红树莓对UVB诱导HaCaT光损伤的抑制作用

为研究红树莓对中波紫外线(UVB)诱导的人表皮角质形成细胞(HaCaT)光损伤的抑制作用,用20、40、80mg/mL3个不同剂量的红树莓果汁预处理人永生化表皮角质形成细胞(HaCaT细胞)6h,再采用60mJ/cm2强度UVB照射细胞;用MTT法检测细胞的生存率,采用比色法检测细胞中丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH–Px)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性,用荧光法检测细胞内活性氧自由基(ROS)的含量,用倒置显微镜和流式细胞仪观察、检测细胞的凋亡状况。结果表明:UVB辐射对HaCaT细胞造成比较严重的损伤;相比于空白对照组,UVB辐射模型组HaCaT细胞活性下降了29.54%,SOD和GSH–Px活性极显著降低(P0.01);相比于模型组,红树莓各剂量组可显著提高UVB照射后HaCaT细胞的活性(P0.05或P0.01),提高SOD和GSH–Px活性(P0.01),减少MDA和ROS含量(P0.05或P0.01),降低LDH活性和增加Hyp含量(P0.01),呈剂量依赖关系,减轻UVB所导致的细胞损伤,凋亡率降低。红树莓可以明显减少UVB诱导HaCaT细胞的氧化损伤和凋亡,具有显著的光保护功效,其作用机理与增强细胞抗氧化能力、加速清除氧自由基以及促进胶原蛋白合成有关。     

紫外线诱导家蚕胚胎细胞BmE-SWU1的凋亡研究

UVB诱导家蚕胚胎细胞BmE-SWU1不同时间后,用四氮唑盐法(MTT)和Hoechst染色及DNA-Ladder法分别检查BmE-SWU1细胞的增殖活性和凋亡情况.该实验研究了紫外线诱导对家蚕胚胎细胞BmE SWU1凋亡的影响,建立了紫外线诱导家蚕细胞凋亡的简单模型,为家蚕变态发育过程中细胞凋亡的研究奠定了基础.结果表明:UVB处理家蚕BmE-SWU1细胞后,细胞增殖活性随着照射剂量的增加而逐渐降低;光学显微镜下可见细胞膜表面突出或出现小泡,经Hoechst染色后,凋亡小体在荧光显微镜下清晰可见,细胞DNA电泳条带呈梯形分布,这是凋亡细胞典型的生化特征.     

咖啡因对UV诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用及机制

[目的]研究咖啡因对UV诱导的HaCaT细胞氧化损伤的影响及其作用机制.[方法]用UV诱导HaCaT构建氧化损伤模型.将HaCaT设置对照组、UV损伤组、不同浓度(50、100 μg·mL-1)咖啡因组.结晶紫染色检测细胞生长;特定活性氧指示剂测定胞内及线粒体内活性氧含量;Western blot检测p-p38、p-E...     

过氧化物还原酶Ⅱ在热损伤诱导HaCaT细胞凋亡中的保护作用

探究过氧化物还原酶Ⅱ(PeroxiredoxinⅡ,PrxⅡ)在热损伤诱导皮肤角质细胞HaCaT细胞凋亡中的调控作用。利用慢病毒转染技术构建Prx Ⅱ基因敲降细胞系,采用MTT法检测细胞存活率,荧光显微镜照相技术检测细胞凋亡情况及活性氧水平,蛋白质免疫印迹法检测蛋白质表达水平,并对比分析基因敲降细胞和正常细胞的各项指标差异。结果显示,热损伤处理的PrxⅡ基因敲降细胞的凋亡率及活性氧水平均明显高于热损伤处理的正常细胞,凋亡相关蛋白质表达水平均有显著性差异。证明PrxⅡ可利用清除活性氧的功能来调节Bcl-2的表达、caspase-3的活化从而有效缓解热损伤HaCaT细胞的凋亡。     

柚皮素对H2O2诱导的HaCaT细胞氧化损伤的作用

[目的]研究柚皮素(Naringenin,NAR)对人永生化角质形成细胞(HaCaT cells)氧化损伤的作用.[方法]用MTT检测细胞活性;H&E染色观察柚皮素处理对氧化损伤HaCaT细胞形态的影响;划痕检测细胞迁移能力;克隆检测细胞增殖;蛋白免疫印迹检测蛋白表达量;氧化试剂盒检测SOD和MDA水平.[结果]柚皮素...     

