荔枝多糖的分离纯化及清除自由基作用研究

研究了荔枝多糖(Litchi Polysaccharides,简称LCP)及其纯化后的多糖组分清除自由基作用,LCP经DEAE-Cellulose 52柱色谱分级获得4个多糖组分LCP-1、LCP-2、LCP-3和LCP-4,以Vc为对照,测定了LCP及其4个多糖组分对.OH、O2-.和DPPH的清除能力.结果表明,LCP及4个多糖组分均有清除.OH、O2-和DPPH的能力,其中LCP-2的清除作用最强,其清除.OH、O2-.和DPPH的能力分别相当于Vc的22.6%、44.2%、10.7%.     

野葛块根异黄酮的提取及抗氧化研究

以土家山区野葛块根为试验材料,采用超声波辅助乙醇提取野葛块根异黄酮。在单因素试验的基础上,以提取率为响应值,运用4因素4水平响应面分析法研究提取过程中工艺参数对提取率的影响,并对异黄酮提取物的抗氧化性能进行了研究。结果表明：最适提取工艺条件为乙醇浓度81.0%,超声时间41.2 min,提取温度61.2 ℃,料液比（m/V）1∶9.5,原料粒径40目。在此工艺条件下,野葛块根异黄酮的平均提取率为3.43%。所提取的野葛块根异黄酮的抗氧化效果低于Vc,但能与其产生一定的协同作用。     

西藏雪莲多糖初步分离和清除自由基活性研究

为合理利用西藏雪莲提供一定依据,对西藏雪莲多糖进行提取分离纯化。西藏雪莲经热水浸提,乙醇沉淀得粗多糖。粗多糖凯氏定氮法测得蛋白质含量为4.38%,苯酚-硫酸法测定多糖含量为25.8%,硫酸-咔唑法测半乳糖醛酸含量为38.18%。粗多糖经Sevage法和酶法联合脱蛋白,得初步纯化的多糖。纸层析和气相色谱分析表明西藏雪莲多糖由7种单糖组成:木糖,阿拉伯糖,鼠李糖,半乳糖,葡萄糖,半乳糖醛酸,甘露糖,物质的量比为:1.0∶2.8∶2.6∶2.6∶2.0∶7.6∶1.6。西藏雪莲多糖对阴离子自由基和羟自由基具有明显的清除效果,且初步纯化后多糖的清除效果比粗多糖好。西藏雪莲多糖对脂质自由基的清除效果不明显。     

黑豆异黄酮的提取分离及其对DPPH自由基的清除能力

基于超声时间、液料比和超声温度的单因素试验,通过响应面分析法优化,结合样品粉末的SEM表征,确定超声辅助法提取黑豆异黄酮的最优工艺条件;经大孔树脂（D-101）纯化黑豆异黄酮粗提物,继而以乙酸乙酯-甲醇(V_乙酸乙酯∶V_甲醇=10∶1)溶液洗脱过硅胶层析柱,得组分Ⅰ和组分Ⅱ;考察异黄酮、组分Ⅰ和组分Ⅱ体外抗氧化活性。结果表明:超声辅助法提取黑豆异黄酮的最优工艺参数为时间38 min,液料比32∶1,温度53℃,该条件下黑豆异黄酮提取量[（9.403±0.698） mg/g]最大;经大孔树脂（D-101）纯化得到纯度较高(异黄酮含量[（53.37±3.37）%]的异黄酮;过硅胶层析柱得组分Ⅰ和组分Ⅱ。当总异黄酮、组分Ⅰ和组分Ⅱ的浓度达到0.25 mg/mL时,DPPH·自由基清除率分别达到了（71.28±1.41）%、（34.60±2.95）%和（42.01±1.34）%,总异黄酮的清除率是组分Ⅰ和组分Ⅱ的2.06和1.70倍,总异黄酮、组分Ⅰ和组分Ⅱ的抗氧化能力依次为总异黄酮>组分Ⅱ>组分Ⅰ。     

