伊氏锥虫多因素致弱苗免疫机理的研究——补体在体液免疫和细胞免疫中的作用实验

用我室研制的伊氏锥虫多因素致弱苗免疫马血清中的补体，观察其灭活前后对体液免疫和细胞免疫的作用。结果：灭活补体的免疫血清，在体外试验，对锥虫形态活力不认异常；巨噬细胞对用灭活补体的免疫血清处理的锥虫吞噬率仅达８％；在体内试验，锥虫对小白鼠具有致病力，潜伏期为３～５ｄ，存活期为８～１６ｄ。未灭活补体的免疫血清，可使锥虫形态异常，活力减退、停止；用未被灭活补体的免疫马血清处理的锥虫，注射小白鼠可健活６０～７０ｄ，巨噬细胞对未用灭活补体的免疫马血清处理的锥虫吞噬率高达９１％。生物试验表明：被吞噬的锥虫均无感染力。从而看出补体在本虫苗的体液免疫和细胞免疫方面具有极为重要的意义。     

家畜伊氏锥虫多因素致弱苗免疫试验研究

用伊氏锥虫多用因素致弱免疫小白鼠３０只，在免疫后３０，４５，６０ｄ各取１０只小白鼠攻虫，保护率依次为９／１０，８／１０，６／１０；３次空白对照小白鼠均球 注锥虫后４－７ｄ死亡。免疫豚鼠３０只，在免疫后３０，６０，９０ｄ各取１０只豚鼠攻虫，保护率依次为１０／１０，９／１０，８／１０；３次空白对照豚鼠均于注锥诟１７－２３ｄ玖民。免疫马９区，在免疫后３０，６０，９０ｄ各取３匹马攻虫，均获３／３保护；继续     

猪大肠杆菌融合菌株R2灭活苗的研制及免疫试验

为了研究猪大肠杆菌融合菌株R2蜂胶灭活苗的免疫效果,试验以猪大肠杆菌原生质体融合菌株R2为菌种制备蜂胶灭活苗,采用肌肉注射方式免疫SPF小白鼠,以间接ELISA方法检测血清中IgG抗体水平,同时用2种不同血清型的猪大肠杆菌亲本菌株与免疫血清做玻片凝集试验,并对小白鼠进行攻毒保护试验。结果表明:该疫苗免疫性能较好,在免疫小白鼠后的第28,35天左右机体内的抗体水平达到最高值,融合菌株R2蜂胶灭活苗可对2种不同血清型的猪大肠杆菌亲本菌株的攻毒试验产生保护,而且安全性能良好,是一种效果较好的菌苗。说明融合菌株R2蜂胶灭活苗作为一种新型疫苗防控猪大肠杆菌病将成为一种可能。     

布氏锥虫马媾疫亚种体外培养的研究

用小白鼠腹腔巨噬细胞滋养层系统和无细胞培养系统成功地培养了布氏锥虫马媾疫亚种。开始建立无细胞培养系统培养时,从第6天起每日补种少量滋养层细胞系统培养的虫体,于3周内逐步建立了适应于无细胞培养系统的锥虫群体。长期连续培养两种系统培养物的虫密度均可稳定保持在7—10.O×10~5/ml左右,虫体有规律地呈岛屿状密集分布。培养液内2—ME和马血清的适宜浓度分别为0.3mM和20%,添加0.1mM次黄嘌呤可使培养物虫密度增加1倍左右,用烛罐可取代CO_2培养箱。体外连续培养120天。锥虫仍保持细长形态,具表面被膜,对小白鼠有感染性。     

伊氏锥虫在家兔体内的抗原变异和NaTat1．1—1．9九个群体的建立

以伊氏锥虫YNB2克隆感染家兔，于52天内，以一定间隔，用经环磷酰胺处理的小鼠由兔血分离锥虫，并予以克隆，获得9个抗原性互不相同的克隆群体。用此9个克隆群体分别免疫家兔制备免疫血清，与同源和各异源克隆群体作交叉免疫溶解和间接免疫荧光试验。结果证明，9个克隆群体是单一可变抗原型(VAT)，制备的血清是单价VAT特异血清。按国际通用命名法，依分离顺序命名为NaTat1．1～1．9(Najing rypanozoon antigen type 1.1～1.9).     