树莓果油抑制UVB诱导HaCaT细胞光老化的作用研究

【目的】探究树莓果油对中波紫外线(UVB)诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT)光老化的抑制作用。【方法】采用超临界CO₂流体萃取技术提取树莓果油后,通过气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析其化学成分。建立HaCaT的UVB光老化模型,通过CCK-8法检测细胞存活率,用酶联免疫吸附法(ELISA)和微板法测定被UVB损伤的HaCaT细胞中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、硫氧还蛋白(Trx)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量。【结果】GC-MS分析显示,树莓果油中含有脂肪酸、脂肪酸酯、生育酚、甾醇等53种化学成分,其中油酸、亚油酸、Z-9-油酸乙酯、维生素E和谷甾醇与其抑制UVB诱导HaCaT细胞的光老化密切相关。抗光老化活性研究发现,与模型组相比,树莓果油能明显提高UVB辐射后HaCaT细胞的存活率(P<0.01),且具有明显的剂量依赖关系。此外,树莓果油能明显升高UVB诱导的HaCaT细胞中COL1A1的含量且降低MMP-3的含量...     

金耳子实体不同提取物的抗氧化性和对PC12细胞氧化损伤的保护作用

采用不同极性的溶剂对金耳子实体进行连续提取分离,利用化学发光法和H2O2诱导PC12细胞氧化损伤保护模型,对提取得到的氯仿相、乙酸乙酯相、乙醇相等部位进行体外抗氧化活性和氧化损伤保护作用的测定.结果表明:氯仿相具有较强的抗氧化活性,三种提取部位对H2O2自由基的清除作用均高于对超氧自由基的清除作用;乙醇相对由H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用最强,且呈现明显的浓度依赖性.金耳子实体的氯仿相是其抗氧化活性的主要有效部位,乙醇相是保护PC12细胞氧化损伤的主要有效部位.     

花椒提取物对人胃癌细胞增殖及凋亡作用的研究

[目的]观察花椒提取物影响人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的作用。[方法]体外培养胃癌SGC-7901细胞,并用M1T法检测花椒提取物对肿瘤细胞生长的抑制作用;用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。[结果]花椒提取物能显著地抑制胃癌SGC-7901细胞的生长,并且具有浓度、时间依赖性,且细胞有明显凋亡特征性改变。[结论]花椒提取物具有抗肿瘤细胞增殖和诱导其凋亡的作用,有潜在的抗肿瘤价值,值得进一步研究。     

山绿茶总黄酮对BPH模型大鼠前列腺细胞凋亡的影响

用去势大鼠注射丙酸睾酮建立前列腺增生模型,山绿茶总黄酮按80、402、0 mg.(kg.d)-1灌胃4周;分离前列腺组织,匀浆,制备单细胞悬液,流式细胞术测定细胞凋亡率;另取前列腺制备超薄切片,电镜下观察前列腺细胞超微结构,研究山绿茶总黄酮对大鼠前列腺增生模型细胞凋亡和超微结构的影响。结果表明:正常组前列腺细胞无明显凋亡;模型组前列腺细胞凋亡率较低;山绿茶总黄酮高剂量组,大鼠前列腺细胞凋亡率明显增高,与模型组比较,差异极显著(P0.01)。电子显微镜观察可见,山绿茶总黄酮组前列腺细胞核较完整,细胞核浓缩不明显,但其致密度增高,粗面内质网空泡减少;与对照组比较,超微结构变化不明显。说明山绿茶总黄酮可诱导前列腺细胞凋亡,因而抑制前列腺增生,对其超微结构有明显的改善作用。     

