大豆原生质体的游离、培养和愈伤组织的生成

从大豆未成熟荚的子叶游离出大量原生质体,经培养保持分裂,并获得了肉眼可见的愈伤组织。     

大豆（Glycinemax）原生质体培养与分化

试验56份大豆栽培品种。采用幼荚子叶、无菌苗下胚轴和子叶、幼胚悬浮培养细胞作原生质体游离材料。苗期子叶和下胚轴用酶液:1％Hemicellulase HP150,0.4％Cellulase R—10,0.1％Pectolyase Y—23;幼荚子叶用1％Cellulasc R—10,1％Hemicellulase HP150,0.5％Pectinase;悬浮培养细胞用1％Cellulase R—10,0.2％Pectolyase Y—23,2％Driselase游离,4种材料均获得大量原生质体。原生质体培养基均为K8P,分化培养基为MS、B5,培养基中的激素试用了2.4—D,2.4.5—T,NAAIAA、ZT、KT、BA、zip和毒莠定等不同配合和浓度。结果有12份品种的幼荚子叶。下胚轴和苗期子叶的原生质体形成愈伤组织、有不同类型的根分化和绿点出现,分化培养基B5+0.1-0.2mg/l 2.4.5-T+1-1.5mg/l·BA较好。     

龙眼胚性悬浮细胞原生质体培养及其体胚发生再生植株

以“红核子”、“东壁”、“十二月龙眼”等龙眼品种的胚性悬浮细胞为起始材料分离原生质体,采用液体浅层培养、包埋悬浮培养等方式,进行原生质体培养与植株再生研究。研究结果表明,海藻酸钙包埋悬浮振荡培养(50r/min)是龙眼悬浮细胞原生质体培养的适宜培养方式,在含有多种生长调节剂的改良MS培养基(MP6)上,再生小克隆的形成频率可高达5%;采用龙眼胚性愈伤组织体胚诱导、成熟和萌发的优化方案,原生质体再生小克隆分化子叶形胚状体的频率达100%,萌发植株的频率一般大于45%。      

大豆单细胞培养和原生质体游离的细胞形态观察

本文将形状不同的大豆悬浮培养细胞分成三种类型;园形和椭园形(A类)稍长形(B类)和长形细胞(C类)。A类细胞分生能力强,经多次分裂形成多细胞团;C类细胞多数为老化细胞,能分裂但不能形成细胞团;B类细胞在悬浮细胞中含量很少,大部分能分裂形成细胞团。在用悬浮培养细胞游离原生质体的过程中,A类细胞几乎全能游离出原生质体,B类细胞大部分能游离出原生质体,C类细胞几乎不能游离出原生质体。因此,在游离悬浮培养细胞时,在原生质体中含有少量未去壁的C类细胞和极少数B类细胞可不必用其它的方法分离出去,因为C类细胞不能形成细胞团,那么经培养形成的愈伤组织和分化再生的完整植株可能几乎都是由原生质体产生的。     

组织与细胞培养在麦类作物抗病育种中的应用

为了尽快获得有价值的抗病材料,近年来日益广泛地采用植物细胞选择的方法.这是一种用细胞和原生质体大量再生植株的最有效的培养技术.其育种的作用原理是通过胚和愈伤组织的培养导致嵌合植株的再生.为缩小愈伤组织用量,有时将其安排在选择性的原生质体培养基上.将原生质体放在含有细菌Pseudomonas syringae和真菌Alternaria alternata滤液的选择性培养基上,终于研制出了烟草品种CaMcyH的愈伤组织.用这种选择到的愈伤组织曾获得了抗某些病原体的嵌合植株,经研究,证实其确系愈伤组织的后代.     

龙眼单细胞培养及其体胚发生再生植株

以龙眼松散型胚性愈伤组织(CⅢ类型)为起始材料。进行了单细胞培养及其体细胞胚胎发生再生植株的研究。结果表明：由CⅢ类型胚性愈伤组织建立起的分散性良好的悬浮细胞系，经过孔径(φ)为40μm的尼龙网过筛。可以获得单细胞悬浮系：采用液体浅层培养。部分单细胞可持续分裂，并且有规则分裂和不规则分裂2种方式。前者可能直接形成体细胞胚胎，后者则先形成多细胞团再形成体胚；在液体浅层培养中．单细胞可不经转移直接形成子叶形体细胞胚胎：这些体细胞胚胎经过成熟培养后，可萌芽生根再生完整植株。     

棉花原生质体培养再生植株获得成功

原生质体培养再生植株是进行细胞杂交与基因工程操作的重要基础工作。但至今未见从陆地棉原生质体培养获得胚胎发生与植株再生的报道。我们继1987年在我国首次完成棉花细胞悬浮培养再生植株之后,最近又从棉花胞性细胞原生质体中培养出再     

