抗猪囊虫特异单克隆抗体的研究

建立了两株分泌抗囊虫特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株2G_6和3E_1,其分泌抗体分别为IgG_1和IgG_3。间接ELISA法检测其24h培养上清和小鼠腹水中的效价,2G_6为10~3、10~7;3E为10~2、10~5。两种单克隆抗体均只与囊虫抗原反应而不与棘球蚴、细颈囊尾蚴抗原和猪血清反应。两种单克隆抗体不能交互抑制。3E_1抗体能与囊虫抗原发生沉淀反应,2G_6抗体无沉淀反应性。应用酶标记的3G_1抗体经ELISA抑制法检测囊虫病猪和非囊虫猪血清中的抗体,阳性率为86％(86/100),阴性符合率为100％(119/119)。     

应用酶标记葡萄球菌A蛋白“ELISA”检测猪囊虫抗体的研究

作者进行了酶联免疫吸附试验(ELISA)检测猪囊虫抗体的研究,发现该法具有很高的敏感性和良好的特异性,少量假阳性主要由细颈囊尾蚴所致,可由细颈囊尾蚴液抑制而消除。以HRP-SPA代替HRP-兔抗猪γ球蛋白,对同一批猪血清进行了ELISA测定,发现两种结合物检测的结果一致,HRP-SPA完全可以代替HRP-兔抗猪γ球蛋白。SPA能与多种动物的IgG结合,而以与猪的IgG亲和力最强,同时它亦能与人的IgG结合。猪囊虫病为人猪共患的疾病,实验室只需准备HRP-SPA一种结合物,即可同时检测人和猪的囊虫病抗体,满足人医和兽医开展ELISA诊断囊虫病的需要。     

猪囊虫抗原基因TS21的真核表达

构建了猪囊虫抗原基因TS21的VR1020真核表达载体，以菌落原位杂交法筛选获得正确插入的重组质粒，用RNA印迹（Northern blotting)和ELISA检测插入片段的转录及其翻译表达产物。结果，VTS21在真核细胞中能够转录TS21基因的mRNA；兔抗猪囊虫超免疫血清可识别其蛋白表达产物，表明VTS21能正确表达猪囊虫抗原蛋白。     

囊虫病免疫诊断检测方法的研究进展

由于科学技术的发展,囊虫病免疫诊断检测方法有了很大的进展,主要有1.免疫学检测方法,包括酶联免疫吸附法(ELISA)、斑点酶联免疫吸附法(Dot-ELISA)、生物素-亲和素酶联免疫吸附法(BAS-ELISA)、单克隆抗体酶联免疫吸附试验(McAb-ELISA)、酶联免疫印渍技术(ELIB);2.基因检测技术,包括DIG标记DNA探针、细胞因子基因检测方法、基因重组技术;3.免疫试剂盒的应用,包括循环抗原酶联免疫试剂盒、猪囊虫短程抗体IgG4快速ELISA检测试剂盒等。     

抗猪囊虫循环抗原杂交瘤细胞系的建立和鉴定

建立了8株抗猪囊虫循环抗原(CA)的杂交病细胞系。其中6F12和2E7为抗囊虫特异McAb;McAb 1C6、1C7、1B5、4D9、2B9和8D8与囊虫、(?)球蚴、细颈囊尾蚴抗原均可发生反应。这些McAb的腹水ELISA效价为105～107,细胞培养上清液效价为102,并均可与病猪血清中的囊虫CA反应形成沉淀线。用1B5、6F12和8D8分别致敏血球,以反向间接血凝试验检测98份囊虫病猪血清,检出率分别为70.41%(69/98)、6.12%(6/98)和7.14%(7/98)。本研究制备的McAb可用于猪囊虫循环抗原检测。     

试用ELISA法检验猪囊虫病

试用ELISA法对西宁市宰前生猪1 864头进行了猪囊虫病检测、结果阳性3头,阴性1 861头,表明本方法有一定的实用性.     