LPS诱导奶牛子宫内膜上皮细胞氧化损伤模型的建立

[目的]采用脂多糖(LPS)作为刺激源,建立奶牛子宫内膜上皮细胞(BEEC)氧化损伤模型.[方法]体外培养BEEC并进行细胞鉴定,用不同浓度的LPS刺激细胞,在不同时间点用CCK-8法测定细胞存活率,以确定BEEC氧化损伤模型条件.倒置显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)含量,比色法检测细胞中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT).[结果]与空白对照组相比,当LPS浓度为80μg/mL,作用时间为12 h时,造成细胞损伤,其细胞凋亡率、ROS产生量和MDA含量明显高于对照组,SOD和CAT活性显著低于对照组.[结论]建立奶牛子宫内膜上皮细胞氧化损伤模型的条件为LPS作用浓度80 μg/mL,作用时间12 h.     

茶多酚对氧化应激所致奶牛乳腺上皮细胞损伤的保护作用

用过氧化氢(H2O2)建立体外奶牛乳腺上皮细胞的氧化应激损伤模型,研究不同质量浓度茶多酚对氧化应激所致奶牛乳腺上皮细胞损伤的影响。MTT法检测细胞存活率,比色法检测细胞培养液中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,分光光度法检测天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活性。结果显示:与H2O2损伤模型组相比,20～100μg.mL-1茶多酚处理组的奶牛乳腺上皮细胞存活率、SOD活性显著升高,而MDA含量、LDH与Caspase-3相对活性与细胞凋亡率均下降,其中以100μg.mL-1茶多酚处理组效果最显著,说明一定质量浓度的茶多酚可以缓解氧化应激所致的奶牛乳腺上皮细胞的损伤,提高细胞存活率,抑制乳腺细胞凋亡。结论:茶多酚对乳腺上皮细胞氧化应激损伤具有保护作用,其保护作用可能与降低MDA含量,增强SOD活性及抑制Caspase-3活性有关。     

玉米幼芽提取物对小鼠皮肤成纤维细胞体外抗氧化能力的影响

分离培养小鼠皮肤成纤维细胞,将传代细胞均匀分成4组:Ⅰ组为空白对照组;Ⅱ组在培养体系中加入终浓度为200μm o l/L的H2O2作用2 h,复制氧化损伤模型;Ⅲ组和Ⅳ组分别用含20 m g/L的0501和0502号玉米幼芽提取物培养液培养24 h,然后再用Ⅱ组的处理方法对细胞进行氧化损伤,研究玉米幼芽提取物对皮肤成纤维细胞体外抗氧化效应的影响。结果表明,Ⅲ组和Ⅳ组细胞凋亡率极显著低于Ⅱ组(P<0.01);扫描电镜下Ⅱ组细胞的细胞膜出现皱缩穿孔等现象,Ⅲ组和Ⅳ组细胞完整性较好,细胞联系紧密;透射电镜观察,Ⅱ组细胞粗面内质网扩张,染色质边集,细胞内出现大量空泡,Ⅲ组和Ⅳ组细胞结构清晰,出现轻度的粗面内质网扩张。表明富含腺嘌呤类衍生物的玉米幼芽提取物对体外培养的小鼠皮肤成纤维细胞具有抗凋亡保护作用,在细胞氧化损伤过程中,对细胞膜蛋白和结构性蛋白有保护作用。     

茶叶提取物EGCG和GCG及ECG对B16细胞内黑色素生成的抑制作用

为研究茶叶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)、没食子儿茶素没食子酸酯(gallocatechingallate,GCG)和表儿茶素没食子酸酯(epicatechingallate,ECG)对体外培养B16小鼠黑色素瘤细胞黑色素生成及酪氨酸酶活性的影响,分别用不同浓度的EGCG、GCG、ECG和熊果苷(Arbutin,AR)处理细胞,观察效应物对细胞形态的影响,用溴化二苯四偶氮法(MTT法)测定茶叶提取物对细胞增殖率的影响,以左旋多巴(L–DOPA)为底物,测定细胞内酪氨酸酶的活性,采用氢氧化钠裂解法测定细胞内黑色素的含量。结果显示,EGCG、ECG、GCG能显著抑制B16细胞的黑色素生成和酪氨酸酶的活性,且呈剂量依赖关系;当浓度为60μg/mL时,细胞增殖率均低于50%,酪氨酸酶活性与对照组相比分别降低了26.67%、27.27%和32.71%,黑色素生成抑制率均在30%以上。结果表明,茶叶提取物能通过多种途径抑制黑色素生成,且GCG的作用效果最优,ECG的作用效果次之,三者的作用效果均优于熊果苷的作用效果。     

乌龙茶水提取物对人大肠癌LOVO细胞增殖及凋亡的影响

以赛珍珠5800铁观音为材料,测定乌龙茶中水浸出物、茶多酚、游离氨基酸、可溶性糖、黄酮类物质、没食子酸、8种儿茶素和3种生物碱的含量;并将0、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg·m L~(-1)乌龙茶水提取物作用于体外培养的人大肠癌LOVO细胞中,分别处理24和48 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,并在倒置显微镜下观察细胞形态的变化;以0.6和0.8 mg·m L~(-1)乌龙茶水提取物处理LOVO细胞48 h,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,扫描电镜下观察细胞凋亡情况.结果表明,乌龙茶中各化学成分的含量均较高,水浸出物含量达40.8%以上,茶多酚含量14.2%,游离氨基酸含量1.8%,可溶性糖含量6.9%,黄酮类物质含量0.7%,儿茶素总量12.2%,咖啡碱含量1.7%,这些成分为其品质保证和功效发挥奠定了一定的物质基础.MTT法试验结果表明:0.2 mg·m L~(-1)乌龙茶水提取物对LOVO细胞生长无抑制作用;处理24和48 h后,0.4~1.0 mg·m L~(-1)乌龙茶水提取物对LOVO细胞生长的抑制率分别达13.9%~79.6%和16.4%~89.2%.0.6和0.8mg·m L~(-1)乌龙茶水提取物处理下LOVO细胞凋亡率分别为60.4%和62.3%,且低含量下细胞凋亡主要呈早期凋亡形式.扫描电镜观察显示,0.6和0.8 mg·m L~(-1)乌龙茶水提取物处理48 h后LOVO细胞出现明显的凋亡现象,细胞体积缩小,细胞间隙增大,表面微绒毛断裂、减少甚至消失,细胞膜表面出现塌陷,产生类似空洞的结构等.因此,乌龙茶水提取物能有效抑制人大肠癌LOVO细胞增殖,并可诱导其凋亡的发生.     

红碎茶滋味化学品质鉴定方法的研究

对肯尼亚红碎茶、云南碎二、海南碎二茶样的滋味品质进行化学评分方法试验,采用六因素五水平的正交试验处理,从中寻找出一种化学检测得分与感官审评评分相一致的组合.不同处理的试验结果与感官审评给分的趋向是一致的;经过极差与回归分析,选定实验号9、13和20,即A2B4C1D4E4F5、A3B3C2D3E5F5、A4B5C3D4E5F1,其化学滋味得分与感官评分相吻合.这3个试验都是比较好的组合.其中13号(A:15 min,B:20 mL,C:3 min,D:2.0 mL,E:0.5 mL,F:8.5)是最佳组合.     