两个栽培大豆品种的体细胞胚胎发生和植株再生研究

通过优化培养条件,即提高植物生长激素浓度和蔗糖浓度,发展了一种再生频率较高的大豆植株再生的方法。从栽培大豆品种幼胚中诱导形成的体细胞胚性愈伤组织和胚状体可以进一步分化出芽和根,发育成完整植株,中黄４号植株再生频率最高可达３９％,早熟１８号仅得到了胚性愈伤组织。     

茶树组织培养再生技术的研究

植株再生技术是植物组织培养的重要方面。几乎所有的植物生物工程技术研究,如基因转移工程、体细胞突变筛选、原生质体融合等,都需要以植株再生技术为基础,以保证能再分化重新形成植株。茶树组织培养再生技术的研究可溯源至60年代末日本胜尾清对茶树花药培养及再生单倍体植物的研究,嗣后,1975年台湾吴振铎第一次在茶树子叶培养中成功地再生试管植株。至今,茶树组织培养已从子叶、子叶柄、下胚轴、茎、花药等多种材料成功地获得再生植株。 一、愈伤组织诱导 愈伤组织的诱导是植物组织培养的一个重要阶段,它的主要作用是促使被培养的植物细胞经历脱分化过程,使其具有与茎尖分生组织一样的特性,以便于在进一步的培养中再次分化,形成新植株。 在茶树组织培养中,几乎所有的材料,如茎、叶、子叶、根、花药、叶柄、子叶柄和下     

苎麻组织培养和原生质体培养的研究

本文对苎麻组织培养进行了较为系统的研究,并在此基础上进行了原生质体培养。结果表明:在以苎麻品种浏阳大叶绿的子叶为材料,在含CPA1.0mg/l、KT0.5mg/l的MSB脱分化培养基培养和继代,可以得到高质量、高分化潜力的愈伤组织。悬浮培养可制得良好的悬浮系。其游离得到的原生质体,以海藻酸钠包埋漂浮方式培养在KM_8P培养基中得到愈伤组织。愈伤组织在BA2.0mg/l的MSB培养基上分化可再生完整植株。     

苎麻不同来源原生质体的分离和培养的比较研究

比较了苎麻子叶与子叶悬浮细胞两种材料的原生质体在分离和培养时的差异。取真叶初露期的绿色子叶，用３％纤维素酶、０．５％离析酶的０．６Ｍ甘露醇混合溶液处理５小时，原生质体产量可达５×１０￣６个／ｇｆｒ·ｗｔ，但其原生质体以海藻酸钠包埋方式培养在附加２，４—Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ、ＫＴ０．５ｍｇ／ＬＫＭ＿８Ｐ培养基上，原生质体仅发生二次分裂；子叶悬浮细胞只有在纤维素酶４．５％，离析酶０．８％、半纤维素酶０．８％的０．５５Ｍ甘露醇混合液中处理１１小理，原生质体才达最大程度释放，每克悬浮细胞可得原生质体２×１０￣６个，但其原生质体易于诱导分裂，在与前者相同的培养条件下，５０天左右可形成肉眼可见的小愈伤组织，该愈伤组织经过扩增，在不同的培养基上可诱导芽、根的分化，从而形成完整植株。     

文摘

离体培养植株再生应用遗传工程新方法的先决条件。单细胞和原生质体被认为是植物遗传操作的最有希望的工具。作者利用可再生的植物的幼胚和其它外植体,研究形成胚性愈伤组织和胚性悬浮培养物的潜力。以水稻品种Yamabiko和Taipei为试材,在乳熟期(幼胚长0.8～1.2mm)切下幼胚,培养在MS,CC或N_6附加2,4-D的培养基上。在26℃暗培养3～5周,形成了胚性(质地紧密,表面光滑,白色或黄色的球状结构)与非胚性(半透明型,淡黄色或浅褐色)两种愈伤组织。将胚性愈伤组织培养在CC及MS附加1～2毫克/升2,4-D的固体培养基上,或在CC及N_6-1液体培养基中进行悬浮培养(140rpm,27℃,暗培养),可保持其胚胎发生能力。这些悬浮培养物可作为分离     

不同菜用大豆品种的胚胎发生与再生

以8个菜用大豆品种的未成熟子叶为外植体,在MS(附加高浓度2,4-D)培养基诱导愈伤组织形成、体细胞胚胎发生与再生植株.结果表明:八个菜用大豆品种的未成熟子叶均可诱导产生愈伤组织与体细胞胚胎发生,出愈率为14.71%～100%.体细胞胚胎发生率变化在0～36.76%之间,绿子叶菜用大豆没有形成体细胞胚.体细胞胚可正常萌发产生小植株,移栽成活结实.菜用大豆的出愈率和体细胞胚胎发生率与基因型有关.     

人参悬浮细胞原生质体培养的研究

以人参幼叶为外植体,在MS+2ppm2.4—D+0.5ppmKT+500ppmLH培养基上诱导产生愈伤组织.将生长旺盛的愈伤组织转移到MS+1ppm2.4—D+O.5ppmNAA+0.5ppmKT+500ppmLH液体培养基上建立细胞悬浮系.用含2.0%Onozuka R—10,0.5% Pectinase和11%甘露醇的混合酶液在PH5.8、25℃下分离原生质体.原生质体在培养后的第3天形成再生细胞并进行第一次分裂,第8天形成细胞团,40天形成愈伤组织.当再生的愈伤组织转移到MS+0.1ppmNAA+0.5ppmKT上时分化产生大量不定根.     

氨基酸诱导的高粱胚胎发生愈伤组织的开始与维持

氨基酸诱导的高粱胚胎发生愈伤组织的开始与维持Ｌ．Ａ．Ｅｌｋｏｎｉｎ等为了有效地应用基因工程和细胞工程技术创造新的材料，需要有从细胞悬浮系和原生质体中培养出植株的可靠方法。在许多禾本科植物中，获得胚性细胞系的起始材料是结构紧密的胚胎发生愈伤组织。然而，...     

亚洲棉细胞悬浮培养技术的研究

一般认为棉属植株的组织离体培养难以得到活力旺盛的愈伤组织,而且愈伤组织在培养过程中容易发生老化和变褐色。有关细胞悬浮培养的报道更少。James等(1978)用克劳茨基棉的愈伤组织进行悬浮培养,经4～5次继代培养后死亡。本试验用亚洲棉红叶中棉品种131花药诱导产生的愈伤组织为材料,成功地建立起细胞悬浮培养体系。     

大豆愈伤原生质体的制备和培养方式探究

具有植物细胞全能性的原生质体是探究植物遗传转化和基因功能的理想材料,为了高效率制备大豆原生质体及其稳定培养,以交大05-133大豆未成熟子叶诱导的愈伤组织为材料,采用正交设计,对纤维素酶、果胶酶和离析酶等酶解液成分进行分析,研究原生质体高效制备方法的酶解液配比,同时探讨不同酶解时间对原生质体产量的影响,以确定最佳的原生质体酶解条件;通过对比在低熔点琼脂固体液滴培养与液体培养这两种不同培养方式下细胞的增值速率,以期建立高效的愈伤原生质体再生体系。结果显示,最佳酶解液配比为:2%纤维素酶+0. 1%果胶酶+1%离析酶,在该酶解液配比下酶解5 h,所得到原生质体产量和活力最高,达到(3. 976±0. 86)×10~6个·g~(-1)。用KP8培养基对原生质体进行培养,结果显示固体液滴的培养方式更适合原生质体的分裂,原生质体植板率高于液体培养,并且在25 d内分裂形成致密的细胞团。     

茶籽子叶柄培养直接分化芽

近年来,茶树组织培养取得了可喜的进展,吴振铎(1976)、Wu C.T.等(1981)、颜慕勤等(1983)、Kato M.(1986)以子叶为外植体进行培养,诱导形成了愈伤组织和胚状体,并得到了植株。安间、铃木(1986)和中村(1985)培养除子叶胚,也得到了完整植株。土井(1983)培养茎、叶的切片,诱导出了愈伤组织,并分化了根,但没有分化芽。Kato M.(1985)以茎表皮层(包括皮下几层细胞)为外植体进行培养,从愈伤组织分化了不定芽,并得到了完整植株。然而,有关在茶籽子叶柄培养中,不经愈伤组织和胚状体,直接分化芽,国内外尚未见报道。本试验以茶籽子叶柄为外植体,对其直接分化芽的若干培养条件进行了研究。     

刚果野芝麻茎段培养再生植株简报

通过植物器官人工培养,快速繁殖名贵、稀有植物和优良品种,已在花卉、林木、蔬菜以及其它作物上取得了一定的经济效益。关于芝麻的无性繁殖,据报道,Caldas,L.S.等(1981)曾从下胚轴和子叶获得了愈伤组织和球状结构物,河南农科院刘瞒(1986)从茎尖获得了再生植株。我们以茎段为外植体也得到了再生植株。     

抗生素对大豆组织培养物的抑制效应

将大豆悬浮培养细胞及大豆幼胚培养物置于不同浓度的卡(Kanamycin)、G_(418)和潮毒素(Hygromycin)中培养,观察三种抗生素对大豆组织生长及其形态的抑制作用。结果表明,G_(418)的抑制作用最明显,完全抑制大豆悬浮培养细胞和幼胚再生芽生长的有效浓度分别为3μg/ml和25μg/m1。