金免疫层析法检测囊虫循环抗原试验研究

应用胶体金和免疫层析技术进行了检测金免疫层析法(GICA)囊虫循环抗原(CA)试验研究。5株抗囊虫McAb和一株多抗用于最佳配对的筛选,一株用于标记胶体金,另一株包被NC膜。以双抗体夹心ELISA为对照,GICA用于CA检测,观察其敏感性、特异性和稳定性。结果显示,以McAb 1A5和1B6配对的结果最佳,1A5最适标记量为10μg／mL,186最佳包被浓度为1 g／L;用GICA和ELISA两种方法检测囊虫CA,痈猪血清和囊液的符合率达100％,病人血清和脑脊液的符合率达80％;CA最低检测量为10 ng,检测正常猪、人及其他疾病血清,均呈阴性;检测时间5-15 min,整个实验仅一步操作;GICA试纸条分别在4℃和室温下保存105 d以及在37℃保存45 d,检测结果均未发现改变。以上结果表明,快速检测囊虫循环抗原的金免疫层析法具有简便、快速、敏感、特异和稳定的特点,适合基层使用。     

猪囊虫病综合防制

为了控制和消灭人畜共患的囊虫病 ,讷河市兽医卫生防疫站从 1 995年开始实施猪囊虫病综合防制 ,囊虫病业已得到有效控制。1　病源普查　以乡镇为核心 ,以村屯为监测点 ,认真做好病源普查工作。猪囊虫病诊断抗原购于黑龙江省兽医研究所 ,人用囊虫病诊断抗原购于深圳绿瀚生物技术有限公司。采取随机抽样的办法 ,每年在全市每个乡镇抽检 2个村 ,每个村抽检 2个屯做调查点。调查点内的生猪和人群受检率应达 1 0 0 %。1 .1　生猪囊虫病　所有生猪一律耳尖采血采用间接血凝试验法检验。1 .1 .1　检验血片的制备　取普通滤纸 ,切成 1 0mm宽 ,1 0 0 …     

囊虫病特异诊断方法的研究

应用间接ELISA对囊虫粗抗原、B抗原、用等电聚焦技术分离的抗原组分及特异McAb亲和层析抗原的特异性作了评价,结果均不理想。用McAb分析查明,在某些囊虫抗原分子上既有特异性抗原决定簇,又有非特异性决定簇。应用特异McAb以R-PIⅡ和Ⅰ-ELISA检测囊虫病人和猪的血清抗体,结果完全消除了假阳性反应;用R-PIⅡ微量法和Ⅰ-ELISA检测,病人血清的阳性率为87.36%(76/87)和89.66%(78/87),病猪血清的阳性率为89.32%(92/103)和86.41%(89/103);用R-PHI玻片法检测,病猪血清的阳性率为87.32%(90/103)。     

猪囊虫循环抗原的特异性

用兔抗囊虫粗抗原IgG,以ELISA双抗体夹心法检测病、健猪血清,阳性率分别为10.68％和5.30％,两者之间无显著差异;经免疫复合物解离处理后,病、健猪血清的阳性率分别为35.29％和2.3％,两者之间差异显著。琼脂凝胶双扩散试验查明,某些病、健猪血清中存在一种共同的抗原成分,导致交叉反应。这种成分不易被3.5％PEG沉淀。病猪血清中还存在一种特异抗原成分,其反应性强,主要以免疫复合物的形式存在。     

大通地区ELISA诊断猪囊虫病及剖检对比试验报告

采用ELISA试验检查抗猪囊虫抗体的方法,对来自大通地区530头份猪的血样进行猪囊虫病诊断,并对其中的77头份进行剖检对比。结果ELISA诊断阳性率为7.35％,阴性率92.6％,其中脑山地区的阳性率为8％,浅山地区为5.6％,川水地区为4.9％。5     

斑点金标渗滤法检测猪囊虫病

以亲和层析原理为基础,用猪囊虫纯化抗原作为检测用抗原,胶体金直接标记抗原,建立了斑点金标渗滤法诊断猪囊虫病的方法。其中囊虫抗原与胶体金溶液结合的最佳pH值为7.5,最佳浓度为52 mg/mL,检测时血清的最佳稀释度为1∶10。建立的斑点金标渗滤法检测猪囊虫病血清均为阳性,正常猪及其他病猪血清均显示为阴性,整个检测时间只需要5 min左右。试验结果显示,该方法操作简便、快速、特异性好,适用于猪囊虫病的临床诊断和流行病学调查。     

囊虫病循环抗原酶联免疫试剂检测盒的研制

以部分纯化囊虫抗原免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠,取其脾细胞与 Ｓ Ｐ２／０ 细胞融合制备抗囊虫循环抗原（ Ｃ Ａ） Ｍｃ Ａｂ ,共获得 ８ 株分泌抗囊虫 Ｃ Ａ Ｍ ｃ Ａｂ 细胞株。经鉴定,筛选出组合后能获得最佳检测效果的 Ｃ Ａ Ｍ ｃ Ａｂ细胞株 Ｍ ｃ Ａｂ １ Ｃ７（包被）和 Ｈ Ｒ Ｐ１ Ｂ５ 作为检测用的 Ｍ ｃ Ａｂ,用其建立了检测囊虫 Ｃ Ａ 的双抗体夹心 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ方法,并研制了囊虫病 Ｃ Ａ 检测试剂盒。试剂盒用于检测囊虫病 Ｃ Ａ,敏感、特异、快速、简便,囊虫病血清 Ｃ Ａ的检出率为 ９１．４３％ ,脑脊液 Ｃ Ａ 的检出率为 ９４．４４％ 。     