玉米幼芽提取物对小鼠皮肤UVA照射损伤的保护作用

研究了玉米幼芽提取物(extract of maize plumule,EMP)对长波紫外线(UVA)损伤的小鼠皮肤超微结构、抗氧化酶活性及脂质过氧化作用的影响。结果表明,UVA模型小鼠真皮细胞内出现空泡变性,线粒体肿胀、嵴减少,粗面内质网和核周间隙扩张;表皮细胞微绒毛减少,细胞固缩,细胞核染色质边集。EMP保护的小鼠皮肤细胞损伤程度明显减轻,结构基本正常。EMP可显著提高UVA辐射小鼠皮肤组织中的SOD活性(P<0.01)及CAT活性(P<0.05),降低MDA含量(P<0.05),与VC的抗氧化作用一致。表明EMP能够抵抗UVA对皮肤组织的氧化损伤。     

摇青不同机械力对青叶理化变化及乌龙茶品质的影响

通过对摇青的机械运动力和机械摩擦力进行不同组合试验,探明摇青不同机械力对青叶理化变化及乌龙茶品质的影响.结果表明,摇青做功使叶温升高,机械运动力的功高于机械摩擦力的功.机械运动力增强叶梢组织的输导机能,协调茶汤呈味物质,具有内在效应;机械摩擦力造成叶细胞损伤,使茶多酚酶促氧化,诱发香气,具有外在效应;运动力与摩擦力二者应协调配合,才能形成乌龙茶所特有的香高味醇品质.     

茶园环境和管理技术及茶树品种对假眼小绿叶蝉密度的影响

选择13类茶园环境、3种管理技术下的茶园以及分别种植8个品种的茶园,通过长期定时定园调查这些茶园中假眼小绿叶蝉虫口密度,发现:(1)茶-杂草茶园和林-茶-杂草茶园的叶蝉密度显著多于I型丰产茶园、II型丰产茶园、III型丰产茶园、撂荒茶园、幼龄茶园、I型自然生茶树品种园、II型自然生茶树品种园、I型母穗园、II型母穗园、双行密植茶园和三行密植茶园等11个类型茶园;并且,后11类茶园的叶蝉密度差异未达显著水平;茶丛上层、中层和下层叶蝉虫口分别占全株叶蝉虫口54.6%、42.8%和2.6%;(2)对于无特殊管理措施的普通新建茶园、采用无公害技术的无公害茶园、以及施用有机栽培方法的有机转换茶园的叶蝉虫口各调查36次,平均虫口分别为433、394和236头,密度递减,差异未达显著水平;(3)无性福鼎、褚叶齐、皖农95号、雨前大芽、黄叶早、龙井43、安徽1号和福鼎大白茶8个茶树品种上叶蝉密度差异明显,但未达显著,以福鼎大白茶(平均虫口1.57头)和皖农95号(平均1.55头)品种上叶蝉密度稍大,雨前大芽品种的叶蝉密度(平均0.78头)较小。认为:茶园环境显著地影响着叶蝉虫口密度,杂草是叶蝉重要转主寄主、促进叶蝉种群繁衍,施药之前应先除草;叶蝉显著地趋嫩为害,分批勤采可抑制其种群;供试8个品种中以雨前大芽的叶蝉密度最低,值得进一步探讨其抗虫化学物质。     

杨梅枝条醇提物对A375细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

杨梅(Myrica rubra)具有较高的药用价值,利用杨梅枝条醇提物(Myrica rubra branch extract, MRBE)开展其对人恶性黑色素瘤A375细胞的作用研究。采用MTT法、PI流式细胞术、Annexin V-PI双染流式细胞术、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)等方法,解析MRBE诱导A375细胞阻滞与凋亡的潜在作用机制。结果表明:MRBE对A375细胞的抑制率呈剂量依赖效应关系,抑制率最高达49.46%;流式细胞术结果表明,MRBE作用48 h可使A375细胞阻滞于S期并发生凋亡;qRT-PCR结果进一步表明,MRBE可能通过上调P21和下调CyclinA、CyclinD、CDK2、CDK4、CDK6、E2F1等基因的表达,诱导A375细胞阻滞于S期,同时下调Bcl-w和Raf基因的表达促使A375细胞凋亡。初步解析了MRBE对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的作用机制,为利用MRBE研发抗黑色素瘤潜在药物提供科学依据,同时有助于提高杨梅枝条的药用附加值,拓宽杨梅产业链多元化发展。