龙眼多糖清除自由基活性的研究

从清除1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基（DPPH·）、羟基自由基（·OH）和超氧阴离子（O2^-·）三个方面,探讨纯化方法对龙眼多糖清除自由基活性的影响．以抗坏血酸为对照,利用分光光度法分别测定龙眼粗多糖（CLPS）、Sevag法脱蛋白制得的龙眼粗多糖半纯品（SLPS）、TEA法脱蛋白制得的龙眼粗多糖半纯品（TLPS）、经DEAE-Cellulose52离子交换柱层析纯化得到的龙眼多糖纯品（LPS-2）对DPPH·OH和O2^-·的清除能力．结果显示：多糖纯度越高,清除DPPH·活性也越强,其清除活性由强到弱依次为：LPS-2〉TLPS〉SLPS〉ELPS;对于·OH和O2^-·,SLPS清除活性最强,ITS-2清除活性最弱,说明杂蛋白质抑制了多糖清除·OH、O2^-·活性,而糖蛋白中的蛋白质则起到促进作用．     

紫甘蓝乙醇提取物清除体外自由基活性研究

[目的]对紫甘蓝提取物清除体外自由基活性的能力进行研究。[方法]采用化学显色和紫外可见分光光度法考察紫甘蓝提取物清除羟自由基(HO.)、ABTS+和铁离子还原力(FRAP)的能力。[结果]紫甘蓝提取物具有较强的自由基清除能力,能有效地抑制HO.和ABTS+,还原Fe3+。[结论]紫甘蓝是一类潜在的天然活性食物材料。     

虎眼万年青提取物体外清除自由基活性的研究

[目的]研究虎眼万年青不同体积分数乙醇提取物体外抗氧化作用。[方法]采用邻二氮菲-Fe2＋氧化法、邻苯三酚自氧化法（MTT）和DPPH法分别研究不同体积分数乙醇对虎眼万年青提取物抗氧化活性的影响。[结果]结果表明虎眼万年青乙醇提取物对.OH、O 2-.和DPPH.均有清除作用,且清除能力与其含虎眼万年青总皂苷含量成正比。不同体积分数的虎眼万年青乙醇提取物体外抗氧化能力的大小为70%乙醇提物〉80%乙醇提物〉60%乙醇提取物〉40%乙醇提取物〉20%乙醇提取物。[结论]虎眼万年青皂苷类成分与其抗氧化性有关。     

山黄皮果总黄酮体外清除自由基活性研究

[目的]研究山黄皮果总黄酮体外清除自由基的活性。[方法]采用Fenton(邻二氮菲)法和邻苯三酚自氧化法(325 nm)评价山黄皮果总黄酮体外清除自由基活性,以Vit C为阳性对照品。[结果]山黄皮果总黄酮清除羟自由基和超氧阴离子自由基的EC50分别为58.7和23.5μg/ml,Vit C清除羟自由基和超氧阴离子自由基的EC50分别是128.8和77.6μg/ml,表明山黄皮果总黄酮的清除能力比Vit C强。[结论]山黄皮果总黄酮具有较强的体外清除自由基能力,是一种天然有效的自由基清除剂。     

灰兜巴提取物体外清除自由基活性的研究

[目的]研究灰兜巴提取物的体外清除自由基的活性。[方法]以维生素C为对照,比较灰兜巴提取物在3个不同提取过程中的中间产物HDB-1、HDB-2和HDB-3,对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH自由基3种自由基的清除效果。[结果]灰兜巴的3个不同提取阶段的中间提取产物中,以HDB-1对超氧阴离子自由基、羟基自由基和DPPH自由基的清除活性最强。在该试验浓度条件下,HDB-1对3种自由基的清除率分别为36.2%、31.1%和35.0%;而HDB-2和HDB-3对自由基的清除活性差异不大。[结论]该方法提取的灰兜巴产物有开发为天然抗氧化剂的潜力。     

大豆异黄酮的分离鉴定与抗氧化作用的研究

利用硅胶柱层析和反相担体柱层析从大豆中提取分离到大豆甙元糖苷、染料木素糖苷、大豆甙元、染料木素4个异黄酮单体。大豆异黄酮主要由糖苷组成，含有少量的甙元。大豆甙元糖苷和染料木素糖苷具有几乎相同的极性，因此很难分离这两种化合物。利用分离到4个异黄酮单体进行抗指质过氧化（MDA0测定，得出抗氧化作用主要决定于染料木素异黄酮，其中染料木素作用强于其糖苷。     

