和田苜蓿组织培养中玻璃化现象研究

玻璃化现象是紫花苜蓿组培过程中常见的现象,由于其难以发育成苗或很难移栽成活而严重影响组织培养成功率。以和田苜蓿下胚轴为外植体,以MS为基本培养基,研究了在不同激素配比、蔗糖、琼脂浓度下和田苜蓿再生苗的玻璃化现象,并探索出改善玻璃化现象的措施。研究结果表明:在光照强度为1 000～1 200lx条件下,MS培养基中添加2.0mg/L 6-BA和0.5mg/L NAA,调整蔗糖浓度20～25g/L、琼脂浓度为7g/L时可有效降低和田苜蓿再生苗玻璃化现象。     

核桃胚培养条件研究

以香玲核桃胚为试材,研究了不同基本培养基、蔗糖和琼脂浓度对离体胚萌发、生根和成苗的影响,筛选最佳培养条件。结果表明:最适宜的基本培养基为MS+3%蔗糖+(0.6~0.8)%,种胚培养4周后即可成苗,选生长健壮的生根苗(不需要炼苗)移栽到经高压灭菌的蛭石中,成活率可达91%以上。     

核桃胚培养条件研究

以香玲核桃胚为试材,研究了不同基本培养基、蔗糖和琼脂浓度对离体胚萌发、生根和成苗的影响,筛选最佳培养条件.结果表明:最适宜的基本培养基为MS+3％蔗糖+(0.6～0.8)％,种胚培养4周后即可成苗,选生长健壮的生根苗(不需要炼苗)移栽到经高压灭菌的蛭石中,成活率可达91％以上.     

熏衣草微体快速繁殖与试管苗壮苗技术研究

对熏衣草微体快速繁殖和壮苗技术进行了研究.适合于熏衣草试管苗繁殖的培养基为MS 6-BA 2.0mg/L NAA 0.05mg/L 蔗糖30g/L 琼脂7g /L,培养28d,繁殖系数达8以上;培养基中附加CCC质量浓度为0.05mg/L～0.5 mg/L时对熏衣草试管苗繁殖和壮苗有利;熏衣草试管苗生根用IAA的效果较好,适宜于生根的培养基配方为MS IAA1.0mg/L 蔗糖20g/L 琼脂7g /L,培养25d生根率为91.6%;生根试管苗移栽成活率为73%.     

熏衣草微体快速繁殖与试管苗壮苗技术研究

对熏衣草微体快速繁殖和壮苗技术进行了研究。适合于熏衣草试管苗繁殖的培养基为MS＋6～BA2．0mg／L＋NAA0．05mg／L＋蔗糖30g／L＋琼脂7g／L,培养28d,繁殖系数达8以上;培养基中附加CCC质量浓度为0．05mg／L-0．5mg／L时对熏衣草试管苗繁殖和壮苗有利;熏衣草试管苗生根用IAA的效果较好,适宜于生根的培养基配方为MS＋IAA1．0mg／L＋蔗糖20g／L＋琼脂7g／L,培养25d生根率为91．6％;生根试管苗移栽成活率为73％。     

海藻糖对牛未成熟卵母细胞玻璃化冷冻的影响

【目的】研究胞外冷冻保护剂海藻糖对玻璃化冷冻-解冻后牛未成熟卵母细胞形态、活性线粒体分布和核成熟的影响。【方法】将未成熟卵母细胞随机分为新鲜组、不同浓度海藻糖(0.25、0.5和1 mol/L)组和0.5 mol/L蔗糖组共5组。新鲜组作为玻璃化冷冻的对照组,海藻糖和蔗糖组均采用两步法进行玻璃化冷冻和解冻处理。在冷冻的第1步不添加海藻糖和蔗糖,在冷冻的第2步和解冻的第1步分别添加对应浓度的海藻糖和蔗糖,在解冻的第2步海藻糖和蔗糖浓度均减半。解冻后,统计卵母细胞形态正常率;用JC-1染色检测卵母细胞的活性线粒体分布区域和荧光强度;体外成熟培养24 h后,统计卵母细胞的核成熟率。【结果】玻璃化冷冻组卵母细胞的形态正常率和核成熟率均显著低于新鲜组卵母细胞(P<0.05),0.5 mol/L海藻糖组卵母细胞形态正常率和核成熟率均显著高于0.5 mol/L蔗糖组及0.25和1 mol/L海藻糖组(P<0.05);0.5 mol/L海藻糖组卵母细胞的活性线粒体均匀分布在细胞膜内侧区域,在绿光和蓝光下分别呈现强的红色荧光和黄绿色荧光,且荧光强度高于其他玻璃化冷冻组卵母细胞,但仍低于新鲜组...     