伊氏锥虫不同虫株免疫保护试验

伊氏锥虫在我国流行面广，因而地理株众多。在进行免疫诊断时，已发现用某株锥虫制成的抗原对其他株锥虫病的诊断出现敏感性和特异性不均一的现象［’1。王祥生等用异种锥虫进行了交叉兔疫试验’‘’。有关不同株锥虫之间交叉免疫保护试验，还未见有人研究，本试验对此作了初步探讨。材料与方法】．虫株新疆骆驼株（XJCA）和安徽水牛株（AHB）均为本实验室液氮保存。2．试验动物昆明系小白鼠30只，体重20g左右，雄性。购自上海医科大学实验动物中，乙。3．抗原制备保存于液氮中锥虫取出复苏后经小白鼠继代，大白鼠扩增后，按an－ham等（1…     

热应激对鸡免疫功能影响的研究

在不同热应激处理下分别用新城疫油乳剂灭活苗和Ｎ－７９弱毒苗免疫伊莎蛋用雏鸡，各试验组抗体效价和淋巴细胞转化率均有不同程度下降，高温处理２４ｈ的雏鸡，无论用油乳剂灭活苗还是用Ｎ－７９弱毒苗免疫，与对照组间无明显差异，高温处理４８ｈ的油乳剂灭活苗免疫组鸡，在免疫初期（免疫后８ｄ）抗体效价和淋巴细胞转化率均下降（Ｐ〈０．０５），以后逐渐上升，与对照组间无明业差异；而Ｎ－７９弱毒苗免疫鸡在整个试验期抗体效     

伊氏锥虫新疆株在动物体内抗原变异程序的观察

为了探明伊氏锥虫在动物体内抗原变异,以伊氏锥虫新疆株克隆感染兔,每３天采兔血１次,共采血５次,并用环磷酰胺处理的小白鼠对各分离期锥虫予以克隆,获得５个锥虫克隆群体,经ＡＢＣ－酶标试验和间接免疫荧光试验,对各克隆锥虫抗原进行鉴定,结果：获得５个表面抗原性互不相同的克隆群体,说明伊氏锥虫新疆株第１次抗原变异发生在４－６日内,以后每３天变异１次,本研究为进一步探明伊氏锥虫抗原变异规律打下了基础。     

伊氏锥虫抗独特型抗体疫苗的研究：Ⅲ.伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗独特…

用提纯的Ａｂ２制成免疫制剂，在大白鼠、小白鼠可诱导特异性ＶＳＧ抗体（Ａｂ３）。免疫保护试验结果表明，Ａｂ２制剂免疫动物对攻虫感染具有明显的保护效应。单独用抗独特型抗体免疫的小白鼠、大白鼠、豚鼠对５０条同型锥虫攻击的保护率分别为６０％，６０￣８０％，８０％；抗独特型抗体作为“引子”，可使小白鼠获得８０￣１００％的保护，对大白鼠和豚鼠和保护率为１００％。单独使用抗独特型抗体免疫的小白鼠对５个数量（２５     

理化因素对体外培养伊氏锥虫致弱的影响

本试验观察了理化因素（γ－射线、紫外线、低浓度杀虫药）对体外培养伊氏锥虫致弱的影响，结果如下：受γ－射线辐照的伊氏锥虫开始时存活数随辐照剂量的增加而减少，随后表现出无规律性，辐照剂量５万ｒａｄ以下对锥虫的存活影响较小，５～１０万ｒａｄ辐照后２ｄ锥虫的存活数明显减少，对小白鼠的感染性消失。伊氏锥虫受紫外线照射的存活曲线为“Ｃ”型，群体抗辐射不均一，平均致死剂量（Ｄ＿（３７））为波长２６５０Ａ的２０Ｗ紫外灯离样品４０ｃｍ处照射约２ｈ。虫体照射后根据体外跟踪观察，其存活数随照射剂量的增大而减少，照射了３ｈ和４ｈ第３天的活虫数近似１００条或不足１００条，对小白鼠的感染性均消失。用０．１μｇ／ｍｌ的苏拉灭和０．８μｇ／ｍｌ的贝尼尔两种低浓度杀虫药在体外对伊氏锥虫诱导４０ｄ仅造成药敏性的改变，未造成毒力减弱。     