葛内生真菌次生代谢产物清除自由基活性的研究

为了从药用植物葛的内生真菌中寻找天然抗氧化剂,在葛(Pueraria lobata)的根、茎、叶以及果实中分离出128株内生真菌,并采用DPPH(二苯基苦基苯肼)自由基酶标仪法对其清除自由基活性进行检测。结果表明,有多株内生真菌具有不同程度的清除自由基活性,且不同产地以及不同部位分离出的内生真菌活性不同;同种菌株清除自由基活性与提取液浓度、反应时间成正比关系,即样品浓度增加活性增强,反应时间增长其活性也增强。其中菌株10y-4在浓度2.5 mg.mL-1、反应时间为20 min时,其清除自由基活性达到92.3%。表明葛内生真菌可作为天然的高效抗氧化剂进行开发利用。     

退火处理对葛根淀粉老化特性和质构特性的影响

采用差式量热扫描仪(DSC)、低场核磁共振分析仪和质构分析仪研究退火处理对葛根淀粉老化过程中水分迁移、老化特性和质构特性的影响。结果表明,退火处理会使葛根淀粉在老化过程中的水分子相对含量降低;退火时间对葛根淀粉老化度的影响较为明显,随着退火时间的延长,葛根淀粉的糊化焓增加,老化焓降低,老化度降低,当退火时间达到24 h时,葛根淀粉老化1 d后的老化度从原葛根淀粉的32.95%降到19.58%,老化10 d后的老化度从37.42%降到19.46%;原葛根淀粉凝胶和退火处理葛根淀粉凝胶的凝胶强度随着时间的延长而增大,当退火时间达到24 h时,老化1 d后的凝胶强度从原葛根淀粉的27.34增加到48.44,老化10 d后的凝胶强度从72.11增加到76.45,弹性则随着时间的延长而减小。     

酢浆草清除DPPH有机自由基活性研究

用二苯基苦基苯肼自由基薄层实验法(DPPH-TIC-ASSAY)和DPPH-Titerplate Assay的方法,对不同环境、不同生长势、不同种的酢浆草上不同部位鲜叶的甲醇提取物进行定性和定量分析.发现酢浆草鲜叶提取物的自由基清除能力与样品浓度呈正相关关系,样品浓度越高,其自由基消除率越高;同时发现不同种的酢浆草的自由基清除活性不同,其中红花酢浆草提取物的自由基清除活性较强,同一种酢浆草因为生长环境的不同其自由基清除活性也不同,试验发现盆栽样品的活性较强.薄层图谱中还可看到同一种的DPPH-HPTLC图谱较类似,而不同种的DPPH-HPTLC图谱有较大的差异.     

小刺猴头菌发酵浸膏多糖体外抗氧化活性分析

为研究小刺猴头菌[Hericium caput-medusae(Bull.:Fr.)Pers]发酵浸膏多糖的抗氧化活性。以工厂化小刺猴头菌发酵浸膏为原料,采用透析法分级,DEAE sepharose fast flow柱层析纯化,分别获得粗多糖组分HFCP1和中性多糖HFCP1-1;通过PMP柱前衍生-高效液相色谱法和红外光谱法对单糖组成和结构进行分析,单糖组成均以葡萄糖和半乳糖为主。化学法检测多糖抗氧化活性,结果显示:HFCP1和HFCP1-1清除羟基自由基、超氧阴离子自由基、2,2′-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(2,2′-azinobis-3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate,ABTS+)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)的IC50值分别为7.66和6.77mg/mL、6.16和5.30mg/mL、0.63和0.85mg/mL、0.39和2.62mg/mL。以RAW264.7细胞建立H2O2诱导损伤模型,细胞抗氧化结果表明:HFCP1和HFCP1-1处理组与模型组相比均显著增强细胞活力(P0.05),浓度为100和200mg/L时MDA含量与模型组相比均显著下降(P0.05);HFCP1浓度为100和200mg/L时与模型组相比显著增加SOD和GSH-Px的活性(P0.05);HFCP1-1浓度为200mg/L时与模型组相比显著增加SOD活性(P0.05);也能增加GSH-Px的活性,但未达到显著水平(P0.05)。     

高自由基清除活性竹黄菌株液态发酵工艺的优化

以竹黄无性型菌株ZHLS-03为材料,采用单因子和六因素三水平正交试验法,以高生物量为前提,筛选优化高自由基清除活性的液体发酵培养基和发酵条件。结果表明：较理想的培养基组成为K2HPO4 0.3%,KCl 0.15%,MgSO4·7H2O 0.1%,FeSO4·7H2O 0.05%,酵母浸出粉1.5 %,葡萄糖3%;最佳发酵条件是pH值7.0,培养温度30℃。     

