农杆菌介导CBF1基因转化安祖花的研究

[目的]为获得耐低温安祖花奠定基础。[方法]利用农杆菌介导CBF1基因侵染安祖花,并研究不同浓度乙酰丁香酮(AS)和侵染时间对转化后安祖花抗性愈伤组织的存活率和抗性芽分化率的影响。[结果]以重组质粒pBI121-CBF1为模板,利用CBF1cDNA全长的引物序列进行PCR扩增,获得约650bp的片段,表明重组质粒构建成功。在抗性培养基上筛选12周后,部分愈伤组织褐化死亡。用100μmol/LAS作为诱导物质时,抗性愈伤组织存活率和抗性芽的分化率较高。农杆菌侵染时间对转化后愈伤组织存活率和抗性芽分化率有一定影响。[结论]当AS浓度为100μmol/L、侵染时间为10min时,抗性愈伤组织的存活率及分化率最高,分别为48.6%和11.46%。     

根癌农杆菌介导油菜CBF1基因转化拟南芥

[目的]为油菜CBF1基因应用于作物抗逆遗传改良提供理论依据。[方法]采用根癌农杆菌介导法将油菜CBF1基因转入拟南芥,筛选抗性转基因拟南芥植株,进行PCR检测和GUS染色。[结果]与不抗潮霉素的野生型拟南芥幼苗相比,对潮霉素具有抗性的转基因拟南芥幼苗的叶片比较大,根特别长。PCR检测表明38株抗性拟南芥植株中有29株能扩增出与目的基因大小一致的条带,阳性率为76.3%,而野生型拟南芥植株没有扩增出相应条带。阳性PCR扩增产物的测序结果表明油菜CBF1基因已经转入到拟南芥。GUS染色表明有22株转基因拟南芥植株呈现阳性。[结论]油菜CBF1基因可以整合到拟南芥基因组并能稳定表达。     

农杆菌介导大豆HS转录因子基因转化体系的建立

[目的]建立农杆菌介导的大豆HS转录因子基因转化体系。[方法]以携带耐盐耐旱转录因子HS基因的质粒HS/pCB302为表达载体,龙选1号大豆品种为试材,进行了除草剂浓度和外植体的筛选以及基因转化的预培养试验。[结果]以大豆茎段为外植体,在培养基中加入5 mg/L浓度的除草剂,在不进行预培养的条件下,获得最高的基因转化效率（22.3%）。[结论]该基因转化体系为培育耐盐抗旱大豆品种奠定了基础。     

农杆菌介导rolC基因转化烟草植株的研究

通过根癌农杆菌介导手段，将来自发根农杆菌的rolC基因转化到烟草（Nicotiana tabacum)植株的基因组，并借助GUS组织化学法，PCR扩增法和Southen杂交进行了鉴定证实。 rolC基因改变转基因烟草植株某些性状的特点，如植株高变矮，花冠变小，雄蕊 变短等，还发现rolC基因具有延迟转基因烟草植株花期的作用。     

农杆菌介导的水稻基因转化

以水稻的两个亚种籼稻和粳稻作为受体,比较了不同外值体、vir诱导物等对根癌农杆菌转化的影响,建立了农杆菌介导的水稻高效转基因实验体系。依据该体系,以粳籼DREW的幼愈伤组织和籼稻D汕B的幼穗愈伤组织为受体,经农杆菌AGL1／pCAMBIA1301转化后,获得了超过50%的潮霉素抗性愈伤筛选率,并获得再生植株。     

农杆菌介导phyB基因转化枳壳研究

以枳壳(Poncirus trifoliate (L. ) Raf.)实生苗上胚轴为试材,利用农杆菌介导法将光敏色素基因phyB导入其中,建立了枳壳实生苗的遗传转化体系,共获得27株抗性植株,PCR检测结果表明其中有5株扩增出phyB基因的特异目的带;RT-PCR分析结果表明 phyB基因在phyB3,phyB4株系枳壳基因组中能表达;Li-6400光合测定仪对转基因枳壳进行的光合特性测定结果显示,转基因枳壳光合效率高于对照;转phyB基因枳壳植株在形态上与对照也存在差异,表现出植株矮化、节间缩短、叶面积变小.     