伊氏锥虫抗独特型抗体疫苗的研究Ⅲ．伊氏锥虫变异表面糖蛋白抗独特型抗体的功能鉴定

用提纯的Ａｂ２制成免疫制剂，在大白鼠、小白鼠可诱导特异性ＶＳＧ抗体（Ａｂ３）。免疫保护试验结果表明，Ａｂ２制剂免疫动物对攻虫感染具有明显的保护效应。单独用抗独特型抗体免疫的小白鼠、大白鼠、豚鼠对５０条同型锥虫攻击的保护率分别为６０％，６０～８０％，８０％；抗独特型抗体作为“引子”，可使小白鼠获得８０～１００％的保护，对大白鼠和豚鼠的保护率为１００％。单独使用抗独特型抗体免疫的小白鼠对５个数量（２５，５０，１００，２００，４００）锥虫攻击的保护率分别为８０％，６０％，２０％，０％，０％，而作为“引子”免疫小白鼠对５个数量锥虫攻击的保护率分别为１００％，８０％，４０％，２０％，０％。这些结果表明，制备的兔抗独特型抗体（Ａｂ２）含有ＶＳＧ表位的内影像，具有模拟ＶＳＧ的功能，在实验动物体内可诱导主动免疫，因此可作为一种潜在的疫苗制剂为家畜伊氏锥虫病的免疫预防提供一个可能的途径。     

几种常用鸡油乳剂灭活苗免疫抗体监测及比较

用血凝抑制试验（ＨＩ）监测鸡新城疫（ＮＤ）－减蛋综合症（ＥＤＳ）－传染性支气管炎（ＩＢ）三联、ＮＤ－ＥＤＳ二联及ＮＤ油乳剂灭活苗免疫抗体水平动态，结果表明，以上疫苗免疫鸡群后第１６天ＨＩ抗体达峰值，维持２个月，至免疫后一年ＮＤ抗体不低于８Ｌｏｇ２；ＥＤＳ不低于６Ｌｏｇ２，ＩＢ不低于８Ｌｏｇ２。经ｔ检验结果表明除ＥＤＳ有两组差异显著外，各组之间免疫后一年，ＮＤ、ＥＤＳ和ＩＢ血清抗体差异均极不显著     

家畜伊氏锥虫灭活苗制备及免疫研究观察

4种佐剂制备的伊氏锥虫灭活苗，通过小鼠免疫筛选试验，发现Ⅳ号佐剂苗安全性好，免疫原性强，ES抗原在免疫保护中起重要作用。用Ⅳ号佐剂制备的湖北、江苏、广西株伊氏锥虫灭活苗，通过小鼠和家兔2次免疫，对同株虫体的攻击小鼠分别获得20／20、12／12和20／20的保护，并耐受第2、第3次攻击，免疫期长达3－5个月以上。家兔获得7／8保护，体重明显增加，中和凝集抗体效价1：10－80倍。对照小鼠、家兔全部发病死亡。     

间接荧光抗体试验诊断马骡伊氏锥虫病的研究

以人工感染伊氏锥虫的小鼠血液涂片为抗原,建立了IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体的方法,并对伊氏锥虫病马、同群马、健康马、非伊氏锥虫病马血清作了检测。伊氏锥虫病马和无症状同群马的抗体阳性率分别为97％(33/34)和12％(18/150);25匹健康马血清伊氏锥虫抗体均为阴性;84份非伊氏锥虫病马血清的IFA试验均为阴性,未出现交叉反应。多数病马发病一周内的血清IFA试验即为阳性。3匹病马血清抗体消长动态观察结果表明,病马于治疗后110天,血清IFA试验仍为阳性。本试验表明,IFA试验检测马骡伊氏锥虫抗体,敏感性高、特异性强,对无症状的感染马也能检出,可用于本病的早期诊断和血清流行病学调查。     

后海穴免疫猪瘟疫苗对小白鼠免疫机能的影响

在小白鼠后海穴、肌肉注射免疫猪瘟细胞培养活苗，观察不同免疫途径对小白鼠免疫功能的影响。结果：穴位及肌肉免疫后WBC总数均增高，但穴位免疫后第1天、7天高于肌肉免疫；淋巴细胞及T－淋巴细胞百分比，穴位免疫后第7天、10天高于肌肉免疫；血清中γ－球蛋白的百分含量，穴位、肌肉免疫后第1天、4天均增高，但穴位免疫后第7天、10天高于肌肉免疫组及对照组，而肌肉免疫与对照组间已无明显差异。这一实验结果表明：后海穴免疫猪瘟疫苗对免疫机能的影响优于常规免疫。     