单花橐吾愈伤组织诱导及分化培养条件研究

分别以单花橐吾无菌苗的子叶、真叶、叶柄、根为外植体,进行组织培养的初步研究.结果表明:单花橐吾愈伤组织诱导的最佳外植体是叶柄,最佳诱导培养基配方是MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖35g/L(})琼脂8.6g/L,出愈率可达99.5％,诱导效果较好;在MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8.6g/L中进行增殖培养可诱导出大量不定芽,成苗率可高达98.7％,每块愈伤组织平均可产生7.8个不定芽,且不定芽生长健壮;在1/2MS+NAA 0.5mg/L+ IBA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8.6g/L中进行生根培养,生根率可达99.7％,根白色粗壮,有细绒毛,苗生长健壮.     

披碱草×野大麦杂种F_1幼穗培养再生体系的建立

以披碱草×野大麦杂种F_1幼穗为外植体,诱导出胚性愈伤组织,建立了植株再生体系,对影响愈伤组织诱导、分化、生根的基本培养基、激素种类及质量浓度等进行筛选。结果表明:愈伤组织诱导以MS为基本培养基+3mg/L 2,4-D较好;外植体在MS+3mg/L 2,4-D+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的诱导培养基上经过20d培养,小穗愈伤组织诱导率达28.3%;愈伤组织的分化培养基为MS+1mg/L 6-BA+1mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂,愈伤组织分化率达78%;生根培养基以1/2MS+0.5mg/L IBA+0.5mg/L NAA+蔗糖+7g/L琼脂为最佳,生根率可达86.7%,移栽后成活率可达100%。     

植物激素对2个紫花苜蓿品种再生体系的影响

采用MS为基本培养基,附加不同浓度的2,4-D、KT和NAA,对"盛世"和"甘农4号"2个紫花苜蓿品种进行了组织培养再生体系的研究。结果表明:下胚轴是愈伤组织诱导的最佳外植体材料;2,4-D浓度增加对"甘农4号"紫花苜蓿出愈率影响不明显,但"盛世"紫花苜蓿的出愈率随着2,4-D浓度的增加呈显著升高趋势;2个品种的最佳愈伤组织诱导培养基为MS+2 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L KT+30g/L蔗糖+7.5 g/L琼脂;最适分化培养基为MS+KT0.5 mg/L+NAA0.1 mg/L+蔗糖20 g/L;最佳诱导生根的培养基为1/2 MS+NAA0.5 mg/L。     

沙打旺叶片愈伤组织诱导和植株再生的研究

本文对沙打旺叶片外植体愈伤组织诱导和植株再生进行初步研究,建立了叶片外植体细胞无性系,并获得再生植株。试验以MS为基本培养基,附加不同浓度的2,4-D、NAA、IAA、BA、KT和ZT。单独附加2,4-D时,85%的外植体形成愈伤组织。2,4-D与ZT或BA配合使用时,形成愈伤组织的百分率虽降低,但这种愈伤组织可继代培养和诱导分化成苗。在MS培养基上附加BA和NAA时,则获得再生苗。BA、NAA和2,4-D对沙打旺叶片愈伤组织分化成苗有调节作用。此外,还探讨了蔗糖和不同培养基对愈伤组织形成的影响。     

披针叶黄华试管正常苗与玻璃化苗茎叶的解剖特征比较

利用解剖学方法,对披针叶黄华(Thermopsis lanceolatar)试管正常苗与玻璃化苗茎叶的解剖结构进行了观察比较。结果表明,玻璃化试管苗叶片和茎的解剖结构与正常试管苗有显著差异。前者叶片肥厚,无角质层,上表皮细胞多肿胀破裂;叶肉中栅栏组织退化消失,海绵组织细胞体积膨大,液泡化,某些区域细胞壁发育不完全,出现大的裂隙腔;叶片维管束退化;茎部表皮不完整,皮层和髓部组织的细胞皱缩变形,维管组织分化不完全等。这些结构上的畸形发育是影响披针叶黄华试管苗正常生长和增殖的重要原因。     