农杆菌介导的Thaumatin基因转化烟草的研究

以暗培养3 d的烟草叶片为受体,以Thaumatin为目的基因,应用根癌农杆菌介导法对烟草进行遗传转化,同时以烟草叶片为材料,对影响转化的几个因素进行优化研究,结果表明:侵染20 min、美罗培南浓度为25 mg/L时有利于提高转化率;经浓度为2.0 mg/L的PPT筛选获得的抗性植株经PCR、GUS组织化学染色和Southern杂交分析鉴定,初步证明外源基因Thaumatin已整合到烟草的基因组中。     

农杆菌介导的水稻转化及bar基因稳定遗传

以秀水11、072和ZH9905的胚性愈伤组织为受体，通过农杆菌介导法将抗除草剂基因bar导入水稻基因组，经PCR、Southern杂交分析获得大量转基因植株。除草剂喷洒试验表明，转基因水稻对除草剂Basta具有高度的抗性。对R1代植株分析表明外源基因已遗传给后代，部分株系的分离比率符合3：1。对部分转基因水稻植株考察结果表明，部分转基因植株的农艺性状与亲本相似，但育性下降。     

农杆菌介导的MADS-box基因转化黄瓜初步研究

试验通过叶盘转化法,利用根癌农杆菌介导,将从黄瓜中克隆到的MADS-box同源基因—CSMADS06基因,转化到烟草和2种不同品系的黄瓜S06和S52中,经过除草剂筛选获得14株转化烟草和28株转化黄瓜。PCR检测和GFP荧光检测证实,外源的CSMADS06基因已转入这些植株中。阳性率分别为2.36%(烟草),4.1%和2.9%(黄瓜)。抗性植株已开花结果并获得子一代植株。     

农杆菌介导的沙田柚基因转化系统建立研究

本文以沙田柚上胚轴为对象,进行了农杆菌介导的基因转化系统建立影响因素研究.研究结果表明沙田柚上胚轴卡那霉素选择浓度为70mg几上胚轴与农杆菌的共培养基中加入150uM的As可提高上胚轴Gus瞬时表达阳性率;实生苗苗龄以20-25天为宜;上胚轴最适预培养时间为3天,卡那霉素起始选择浓度降为50mg几有利于转化率的提高.     

红掌叶片水藻生长条件及其对红掌生长的影响

[目的]研究温室中有利于红掌生长发育及抑制水藻生长的条件。[方法]以红掌的三个品种为试材,定时测定6个温室的温、湿度,观察红掌试验苗的水藻生长情况,计算红掌水藻感染率。[结果]温度为18.3~24.0℃,湿度为70.1%~83.0%,通风不良的环境适合水藻生长;水藻生长与红掌品种有关,在同一温室中,亚利桑娜的水藻感染率要比红色恋人的高;感染水藻的红掌试验苗平均增长高度比没感染水藻的试验苗低1.48 cm、光合速率比没感染的低6.46μmol/(m2.s)。[结论]较低温度、较高湿度和通风不良的条件有利于水藻生长,水藻对红掌生长有负面影响。     

红掌种质资源数据库的建立

2003年1月开始陆续从国内外收集112份花烛属种质资源,其中红掌品种104个、火鹤花品种6个、观叶花烛品种2个。2004年3月将其种植于环控温室内资源保存苗床上,建成了国内首个红掌种质资源库。通过栽培观察和性状调查,获得112份花烛属种质资源的定量性状数据43000多个、定性性状数据2000多个,经过整理后利用广东生物种质资源数据管理与分析系统,将112份种质资源的各类信息发布上网,至2004年5月初步建成了国内首个红掌种质资源数据库。     

红掌组培苗污染微生物的分离鉴定和防治

红掌(Anthurium andreanum),又名安祖花、花烛,为天南星科(Araceae)花烛属(Anthurium)植物,原产中美和南美热带雨林中,常附生于高大的树干上.红掌因其花大色艳、花形独特、瓶插寿命长、周年开花的特性而深受消费者青睐,在全球热带花卉贸易中,其销售量仅次于兰花,名列第二.     

