膜荚黄芪和蒙古黄芪的RAPD指纹图谱分析研究

利用RAPD标记对膜荚黄芪和蒙古黄芪进行了指纹图谱的研究.采用BSA法从100个10碱基随机引物筛选出7个在膜荚黄芪基因池和蒙古黄芪基因池中表现多态性的引物.单株检测表明,引物OPC06具有膜荚黄芪特异性,在检测的膜荚黄芪个体中均能扩增出1条710 bp左右的特异带,而在蒙古黄芪的单株中未见扩增特异带,因此,将该膜荚黄芪扩增特异性条带命名为OPC06-710.试验表明,利用RAPD标记可在分子水平上达到快速、准确、可靠地鉴定膜荚黄芪和蒙古黄芪的目的.     

蒙古黄芪种子发芽特性的研究

为了探讨电导法在种子发芽活力快速检测中的应用,研究14份的蒙古黄芪种子表观形态学特征、吸水率、硬实率、生活力和电导率和发芽率之间的相关性。结果表明,种子的表观形态学特征与种子的发芽率之间不存在明显相关性。种子吸水率和发芽率呈负相关(r=-0.878 9);种子硬实率和发芽率呈正相关(r=0.723 7);种子生活力与发芽率呈正相关性(r=0.939 6);种子电导率与发芽率之间呈负相关(r=-0.959 4)。种子活力和电导率都与种子发芽率呈较高相关性,但是电导率测定方便快捷,可作为大批蒙古黄芪种子活力水平快速探测的一种技术手段。     

蒙古黄芪种子质量检验方法研究

以不同产地蒙古黄芪为试验材料,开展了蒙古黄芪种子质量检验方法的研究。结果表明,蒙古黄芪种子净度分析送检样本最少200 g,试验样本最少20 g;真实性检验采用种子外观形态比较;质量测定采用百粒法;含水量测定采用高温烘干4 h;发芽前进行机械磨损,25℃浸种8 h,以滤纸为发芽床,25℃恒温条件下萌发,发芽首末计数时间为1~4 d;生活力测定采用TTC染色法。     

膜荚黄芪与蒙古黄芪叶显微特征比较研究

对膜荚黄芪和蒙古黄芪的叶片表皮和解剖结构作了对比研究。结果表明:膜荚黄芪与蒙古黄芪气孔主要分布在下表皮,而上表皮分布少;膜荚黄芪下表皮气孔数明显多于蒙古黄芪;二者气孔器均属无规则型。叶脉由木质部、韧皮部、形成层、机械组织和薄壁组织组成。二者叶肉都有栅栏组织和海绵组织分化,属两面叶。蒙古黄芪栅栏组织厚度/海绵组织厚度比值明显高于膜荚黄芪,表现出抗旱的特性。     

蒙古黄芪种质资源研究进展

从资源分布、形态多样性、引种栽培、新品种选育以及野生资源恢复等方面综述了黄芪种质资源的研究进展。并建议通过适宜地引种和优良新品种选育,提高栽培蒙古黄芪的品质。此外,还要加强野生蒙古黄芪资源的保护和恢复。     

蒙古黄芪的组织培养及辐射诱变研究

[目的]研究蒙古黄芪的组织培养技术及辐射诱变对愈伤组织诱导的影响。[方法]以蒙古黄芪无菌苗的不同外植体（叶片、子叶、下胚轴）进行愈伤组织诱导,并对子叶和下胚轴进行辐射诱变研究。[结果]3种外植体分别在MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 2.0 mg/L、LS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.1 mg/L、MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 2.0 mg/L培养基上的愈伤组织诱导率较高 下胚轴和子叶的最佳诱变时间均为15 min 随辐射诱变时间的增加,下胚轴愈伤组织的长势增强,但超过一定的诱变时间愈伤组织长势减弱且诱导率降低。[结论]该研究为蒙古黄芪的组织培养和诱变育种提供科学依据。     

蒙古黄芪总DNA提取方法的改进研究

[目的]改进蒙古黄芪（Astragalus membranaceus var.mongholicus）总DNA的CTAB提取法。[方法]以蒙古黄芪为试验材料,通过提取试验研究了利用改进CTAB法从植物组织中提取总DNA的效果。[结果]提取DNA的凝胶电泳图谱上呈现出清晰、整齐的条带且拖带较少,说明所提DNA的纯度较高,质量较好。利用改进CTAB法提取的DNA进行trnS-trnG扩增的产量高,说明提取的DNA可用于测序等后续分析。用提取的基因组DNA为模板,用多对特异性ISSR引物对其进行PCR扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱表明各基因组DNA均扩增出多态性谱带,且带型清晰,易区分,说明利用提取的基因组DNA进行ISSR分子标记检测的效果良好。[结论]改进CTAB法可有效消除次生物质对DNA的干扰,提取的基因组DNA可用于叶绿体trnS-trnG测序分析和ISSR分子标记分析。     

蒙古黄芪变异类型的主要性状及有效成分含量比较

研究了蒙古黄芪3种变异类型一年生、二年生的主要性状及品质.结果表明.高个大叶型和中间型的地上茎、叶性状及生长势均较矮个小叶型蒙古黄芪有较大的优势,矮个小叶型有一定的抗倒伏性优势.3种蒙古黄芪的甲苷含量均表现为二年生显著高于一年生,且均超过《中华人民共和国药典》的标准.其中二年生矮个小叶型的甲苷含量最高,为1.74 g/...     

蒙古黄芪黄芪甲苷与金属元素含量的关系分析

【目的】分析蒙古黄芪黄芪甲苷含量与植物、土壤中金属元素含量的相关性,以及土壤-植物系统中金属元素间的关系,为蒙古黄芪的种植与品质提升提供参考。【方法】选择7个蒙古黄芪种植区,取蒙古黄芪种植区土壤,采用高效液相色谱 蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)检测其中的黄芪甲苷含量,通过电感耦合等离子体质谱（ICP MS）技术检测黄芪与土壤中的金属元素含量,分析不同产地蒙古黄芪中黄芪甲苷含量与金属元素的相关性。【结果】7个蒙古黄芪种植区中,黄芪甲苷含量以内蒙赤峰元宝山下坎村种植区最高,内蒙古固阳县下湿壕种植区最低。蒙古黄芪根中各金属元素含量从高到低依次为 K＞Mg＞Fe＞Al＞Ca＞Cr＞Mn＞Zn＞Cu＞As＞Pb＞Cd,其中Cr元素在黄芪中大量富集;土壤中金属元素含量从高到低依次为Al＞K＞Fe＞Mg＞Ca＞As＞Mn＞Pb＞Cr＞Zn＞Cu,7个种植区As元素含量均严重超标,4个种植区Pb元素含量也出现超标。蒙古黄芪根中的金属元素含量间、土壤中的金属元素含量间及根中与土壤中的金属元素含量间相关性均较好。其中蒙古黄芪植株中的Ca、Pb、As元素含量与土壤中的Ca、Pb、As元素含量呈显著负相关（P<0.05）,植株中的K、Zn元素含量与土壤中的K、Zn元素含量呈显著正相关（P<0.05）;蒙古黄芪根中的黄芪甲苷含量与其根中的Mg、Cu、Cd含量及土壤中的Ca元素含量呈显著正相关(P<0.05）。【结论】蒙古黄芪及其栽培土壤中的金属元素间存在一定相关性,二者金属元素间的协同或拮抗作用共同调节黄芪甲苷的积累。     

蒙古黄芪对N、P、K的肥效响应

采用三因素二次D-饱和最优设计,研究N、P、K及其配比对沙地1a生蒙古黄芪的株高、根长、根直径、根干质量等生物学特性及皂苷、黄酮、多糖次生代谢物和Fe、Mn、Cu、Zn微量元素质量分数的影响,利用主成分分析其最佳施肥用量。结果表明:氮肥有助于黄芪株高的增高,但施肥量过高黄芪株高反而降低,以氮钾配施处理(N2K2)的株高最高,较对照增加51.93%;磷肥和钾肥能促进根的生长发育,其中氮、磷、钾施肥量分别为79.41、150和225kg/hm~2处理(N1P3K3)的效果最佳,其根直径与根干质量分别较对照增加58.42%和43.87%。施肥能显著提高蒙古黄芪皂苷和多糖的质量分数,以氮、磷、钾施肥量分别为225、150和79.41kg/hm~2处理(N3P3K1)的效果最好,其皂苷和多糖的质量分数分别较对照增加118.52%和13.14%;单施氮肥(N3)和单施磷肥处理(P3)均不利于黄酮的积累,其黄酮质量分数分别较对照降低7.56%和6.46%。对于微量元素,施肥能促进黄芪Mn的积累,对Cu、Zn影响不大,单施钾肥处理(K3)使得黄芪Fe元素质量分数降低。此外,结合蒙古黄芪的次生代谢物及微量元素的主成分分析,最终得出该地区蒙古黄芪的最佳施肥用量为氮(N)、磷(P2O5)、钾(K)分别为79.41、150和225kg/hm~2。     