用BA-ELISA法诊断猪囊虫病研究

用方阵滴定确定的BA－ELISA法对宰后检验确认后为猪囊虫病的阳笥血清26份，阴性血清808份进行检测，其阳性符合率为100％，阴性附合率为99．9％，进行重复性试验，重复率为100％，经与旋毛虫，弓形虫、细颈囊尾蚴和猪蛔虫等病的阳性血清试验均无交叉反应，BA－ELISA法的敏感性高于常规ELISA法。     

应用微量全血酶联免疫吸附试验诊断猪囊虫病的报告

对于猪囊虫病的活体检疫,本地普遍采用舌检法,常发生漏检。为解决这个问题,于1986年6月份用酶联免疫吸附试验(ELISA)和舌检两种方法对我县毛都站镇12个村的2215头猪进行了猪囊虫病的普查,藉以探讨ELISA的敏感性及其实用价值,为今后搞好猪囊虫活体检疫提供借鉴。     

基于重组猪囊虫18 ku抗原的间接ELISA方法的建立

利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从猪囊尾蚴中克隆到18 ku蛋白基因,将扩增产物与pGEM-T Easy载体连接后测序分析.将目的基因亚克隆至表达载体,构建重组质粒pGEX-CE18,经转化大肠杆菌BL21 (DE3)后诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物.表达的目的蛋白纯化后作抗原建立检测猪囊虫抗体的重组蛋白间接ELISA方法.结果表明,18 ku蛋白基因在大肠杆菌中成功表达,表达产物约为35 ku的融合蛋白,并能被猪囊虫感染血清识别.经薄层扫描分析,表达量占菌体蛋白总量的28%.与商品化ELISA试剂盒平行检测178份阳性血清样品,二者的符合率为98.83%,说明建立的重组蛋白ELISA方法可用于猪囊虫病的诊断.     

猪囊虫病快速免疫诊断技术的研究与应用

用纯化的猪囊尾蚴囊液蛋白作诊断抗原,吸附于硝酸纤维素膜片上,经４０％乙醇固定,以斑点酶联免疫吸附法检测猪囊虫病抗体。结果发现：在一抗,二抗和底液中加入１０ｍＭ ＥＤＴＡ,四甲基联苯胺作显色剂,１ｈ内即可完成诊断,并显著提高免疫诊断的灵敏性和特异性。     

ELISA和DIA对猪囊虫病诊断的比较

应用ELISA和DIA两种方法,采用同一抗原,同一结合物,对956份猪血清进行了猪囊虫病的检测对比试验。结果,DIA和ELISA的特异性分别为99.57％与98.88％,敏感性分别为98.39％和97.18％,无明显差异。但在抗体滴度、操作时间、抗体消长规律、诊断液的用量等方面,DIA明显优于ELISA。     

消灭猪囊虫病的区域示范模式

猪囊虫(又称猪囊尾蚴)病是人畜共患的一种寄生虫病,也是肉品卫生检验的重要项目之一。 我国猪带绦虫和猪囊虫病分布相当广泛,据统计,在28个省市发生和流行。其中以华北、东北和西南地区较为严重。 关于猪囊虫病诊断和免疫问题,国内外均有报道,普遍认为较实用的临床诊断方法,为间接血凝试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。张高迪     

贵州省猪囊虫病流行病学调查

贵州位于祖国的西南部,是一个多民族的省份。近年来在威宁、册亨、贵l;11、从江等地开展肉品检验时不时地检获猪囊虫。为了解我省猪囊虫病的流行情况,为防治：一工作提供科学依据,我们先后在9个地、外1、市的36个县开展调查研究工作。】材料和方法1．I待检血片的制备：将新华牌滤纸用0．1％叠氮钠液浸泡阴干、剪成条,按常规法采集猪耳血,纸条一端吸血,一端编号,冰箱保存待检。1．2解剖猪的来源：在9个地（I1、市）、36个县随机解剖（结合肉检进行）,并对畜主族别、饲养方式、猪的年龄等进行详细调查。1．3间接血凝试验抗原：购于…