因的克隆及真核表达质粒的构建

根据GenBank数据库中的RH株弓形虫表面抗原1(SAG1)基因序列设计1对引物,应用PCR技术从弓形虫GJS株速殖子基因组DNA中扩增编码SAG1的基因片段.PCR产物经纯化、酶切后定向插入pcDNA3.1(+)真核表达载体,转化至大肠杆菌DH5α,经酶切及PCR鉴定后测序,并进行序列分析.结果表明:从弓形虫GJS株基因组DNA中扩增出1 008 bp的特异SAG1片段,大小与预测值相符,与已知的SAG1基因核苷酸序列(GenBank登录号:S76248)的ORF和氨基酸序列的同源性均为99%.     

耐低温降解纤维素菌株筛选、鉴定及产酶条件优化

低温是制约北方寒冷地区秸秆生物持续、高效转化的主要因素,也是影响北方寒区沼气发酵全年持续运行的关键因素。研究以秸秆利用富集限制性培养技术,从腐殖质丰富的大庆扎龙湿地土样中筛选出1株产生较高纤维素酶的耐低温降解纤维素菌株,经菌株18S rDNA序列及形态学分析,鉴定该菌株为奥尔森青霉属,命名为L-11。经响应曲面法优化产酶条件,获得影响奥尔森青霉菌株L-11产酶最优条件为麸皮11.05 g·L~(-1)、豆粉2.32 g·L~(-1)、初始pH 5.23、卵磷脂2.30 g·L~(-1),羧甲基纤维素酶活(CMCase)达48.809 IU·mL~(-1)。低温下菌株L-11具有较强的纤维素降解能力,在沼气生产领域应用前景良好,可为高转化能力基因菌株改良及富含纤维素类废弃物综合利用提供菌种资源。     

Shunt bilirubin: evidence for two components

Studies with C(14)-labeled glycine and delta-aminolevulinic acid as heme-bilirubin precursors in man indicate that the early labeled or shunt bilirubin consists of two fractions. Fraction 1 requires 1 to 24 hours for maximum synthesis, is not dependent on marrow erythropoietic heme synthesis, and is possibly of anabolic origin (formed by a direct pathway from heme precursors). Fraction 2 requires 3 to 4 days for maximum production, is dependent on heme synthesis, and probably has its origin in the bone marrow, as a degradation product of red-cell heme.     

Bacteriophage and the toxigenicity of Clostridium botulinum type C

Nontoxigenic and bacteriophage-sensitive bacterial cultures have been isolated from toxigenic Clostridium botulinum type C, strain 468C, after treatment with either ultraviolet light or acridine orange. Two bacteriophages, designated CEbeta and CE(gamma), were isolated from toxigenic strain 468C. Both of these bacteriophages were capable of infecting the nontoxigenic type C cultures, but only bacteriophage CEbeta was involved in the change from nontoxigenicity to toxigenicity.     

Urea synthesis in the lungfish: relative importance of purine and ornithine cycle pathways

The relative importance of the purine pathway (uricolysis) and the ornithine cycle as routes for urea synthesis was assessed in isolated liver preparations from the African lungfish Protopterus dolloi. Incorporation of C(14)-labeled precursors into urea was used for comparison. Both pathways are present in the lungfish, but the ornithine cycle is quantitatively more important.     

一株酸马奶乳酸菌分子生物学鉴定及降解胆固醇试验研究

从新疆伊犁农牧民传统发酵的酸马奶中分离筛选到呈革兰氏染色阳性,秆状,编号为H-1的菌株.通过对此菌株进行形态观察和普通生理分析,并测定该菌株降解胆固醇的活力,通过16S r DNA序列分析表明,分离菌株H-1与Lactobacillus casei具有100;相似性,说明此菌株即为干酪乳杆菌.使用ClustalX1.8程序和Mega2程序将该菌株与报道的相关乳酸菌进行系统发育分析,揭示了16S r DNA序列分析在菌株鉴定的正确性.     

大肠杆菌工程菌利用甘蔗糖蜜发酵产L-乳酸研究

大肠杆菌HBUT-L来源于HBUT-D,因此具有快速利用蔗糖的特性。对HBUT-L利用蔗糖及甘蔗糖蜜发酵产L-乳酸的特性进行了研究。结果表明,该菌株在96 h的发酵过程中,可将100 g/L的蔗糖转化生成60.0 g/L乳酸,转化率达到74.0%,杂酸产量少,具有工业化开发潜力。在玉米浆培养基中可以直接添加未经处理的甘蔗糖蜜,发酵周期持续224 h,发酵液所得乳酸产量为87.0 g/L,发酵液残糖为28.6 g/L,但乳酸产率极低,仅为0.389 g/(L·h),后续将对甘蔗糖蜜预处理工艺进行研究,进一步提高乳酸发酵速度和产量。     

橡胶树白粉病菌在疏水介质表面的侵染特征和RNA提取

将白粉菌孢子接种到石蜡膜(parafilm)介质表面,观察不同温度条件下橡胶树白粉菌(Oidium heveae B.A.Steinmann)菌株孢子在疏水介质上的侵染过程,确定0~24 hpi孢子侵染结构发育特征,提取侵染发育过程白粉菌的总RNA,采用RT-PCK扩增分析18S保守基因并评价其质量。结果表明:橡胶树白粉菌孢子在15~34℃温度条件下接种于parafilm介质表面能萌发并形成附着胞,萌发和附着胞形成的适温范围22~28℃,最适离体诱导温度22℃。孢子在parafilm介质表面0~24 hpi(hour Post moculation)侵染发育过程可分为未萌发(0hpi)、萌发(4 hpi)、附着胞形成(6,8 hpi)和次生附着胞形成(16,24 hpi)等4个阶段;采用改良Trizol方法提取白粉菌孢子侵染发育过程4个阶段总RNA,可满足转录组文库要求,并扩增18S序列,进化分析显示其与白粉菌科物种为同一分支。结果表明,病原菌孢子在22~28℃温度条件下能够在介质表面形成侵染结构,0,4,6,8,16,24 hpi侵染发育阶段总RNA可用于转录组测序分析研究。     

葡萄酒中植物乳杆菌苹果酸-乳酸发酵潜能评价

【目的】研究植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)对赤霞珠葡萄酒进行苹果酸-乳酸发酵(Malolactic Fermentation,MLF)的过程,评价植物乳杆菌的苹果酸-乳酸发酵潜能,旨在开发潜在的葡萄酒植物乳杆菌商业苹果酸-乳酸发酵启动剂。【方法】以从新疆本土葡萄酒中筛选得到的糖苷酶活性较高的4株植物乳杆菌CS-1、XJ-14、XJ-25和XJA-2为研究对象,对未经过MLF的赤霞珠干红葡萄酒分别进行MLF,试验设置对照组(未进行MLF)。比较4株植物乳杆菌在葡萄酒MLF过程中菌株的生长情况、苹果酸含量的变化及MLF前后葡萄酒香气成分的差异,全面评价植物乳杆菌的苹果酸-乳酸发酵潜能。【结果】4株植物乳杆菌在葡萄酒MLF过程进行前6 d,菌密度均有较大幅度的下降,而接种6 d后,菌密度的下降趋势开始放缓;所有菌株均表现出良好的降酸能力,XJA-2的降酸能力略高于其余菌株,15 d内能够将葡萄酒中苹果酸浓度由2.3 g·L-1降至1.0 g·L-1左右,但所有菌株均未能完成MLF;菌株XJ-25处理组能够显著降低原酒中的生青味等不愉悦的香气并带来更加浓郁的花香及果香,XJ-14处理组同样能够降低葡萄酒的生青味,但花香果香相对XJ-25较弱,而菌株CS-1处理组和菌株XJA-2处理组均略微降低了原酒中的生青味,但由于化学味和植物味水平的提升,掩盖了原酒本身的花香和果香。【结论】利用植物乳杆菌XJ-25启动MLF有利于乙醇酯类香气物质的释放,增强了葡萄酒的果香及花香特征,相对于其余3株植物乳杆菌菌株更有利于提高葡萄酒香气质量。因此,植物乳杆菌XJ-25具有开发为商业发酵剂的潜能。     

Lineage relationship analysis of RORgammat+ innate lymphoid cells

Lymphoid tissue-inducer (LTi) cells initiate the development of lymphoid tissues through the activation of local stromal cells in a process similar to inflammation. LTi cells express the nuclear hormone receptor RORγt, which also directs the expression of the proinflammatory cytokine interleukin-17 in T cells. We show here that LTi cells are part of a larger family of proinflammatory RORγt(+) innate lymphoid cells (ILCs) that differentiate from distinct fetal liver RORγt(+) precursors. The fate of RORγt(+) ILCs is determined by mouse age, and after birth, favors the generation of cells involved in intestinal homeostasis and defense. Contrary to RORγt(+) T cells, however, RORγt(+) ILCs develop in the absence of microbiota. Our study indicates that RORγt(+) ILCs evolve to preempt intestinal colonization by microbial symbionts.     

中国蓝舌病病毒血清5型毒株的分离与鉴定

目的获取中国蓝舌病病毒血清15型(BTV-15)毒株的全基因组序列并分析其遗传特征。方法通过全长cDNA扩增与高通量测序技术获取中国1996年分离的BTV-15型毒株B105/YN/1996的全基因组序列,进行序列比对并构建系统发生树。结果序列分析结果显示：B105/YN/1996毒株基因组全长19 154 bp,各基因节段长度在822 bp (Seg-10)~3 944 bp (Seg-1)之间,编码蛋白大小在216 (NS3a 蛋白)~1 302 (VP1蛋白)个氨基酸残基之间。B105/YN/1996毒株的Seg-1、-2、-3、-4、-6与澳大利亚2012年分离BTV-15型毒株的对应基因节段之间具有最近的亲缘关系,Seg-7、-8、-9、-10则与中国BTV-15型V447毒株、BTV-4型YTS4毒株和BTV-1型Y863毒株的序列相似度最高;Seg-5与印度BTV-1型毒株IND1992/02具有最近的亲缘关系。在构建的系统发生树上,B105/YN/1996毒株的Seg-2与Seg-6归属于东方型,Seg-3与Seg-4则构成独立远东型;Seg-7、-10分别构成独立东方-1与东方-2型。结论中国BTV-15型毒株B105/YN/1996的不同基因节段在遗传进化上呈现高度多样性的特点,提示该毒株为基因重配毒株;该毒株的Seg-3、-4、-7、-10形成了独特的地域型,提示中国BTV-15型毒株在进化上的特殊性。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒FJ04A株的分离及其结构蛋白基因特性分析

从临床表现为繁殖障碍的猪群中分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)FJ04A株,用RT-PCR方法进行鉴定,扩增出该分离毒的结构蛋白基因并进行了序列测定.预测其推导的结构蛋白相对分子质量、等电点、抗原位点和糖基化位点等.序列比较结果表明:该分离毒ORFs2-7与美洲型代表株VR2332核苷酸同源性为98.1%-99.5%,氨基酸同源性为96.5%-99.2%;而与欧洲代表株LV的核苷酸同源性为57.3%-63.4%,氨基酸同源性为54.7%-77.6%.表明该分离毒为PRRSV美洲型毒株.     

健康犬肠道乳酸杆菌某些生物学特性的研究

从健康犬的肠道中分离并鉴定出5株乳酸杆菌,其中嗜酸乳杆菌3株、肠乳杆菌1株、发酵乳杆菌1株。根据其耐胆盐、生长表现等特性选择2株嗜酸乳杆菌（D1-3、D4-3）,作进一步的耐酸性、粘附性、抑菌作用等生物学特性试验。结果表明：D1-3和D4-3菌株能耐受高达6．0g／L的胆盐以及pH值低至2．0的酸性环境,对犬肠粘膜上皮细胞有良好的粘附性,其代谢产物对常见致病菌有较好的抑制作用,对小白鼠无毒性。     

丁草胺降解菌的分离鉴定及降解特性的研究

从处理农药生产废水的膜生物反应器中分离到一株能以丁草胺为惟一碳源和能源生长的细菌BD-1,经鉴定为施氏假单孢菌(Pseudomonas stutzeri).在纯培养的条件下测定了BD-1对丁草胺的降解性能.结果表明,在接种量为菌浓度OD415=0.2,pH7.0、30℃条件下,BD-l对丁草胺的降解符合一级动力学特征,1.0、10.0和100.0 rag·L的丁草胺的降解半衰期分别为0.11、0.60和0.96d.BD-1在不同pH及温度下对丁草胺的降解作用为pH 7.0>pH6.0>pH 8.0,30℃>20℃>40℃.GC/MS初步分析结果表明,丁草胺的主要微生物降解产物为2-氯-2',6'-二乙基乙酰苯胺和2,6-二乙基苯胺.     

Adenosine 3',5'-monophosphate, adrenocorticotropic hormone, and adrenocortical cytosol protein synthesis

In cultures of mouse adrenocortical tumor cells (Sato's minimal deviation Y-1 clonal strain), the acceleration of steroid biosynthesis after exposure to adrenocorticotropic hormone or cyclic adenosine 3',5'-monophosphate is maximum within 15 to 60 minutes and precedes any significant increase in labeling of protein with [4,5-(3)H]leucine. However, when cytosol proteins are separated by acrylamidegel electrophoresis, rapid changes in the amount and labeling of several protein fractions are evident in less than 30 minutes and are no longer evident within 60 minutes. This finding supports the proposal that the effects of tropic hormones and their intracellular mediators involve rapid selective effects on protein synthesis.     

金花茶花中木脂素类化学成分的分析

为了研究金花茶花中的木脂素类化学成分，采用硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱、C18反相色谱柱、半制备高压液相色谱等色谱方法对金花茶花的化学成分进行分离纯化，同时运用1H-NMR，13C-NMR，ESI-MS等多种波谱技术鉴定化合物的结构。共得到8个木脂素类化合物，分别鉴定为:1）桉脂素，2）(+)-diasyringaresinol，3）(+)-isoeucommin A，4）Pinoresinol 4-O-glucoside，5）7S, 8R, 8 ′R-(-)-lariciresinol-4′-O-D-glucopyranoside，6）(+)-Isolariciresinol 9-O-β-D-glucopyranoside,7）(+)-Isolariciresinol 9′-O-β-D-glucopyranoside，8）3′, 4-O-dimethylcedrusin。本实验8个木脂素类化合物均为首次从该植物中分离得到。     

D(--)-lactic acid and d(--)-lactate dehydrohgenase in octopus spermatozoa

The spermatozoa of Octopus dofleini martini produce anaerobically D(-)-lactic acid and possess a very active D(-)-lactate dehydrogenase. In this respect, while resembling certain microorganisms, they differ strikingly from mammalian spermatozoa which produce L(+)-lactic acid and contain L(+)-lactate dehydrogenase.