施肥对膜荚黄芪生长及黄芪甲苷含量的影响

【目的】探究不同氮、磷配比对药用植物膜荚黄芪生长和黄芪甲苷积累的影响,为延安地区黄芪施肥和品质评价提供参考。【方法】采用田间试验设置不同氮磷施肥配比,共设10个处理,分别为N0P0(对照)、N1P1、N1P2、N1P3、N2P1、N2P2、N2P3、N3P1、N3P2、N3P3(N0、N1、N2、N3分别表示施用0,120,150和180kg/hm~2尿素;P0、P1、P2、P3分别表示施用0,450,600和750kg/hm~2过磷酸钙),测定不同处理黄芪茎直径、株高、冠幅、根长、根直径和干物质积累,衡量黄芪生长状况;同时测定不同处理黄芪水分、灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物和黄芪甲苷含量,探讨施肥对黄芪品质的影响。【结果】不同氮、磷配比对黄芪生长各指标影响不同。茎直径的适宜施肥方案为N2P1和N3P1处理,而N1P3和N2P3处理的株高、冠幅、根长和根直径等指标响应最优。N1P3处理黄芪终极生长量最高,较对照N0P0增加24.87%;N2P1和N2P3处理次之,对照最低。各施肥处理干物质累积总量比对照增加18.18%～70.06%,平均增加44.12%。施氮量为120和150kg/hm~2时,施磷量对黄芪水分含量的影响总体表现为:450kg/hm~2600kg/hm~2750kg/hm~2,但水分含量对氮肥响应不明显;灰分含量总体随氮磷肥施用的增加而降低;在施氮量为120～150kg/hm~2时,水溶性浸出物、醇溶性浸出物和黄芪甲苷含量总体随施磷量的增大而升高,施氮量高于150kg/hm~2时,随施磷量的升高而降低;在N1P3和N2P3施肥水平下,黄芪甲苷含量分别较对照组提高了36.36%和48.48%。【结论】合理配施氮磷肥可促进黄芪生长、干物质积累和品质提高,且以N1P3和N2P3处理效果较佳。     

4种微量元素对蒙古黄芪幼苗形态建成及抗逆性的影响

微量元素在种子萌发过程中通过影响种子内的酶系统,促进种子内贮藏物质的分解,影响种子的萌发和幼苗的生长、生理。以蒙古黄芪(Astragalus membranaceus Bge.)为对象,研究Fe、Zn、Mn、Cu对蒙古黄芪种子萌发、幼苗生长和部分生理特性的影响。结果表明,一定质量浓度的微量元素处理能够显著促进蒙古黄芪种子的萌发,提高种子活力,促进黄芪幼苗的生长。进一步的研究表明,200mg/L FeSO4、50mg/L ZnSO4、250mg/L MnSO4和200mg/L CuSO4处理的黄芪幼苗子叶叶绿素含量最高;800mg/L FeSO4、50mg/L ZnSO4、500mg/L MnSO4和200mg/L CuSO4处理的黄芪幼苗根系相对电导率最低,根系活力最佳,说明微量元素处理减少了黄芪幼苗根系质膜所受的伤害,提高了根系抗逆性;400mg/L FeSO4、100mg/L ZnSO4、125mg/L MnSO4和25mg/L CuSO4处理的黄芪幼苗SOD和POD活性最佳。说明一定质量浓度的微量元素处理能够提高黄芪幼苗的抗逆性。     