伊氏锥虫单虫克隆的2个变异体的VSG的交叉免疫保护试验

为了考察同一克隆锥虫的不同变异体的可变糖蛋白分子 (VSG)有无交叉免疫作用 ,首先采用蛋白酶抑制剂TLCK处理 ,分离纯化伊氏锥虫安徽株单虫克隆 2个早期变异体ShTat1 1、ShTat1 2的VSG ,然后采用这 2种VSG进行交叉免疫保护试验。试验鼠分为对照组 ,ShTat1 1VSG免疫组 ,ShTat1 2VSG免疫组。用弗氏佐剂按常规进行 3次免疫注射 ,每次抗原用量均为 50 μg/只。三免后第 1 2天 ,将各组小白鼠随机分为 2个小组 ,分别用ShTat1 1、ShTat1 2攻击 ,每只攻虫 1 50 0条。结果攻虫后的对照鼠及异源攻虫后的免疫鼠尾血最早出虫时间均为攻虫后第 3天 ;同源锥虫攻击后免疫鼠的尾血最早出虫时间为第 6天。对照组经攻虫 ,保护率均为 0 /8;免疫鼠经交叉攻虫 ,保护率均为 0 /8;VSG免疫鼠用同源锥虫攻击 ,保护率分别为 5/1 0和 3/1 0。表明各VSG激发的免疫只能抗同源锥虫的感染 ,对异源锥虫感染无保护力     

家畜布氏杆菌病高度免疫血清之试制及其免疫效果的观察

按照作者略加修改的氏法,利用马牛各二头进行布氏杆菌病高度免疫血清的试制,所制备之血清应用小白鼠和绵羊作被动免疫试验,在注射血清24—48小时后,注射强毒布氏杆菌,然后观察小白鼠的发病死亡与绵羊体内的保菌情况;结果小白鼠保护力在牛源血清效果良好,马源血清效果较逊;用牛源血清免疫的6只绵羊中,检出病菌者仅2只,未免疫者2只,则全部检出病菌。试验结果表明所制备之血清有一定之被动免疫效果,牛源血清之效果较马源血清为高。     

犬疱疹病毒灭活苗的免疫试验

用分离的犬疱疹病毒ＭＤＣＫ细胞培养物，加福尔马林灭活后制成灭活苗，对怀孕３０天的母犬以６天的间隔作４次免疫，所生仔犬可获保护。用分离的强毒对怀孕５０天的母犬实验感染，其仔犬也受到保护。当母犬血清中抗犬疱疹病毒的中和抗体２×以上时，其所生仔犬可通过被动免疫获得对犬疱疹病毒的抵抗力。给生后１～２日龄的仔犬注射２～６ｍｌ免疫血清，可使仔犬获得免疫。     

测定鹅大肠杆菌灭活苗效价的两种简易方法

根据致病性大肠杆菌的部分菌株能致死小白鼠和对鸡红细胞凝集作用等特性,试用小白鼠保护试验及对红细胞凝集抑制试验,并以免疫成年鹅作对照进行对比试验.结果表明,接种灭活苗的成年鹅、小白鼠及注射高免血清的小白鼠均能耐过强毒的攻击;而这两种免疫动物的血清对鸡红细胞凝集有抑制作用。三者之间有着一致的关联性.因此利用小白鼠保护试验或鸡红细胞凝集抑制试验,都能测出灭活菌苗的效价和鹅群的免疫水平。这两种方法具有准确、快速、简便及经济等优点.     

鸡新城疫—减蛋综合征蜂胶佐剂灭活二联苗的研究

首次用蜂胶作为佐剂，研制出鸡新城疫－减蛋综合征（ＮＤ－ＥＤＳ）二联灭活 ，在开产前１个月左右，用该苗按０．５ｍｌ／只的剂量皮下或肌肉注射免疫蛋鸡，接种后２０ｄ测ＮＤ抗体（ＨＩ法）效价为６．２５－７．０（ｌｏｇ２，）ＥＤＳ－７６抗体（ＨＩ法）效价为６．５－８．０，用ＮＤ－ＥＤＳ油乳剂灭活二联苗做对照，进行免疫持续期平行测定对比试验，免疫后１８０ｄ，蜂胶苗免疫组鸡的ＮＤ抗体滴度为８．５－８．７，ＥＤＳ