国内外红掌生产与销售概况

红掌属天南星科Araceae,红掌属Anthurium,多年生,长绿,观花和观叶兼用的草本植物。红掌的别名也很多,如花烛、安祖花、灯台花、尾花、鸡冠、漆花、火鹤花等。在适宜条件下,可全年开花,有鲜红、深红、粉红、橙色等品种。红掌花叶兼美,轻盈多姿。花形如合拢的手掌,它是目前欧美最常见的室内盆栽观花植物,也常用于切花观赏。红掌从发现到现在,不过百余年的历史,但通过人工选育,逐渐成为举世公认的花卉名品还是近40年的事。1　红掌的历史哥伦比亚及厄瓜多尔是红掌的原产地,其自然分布范围的北界在北美洲南部墨西哥的奥里萨巴。1853年,在拉…     

根癌农杆菌介导的水稻遗传转化研究进展

系统介绍了根癌农杆菌介导水稻遗传转化的发展历史、影响遗传转化的因素、侵染愈伤组织的方式及转基因植株的后代分析等,并探讨了水稻遗传转化的应用前景及存在的问题。     

根癌农杆菌介导的马铃薯茎段遗传转化条件的研究

以马铃薯茎段作为受体转化材料.通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,对影响马铃薯遗传转化的多种因素(抗生素质量浓度、农杆菌质量浓度、共培养时间等)进行研究.结果表明,卡那霉素(kanamycin,Kan)梯度在抗性愈伤组织诱导、芽分化过程中以100 mg·L-1为宜,但在生根过程中以50 mg·L-1为宜,菌液质量浓度以OD600为0.5,共培养时间为3 d,抑菌剂的选择以羧苄霉素(carbenicillin,cb)更适合.对转基因植株进行PCR检测表明,目的基因已整合到马铃薯基因组中.     

农杆菌介导的Vf基因转化柱型苹果的研究

以柱型苹果"鲁加6号"为试材,研究了根癌农杆菌介导的Vf基因转化条件.研究结果表明,该转化的优化条件为:共培养时间为3 d;延迟培养阶段头孢霉素浓度为200 mg/L,时间为6 d;选择培养阶段,芽分化过程卡那霉素浓度为15mg/L,生根过程卡那霉素浓度为10mg/L.PCR检测结果初步表明,外源Vf基因已导入转化植株基因组中.     

农杆菌介导法遗传转化巴西橡胶树转化条件的研究

用包含GAI基因的EHA105农杆菌,对巴西橡胶树海垦2花药愈伤组织进行侵染,对多项转化条件进行了梯度实验。结果表明选择培养30d的橡胶花药愈伤组织,农杆菌菌液浓度OD600为0．6时侵染3min,20℃共培养2d,Cef浓度为200mg／L进行抑菌培养是比较合理的转化条件。     

花粉介导的花青素调节基因NtAn2转化玉米研究

利用超声波辅助花粉介导法将花青素基因Nt An2导入玉米自交系郑58,并优化超声波辅助花粉介导基因转化方法的遗传转化体系。以新鲜的郑58玉米花粉为试验材料,检测其在不同浓度的蔗糖溶液中的体外萌发率;通过正交试验设计,对超声波处理功率、处理时间、处理次数3个因素进行优化,以确定最优转化组合;对收获的籽粒进行PCR检测。结果表明,玉米自交系郑58的花粉最适宜的蔗糖溶液浓度为20%;超声波处理最佳参数为:处理功率150 W,处理时间5 s/次,处理次数6次;PCR分子检测表明,其中有3粒含有阳性条带,且这3粒中有2粒呈紫色,初步证实,Nt An2已被整合到玉米基因组中,并且可以被用于对转化子的直观筛选。研究确立了超声波辅助花粉介导法遗传转化的最佳体系,为提高该植物基因转化方法的效率奠定了基础。