益生菌FGM葡萄糖激酶基因（glcK）在黄芪发酵中的表达

旨在分析益生菌FGM在黄芪发酵过程中的生长动态,为阐述其作用机理奠定基础。采用平板计数法对益生菌FGM在黄芪发酵中的生长动态进行检测,同源克隆法克隆糖酵解途径中的限速酶葡萄糖激酶glcK基因序列,并运用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR技术分析其在黄芪发酵不同阶段的表达水平。结果表明：成功克隆得到glcK基因一段382 bp的片段（GenBank登录号JX976291）,其序列一致性为83%～85%。实时荧光定量PCR结果显示,在FGM发酵6 h内,glcK基因表达上调且呈逐渐上升趋势,至对数期后期6 h表达水平达到最高（4.63倍）;稳定期初期8 h时表达水平显著下降（P<0.05）,10 h至发酵结束基因表达下调。可见：在黄芪发酵6 h内FGM处于对数生长期,葡萄糖经糖酵解途径代谢产生ATP供细菌生长代谢利用,10 h后开始进入稳定期并进行次级代谢。     

黄芪根腐病生防菌株的筛选鉴定及其防效评价

以沙棘根瘤内生细菌为材料,筛选对黄芪根腐病具有生防效果的菌株,以期为黄芪根腐病的生物防治提供优质菌种。采用平板对峙法,筛选得到抑菌性能较强的沙棘根瘤内生细菌TT14,并检测其对4株黄芪根腐病原菌的抑菌活性;根据形态和培养特征,生理生化特性及16S rRNA基因序列分析,对菌株TT14进行鉴定;通过盆栽试验,测定菌株TT14发酵液对黄芪根腐病的防治效果。结果显示,25株沙棘根瘤内生细菌中,11株具有抑制黄芪根腐病的能力,其中5株对供试的4株黄芪根腐病病原菌都表现出较好的抑菌效果,在这5株内生菌中TT14抑菌效果最佳,其对4株病原菌的抑菌率均在54.52%以上;经鉴定菌株TT14为特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis);盆栽试验显示菌株TT14发酵液对黄芪根腐病有明显的生防效果,其防治效果达65.68%,较对照组提高38.08%。综上可见,沙棘根瘤内生细菌TT14具有较强的抑制黄芪根腐病的活性,并具有较好的生防效果。     

肥料种类及其不同施用方式对黄芪有机生产的影响

为探索适合中药材有机生产的施肥技术,以山西省道地药材-黄芪（Astragalus membranaceus （Fisch.） Bunge）为研究对象,在山西省灵丘县设置化肥（C）、有机肥（O）、有机肥+矿物肥（OM）、有机肥+矿物肥+微生物肥（移栽时蘸根）（OMD）、有机肥+矿物肥+微生物肥（盛花期灌根）（OMI）、有机肥+矿物肥+微生物肥（盛花期喷施）（OMS）6个处理对二年生黄芪的生长发育、产量、品质和土壤微生物影响的研究。结果表明：OMD地下部产量最高,较C处理产量提高13.25%,较O处理产量提高了35.75%;OMD处理可以显著提高黄芪多糖和总黄酮的含量,较CK处理分别提高了20.88%和98.50%;OMD和OMI处理对根体积、根长和根系干物质积累的促进作用显著高于C处理;土壤微生物高通量测序结果表明,OMD处理提高了土壤中放线菌门（Actinobacteria）和绿弯菌门（Chloroflexi）丰度。综合考虑得出有机肥+矿物肥+微生物肥（移栽时蘸根）为最优处理方式。     

黄芪内生真菌中甲醛降解菌的筛选及降解特性

旨在从黄芪中筛选出降解甲醛的内生真菌。采用形态学分析和序列比对分析鉴定内生真菌,并利用单因素法研究不同因素处理对菌株AL06降解甲醛特性的影响。结果表明,菌株AL06属于溜曲霉Aspergillus tamarii,通过单因素试验分析培养条件对菌株降解甲醛的影响,得出菌株AL06降解甲醛的最适条件为:甲醛质量浓度200mg/L,pH 7.0~7.5,培养温度28~30℃,摇床转速160r/min。     

水分胁迫对蒙古黄芪生理特性的影响

研究了蒙古黄芪在水分胁迫条件下其保护酶系统(SOD、POD、CAT和APX)、丙二醛、超氧阴离子、可溶性蛋白和脯氨酸的变化。结果表明,3种处理下SOD活性上升规律相似,其活性大小为重度干旱(SD)中度干旱(MD)适宜对照(CK);MD和SD中CAT活性在胁迫初期不断升高后期开始降低,POD和APX活性初期缓慢升高后期大幅升高。MD和SD中超氧阴离子在后期开始升高且升高幅度高于CK。丙二醛含量初期和后期都有较大降幅。可溶性蛋白在胁迫初期显著升高,后期SD中可溶性蛋白含量变化较大。SD中脯氨酸含量积累明显。研究结果认为,在外部环境变化后,蒙古黄芪的保护酶系统和渗透调节物质会发生变化以适应外部环境,维持植株的正常生理代谢,具有较强的耐旱能力。     

紫外线和亚硝基胍对益生菌FGM发酵提取黄芪多糖的影响

旨在评价紫外线(UV)和亚硝基胍(NTG)诱变处理对菌株FGM发酵提取黄芪多糖的影响。分别用适量UV、NTG、UV+NTG诱变处理对数生长期的益生菌株FGM,筛选生长性能较好的诱变株发酵中药黄芪,水提醇沉发酵产物中的粗多糖,苯酚―硫酸法测定多糖质量分数。结果显示,UV处理90s得到的诱变菌株U90发酵黄芪后,产物中多糖质量分数比其他诱变剂量较高,为235.51mg/g,与诱变前相比增加58.13%;1.0g/L的NTG处理菌株10min后,得到的诱变株N1-1发酵黄芪后,产物中多糖质量分数比其他剂量高,为161.2mg/g,与诱变前比较增加10.64%;UV照射10s后,再用1.0g/L的NTG处理10min,得到的诱变菌株UN10-1发酵黄芪后,产物中的多糖质量分数为293.39mg/g,较诱变前增加了94.99%;UV照射10~120s所得的菌株发酵黄芪后产物中多糖质量分数均呈升高趋势,而NTG处理所得菌株发酵黄芪后产物中多糖质量分数变化无规律性。由此可见,UV和NTG诱变均有改善益生菌株FGM发酵提取黄芪多糖的作用,但NTG改善菌株发酵性能不明显,适量UV照射结合一定浓度NTG诱变所得的菌株发酵提取黄芪多糖的性能优于UV和NTG单独作用。     

引发对黄芪种子萌发及幼苗抗旱性的影响

本研究目的在于分析种子引发处理后黄芪发芽特性及幼苗抗旱性，探索提高黄芪种子萌发率的方法，为人工栽培黄芪提供技术支撑。采用20% PEG-6000、0.25% KNO₃、100 mg·L^-1 GA3、12.5 mg·L^-16-BA及H₂O（对照）5种化学物质引发处理黄芪种子，进行萌发试验及干旱胁迫，测定种子萌发特性及有关抗旱生理指标。结果表明：各处理发芽势、发芽率的一致顺序为12.5 mg·L^-16-BA ＞100 mg·L^-1 GA3＞0.25% KNO₃＞20% PEG-6000＞H₂O。幼苗丙二醛(MDA)含量、可溶性蛋白含量、脯氨酸含量、叶绿素含量、超氧化物歧化酶活性（SOD）、过氧化物酶活性（POD）和过氧化氢酶活性（CAT）与CK之间存在显著差异。比较各处理黄芪幼苗的隶属函数平均值可看出，不同引发处理黄芪种子，幼苗的抗旱性顺序为H₂O＞20% PEG-6000＞0.25% KNO₃≈12.5 mg·L^-1 6-BA＞CK＞100 mg·L^-1 GA3。结论：采用20% PEG-6000或0.25% KNO₃作为引发剂处理黄芪种子，可有效促进黄芪种子萌发和提高幼苗抗旱性。     

党参和黄芪根际土壤水浸液对亚麻种子萌发和幼苗生长的化感效应

为了探讨党参和黄芪根际土壤水浸液对亚麻的化感作用,采用生物测定方法,研究党参和黄芪根际土壤水浸液在0.5、0.25、0.125和0.062 5g·mL-1 4个质量浓度下对亚麻种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明,2种草药根际土壤水浸液对受体亚麻种子吸胀过程中相对吸水量的增加有抑制作用,抑制程度随其质量浓度的升高而增强;亚麻种子萌发和幼苗生长在低质量浓度时表现为化感促进作用,在高质量浓度时表现为化感抑制作用,对亚麻幼苗渗透调节物质可溶性糖、丙二醛(MDA)和游离脯氨酸(Pro)含量都有显著影响。