紫花苜蓿组织培养再生体系的建立

以紫花苜蓿无菌苗的下胚轴、子叶、叶片和叶柄为外植体,研究了不同培养基、不同激素种类和配比对胚性愈伤组织诱导的影响以及不同分化培养基对胚状体分化的影响.结果表明:下胚轴外植体胚性愈伤组织诱导率最高;最佳胚性愈伤组织诱导培养基为改良SH 2.0mg/L 2,4-D 0.5 mg/L 6-BA;最佳胚状体诱导培养基为MSO 2.0 mg/L 6-BA 0.5mg/L NAA;成苗培养基为1/2 MS 1% 蔗糖 0.7%琼脂.     

紫花苜蓿组织培养再生体系的建立

以紫花苜蓿无菌苗的下胚轴、子叶、叶片和叶柄为外植体,研究了不同培养基、不同激素种类和配比对胚性愈伤组织诱导的影响以及不同分化培养基对胚状体分化的影响。结果表明：下胚轴外植体胚性愈伤组织诱导率最高;最佳胚性愈伤组织诱导培养基为改良SH＋2．0mg／L2,4-D＋0．5mg／L6-BA;最佳胚状体诱导培养基为MSO＋2．0mg／L6-BA＋0．5mg／LNAA;成苗培养基为1／2MS＋1％蔗糖＋0．7％琼脂。     

一种新型复合乳酸菌剂对苜蓿青贮品质及细菌群落的影响

为探究复合乳酸菌剂添加对苜蓿青贮品质及细菌多样性的影响,在无蔗糖和2%蔗糖添加条件下,分别加入不同浓度的新型复合乳酸菌剂进行苜蓿青贮,以只加水青贮的苜蓿(CK)为对照,测定青贮苜蓿的品质,并采用高通量测序技术测定细菌多样性。结果表明：(1)添加新型复合乳酸菌剂可提高苜蓿青贮品质,使青贮苜蓿的pH降低,乳酸、粗蛋白、总氮含量增加,氨态氮和氨态氮/总氮降低,与蔗糖同时添加效果更好;青贮苜蓿的品质随乳酸菌剂添加浓度增加没有持续增加,单独或与蔗糖同时添加10⁸ cfu/g的处理乳酸、粗蛋白、总氮含量较高。(2)青贮苜蓿的pH呈CK>复合乳酸菌剂处理>仅添加蔗糖处理>蔗糖+复合乳酸菌剂处理,乳酸含量则反之;粗蛋白、总氮含量呈CK<仅添加蔗糖处理<复合乳酸菌剂处理<蔗糖+复合乳酸菌剂处理,氨态氮、氨态氮/总氮则反之。(3)复合乳酸菌剂添加改变了苜蓿青贮饲料中的细菌菌群多样性及丰度,使乳酸菌属丰度增加。(4)乳酸菌属丰度与pH值呈显著负相关(P<0.05),与乳酸、乙酸、总氮含量呈显著正相关(P<0.05)。综上,新型复合乳酸菌剂...     

黄花苜蓿愈伤组织诱导及分化培养条件的研究

以黄花苜蓿子叶和下胚轴为外植体,研究不同激素配比对黄花苜蓿愈伤组织诱导及分化的影响,结果表明:MS+2,4-D 2mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖3％+琼脂0.7％为适宜的愈伤组织诱导培养基;MS+ KT0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖2％+琼脂o.7％为适宜的分化培养基;生根培养基为:1/2MS+ NAA 0.1mg/L+蔗糖2％+琼脂0.7％.下胚轴是诱导愈伤及分化的最佳外植体,诱导率可达100％,分化率可达80％.     