黄山栾树叶中具有清除自由基活性物质的分离和制备

在一次大规模的植物提取物清除自由基活性物质筛选中,发现黄山栾树(Koelreuteria bipinnata Franch.var.integrifoliola(Morr.)T Chen)鲜叶的甲醇提取物具有很强的清除DPPH有机自由基的活性,其IC50为46.37μg·mL-1.用甲醇成功地提取出该活性成分,同时用色谱等方法对该活性成分进行了分离和制备,并用高效液相色谱法和DPPH薄层试验对其纯度及活性进行了检验,得到了一个清除自由基活性很强的纯化合物.该化合物对1 mmol·L-1DPPH自由基的IC50为23.84μg·mL-1,其清除自由基活性高于抗坏血酸纯品.     

20株拟青霉属虫生真菌甲醇提取物

用二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基酶标仪法,对拟青霉属5个种的20个菌株培养液提取物的自由基清除活性进行了比较研究,发现不同种拟青霉的甲醇提取液的自由基清除活性差异很大,在浓度为5.0 mg·mL-1,37℃保温10 min时,自由基清除活性最高为71.9%,最低为15.9%;同种不同菌株之间的活性也有较大的差异.自由基清除活性均与反应时间和样品浓度成正相关关系.二苯基苦基苯肼自由基薄层实验结果表明,该属菌株培养液提取物中自由基清除剂都不是单一成分,且组成也不完全相同.     

D-101大孔树脂分离纯化葛根异黄酮的工艺探讨

【目的】探索D-101大孔树脂分离纯化葛根异黄酮的最优工艺。【方法】采用紫外分光光度法测定异黄酮质量浓度,以异黄酮损失率、洗脱率、收率、纯度等为指标,评价D-101大孔树脂分离纯化葛根异黄酮工艺中,上样液用量、上样液质量浓度、吸附流速、洗脱剂蒸馏水用量、洗脱剂乙醇体积分数及其用量对吸附和解吸效果的影响,从而确定最优工艺。【结果】D-101大孔树脂对葛根异黄酮有较好的分离效果,其最优工艺条件为:葛根异黄酮饱和吸附量为3.3倍树脂体积,上样液质量浓度7.20mg/mL,吸附流速为2mL/min,洗脱剂蒸馏水和体积分数30%乙醇的用量均为4倍树脂体积。利用该工艺精制后葛根异黄酮纯度、收率分别达80.74%和63.62%。【结论】采用D-101大孔树脂分离纯化葛根异黄酮简单可行,精制效果好,适于工业化生产。     

苹果树腐烂病菌拮抗枯草芽孢杆菌E1R-j抗菌蛋白的分离纯化

【目的】从枯草芽孢杆菌E1R-j菌株的发酵液中分离纯化抗菌蛋白,分析确其对苹果树腐烂病菌菌丝的抑制作用,为更好地利用该菌株防治植物病害和研制生物农药奠定基础。【方法】采用盐酸沉淀法从E1R-j发酵液中提取粗蛋白,并筛选酸沉淀的最佳pH值,然后通过反相柱RESOURCETMRPC、凝胶柱Superdex-75、阴离子交换柱DEAE-Sepharose和脱盐柱层析技术,提取并分离纯化粗蛋白;在粗蛋白分离纯化过程中,以皿内对峙试验测定蛋白的抗菌活性;通过扫描电镜技术,观察抗菌蛋白对病原菌菌丝的抑制作用。【结果】以pH 4.0盐酸沉淀获得的粗蛋白活性最强,抑菌效果最佳。反相柱RESOURCETMRPC获得的活性峰收集物经凝胶柱Superdex-75、阴离子交换柱DEAE-Sepharose和脱盐柱层析后,得到1个对称的活性峰,其收集物经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)检测为单一条带,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱中显示有2个分子质量相近的条带,表明该抗菌蛋白可能含有2个亚基,2个亚基的分子质量分别为55和60ku,将该活性蛋白命名为EP-1。扫描电镜结果显示,抗菌蛋白EP-1可使苹果树腐烂病菌菌丝出现膨大、弯曲以及原生质外渗等现象。【结论】通过盐酸沉淀及柱层析技术,从枯草芽孢杆菌E1R-j发酵液中分离纯化出一种分子质量为115ku的抗菌蛋白EP-1,其对苹果树腐烂病菌菌丝生长具有明显的抑制和破坏作用。