添加KCl对高盐胁迫下红豆草生长及生理特性的影响

为探究K^+对高盐胁迫下红豆草生长及相关生理指标的影响,在高盐胁迫(100 mmol·L^-1 NaCl)下添加不同浓度(5、10、25和50 mmol·L^-1)KCl对4周龄幼苗处理7d后进行测定。结果表明,高盐胁迫显著抑制了红豆草幼苗的生长;然而,添加不同浓度KCl明显减轻了高盐胁迫对幼苗生长的抑制作用。高盐胁迫下,随着KCl浓度的升高,红豆草幼苗的鲜重、干重、组织含水量和叶绿素含量逐渐增加,当浓度为25 mmol·L^-1时达到最大值,随后有所降低;叶和根中的Na^+浓度逐渐降低,而K^+浓度和K^+/Na^+呈逐渐升高趋势;脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量在KCl浓度为25 mmol·L^-1时达到峰值,而后下降;丙二醛(MDA)含量、细胞壁、细胞质和液泡转化酶活性逐渐减小,而超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、抗坏血酸过氧化物(APX)、蔗糖合成酶(SS)及蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性、蔗糖和葡萄糖含量呈逐渐增加趋势。添加K^+可通过维持植株体内K^+、Na^+稳态平衡、提高抗氧化酶活性和增强蔗糖的合成与积累,来减轻高盐胁迫对红豆草幼苗的毒害作用。     

星星草和朝鲜碱茅组织培养体系的建立

分别以星星草和朝鲜碱茅成熟胚为外植体,建立组织培养体系.结果表明,星星草和朝鲜碱茅成熟胚在MS+300mg/L CH+4.0mg/L 2,4-D +3%蔗糖+0.7%琼脂(pH5.8)培养基上,愈伤组织诱导率可分别达到53.3%和46.7%.经MS+300mg/LCH+1.0mg/L 2,4-D +3%蔗糖+0.7%琼脂(pH5.8)继代培养基中继代培养后,星星草和朝鲜碱茅胚性愈伤组织在MS+300mg/L CH+1.0mg/L 2,4-D+0.3 mg/L 6-BA +3%蔗糖+0.7%琼脂(pH5.8)分化培养基上,分化率分别达到了82.5%和75.7%.两种牧草再生苗生根移栽后成活率均可达到95%以上.     

紫花苜蓿基因转化的影响因素分析

通过农杆菌介导法对紫花苜蓿不同品种植株进行了抗旱基因转化的研究,得到了一套紫花苜蓿基因转化的优化体系。研究表明,100 mg/L的卡那霉素对苜蓿愈伤组织的生长有着显著的抑制效应。250 mg/L头孢霉素能够有效地抑制农杆菌菌株LBA4404的生长。紫花苜蓿供试材料被切后直接用OD600值为0.3~0.5的农杆菌LBA4404菌液侵染10~15 min;培养材料共培养3 d后在愈伤组织诱导培养基MS 2 mg/L 2,4-D 0.5 mg/LKT 30 g/L蔗糖 9 g/L琼脂 250 mg/L Cef上诱导出愈伤组织;在体细胞胚分化培养基MS 1.0 mg/L BA 0.3 mg/L NAA 30 g/L蔗糖 9 g/L琼脂 50 mg/L Kan 250 mg/L Cef上促进体细胞胚的分化;分化出的体细胞胚在再生培养基上(同分化培养基,Kan为80 mg/L)进一步发育成抗性转化苗;转化的无根小苗在生根培养基1/2 MS 1.0 mg/L IBA 1%蔗糖 0.8%琼脂 100 mg/L卡那霉素上可生长出根系。     

活性炭在罗汉果组织培养中的应用

研究了活性炭对罗汉果试管苗生长、继代及生根的影响。结果表明,活性炭对罗汉果试管苗的增殖分化无明显作用,但对试管苗的壮苗生长及缓解玻璃化有较大作用,本阶段培养最佳活性炭浓度为0.5 g/L;其次,活性炭对罗汉果试管苗的继代培养效果明显,最佳使用浓度为0.8 g/L,保存时间能达6个月,半年存活率为86.42%;本试验研究结果也证明了活性炭对罗汉果试管苗生根的促进作用,当活性炭浓度为1.0 g/L时,生根效果最好,生根率达到了95.1%,根粗壮,根系密度高,长势佳,最适合移栽炼苗。     

2,4-D和6-BA组合配比对金达苜蓿愈伤组织诱导与分化的影响

为了建立一个高效的金达苜蓿(Medicago sativa L. cv. Jinda)组织培养再生体系,我们以金达苜蓿无菌苗的胚轴上段、下段、子叶为外植体,进行了2,4-D和6-BA不同组合配比对愈伤组织诱导和胚性愈伤组织及胚状体分化的影响,这对其以后建立遗传转化体系具有重要的意义。结果表明:胚轴上、下段和子叶是很好的诱导愈伤组织的外植体;在MSO胚状体诱导培养基上,分化出胚性愈伤组织的最佳2,4-D、6-BA剂量配比为8:0.2,成苗培养基为MSO+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂。