宽体金线蛭5个地理群体遗传多样性的RAPD分析及生长指标的比较研究

利用RAPD标记技术对宽体金线蛭5个地理群体的遗传多样性进行RAPD分析,并对其生长指标进行了比较研究。结果表明:江苏兴化和黑龙江宾县群体间的亲缘关系最远,遗传差异性较大,江苏兴化和江苏宿迁群体间的亲缘关系最近,遗传差异性较小;聚类分析显示江苏地区3个群体和湖北大悟县群体聚为第一大类,黑龙江宾县群体聚为第二大类,其中第一大类中江苏兴化和江苏宿迁群体聚为第一亚类,江苏吴江和湖北大悟县群体聚为第二亚类;无论是仔蛭还是幼蛭黑龙江宾县的生长指标都明显低于其他4个地区。     

宽体金线蛭5个地理群体遗传多样性的RAPD分析及生长指标的比较研究

利用RAPD标记技术对宽体金线蛭5个地理群体的遗传多样性进行RAPD分析,并对其生长指标进行了比较研究。结果表明:江苏兴化和黑龙江宾县群体间的亲缘关系最远,遗传差异性较大,江苏兴化和江苏宿迁群体间的亲缘关系最近,遗传差异性较小;聚类分析显示江苏地区3个群体和湖北大悟县群体聚为第一大类,黑龙江宾县群体聚为第二大类,其中第一大类中江苏兴化和江苏宿迁群体聚为第一亚类,江苏吴江和湖北大悟县群体聚为第二亚类;无论是仔蛭还是幼蛭黑龙江宾县的生长指标都明显低于其他4个地区。     

宽体金线蛭繁殖性能及蛭苗生长特征研究

为研究宽体金线蛭繁殖性能和蛭苗生长特征,在室内条件下对宽体金线蛭野生群体进行人工繁殖,统计了每条亲蛭产茧数量、卵茧大小及卵茧孵化蛭苗数量,并研究了蛭苗生长特征。结果显示:(1)宽体金线蛭每条亲蛭产茧1~4枚,平均产茧(2.45±0.88)枚,体质量10.00 g以上亲蛭平均产茧量[(2.80±0.79)枚/尾]显著多于体质量10.00 g以下亲蛭[(1.71±0.62)枚/尾],产茧后亲蛭体质量下降明显,平均下降52.38%±9.57%;(2)卵茧呈卵圆形,随着产茧时间延长,卵茧个体变小,卵茧平均质量为(0.873 5±0.378 4)g,平均长为(2.202 7±0.493 6)cm,平均每个茧孵出蛭苗(27.61±10.81)尾;(3)每条亲蛭繁殖蛭苗27~136尾,平均(65.25±34.91)尾;(4)在水温20.5~26.0℃条件下,经过21 d饲养蛭苗平均体质量从(0.020 9±0.002 8)g增加到(0.298 1±0.090 5)g,平均体质量增加了近13倍,养殖开始特定增重率出现一个高峰,之后在26.00℃左右出现第二个生长高峰。结果表明,宽体金线蛭繁殖能力强,蛭苗体质量增长迅速。     

宽体金线蛭生殖系统形态结构与胚胎发育

宽体金线蛭是一种被广泛人工养殖的药用动物,其繁殖力的提高有利于增加养殖者的经济效益,取宽体金线蛭种蛭在室内养殖于自制的水蛭水族箱,取材进行解剖和石蜡切片,观察其生殖系统的形态结构.在宽体金线蛭产下卵茧后,观察其胚胎发育的主要阶段.实验结果表明:(1)宽体金线蛭是雌、雄同体的动物,其雄性生殖系统包括精巢、输精管、贮精囊、射精球、前列腺、阴茎鞘和雄孔几部分,雌性生殖系统包括卵巢、输卵管、蛋白腺、阴道囊和雌孔几部分;(2)宽体金线蛭卵茧产下约3h,受精卵进入二细胞期,约8h进入4细胞期,约12h进入8细胞期,约1d进入多细胞期,约3d进入囊胚期,约5d进入原肠胚期,约28d孵出幼蛭.     

宽体金线蛭幼苗培养技术试验

为研究福寿螺(Pomacea canaliculata)幼螺和田螺(Procambarus clarkii)幼螺对宽体金线蛭(Whitmania pigra)幼苗的养殖效果,将宽体金线蛭幼苗饲养在以50目聚乙烯制作的网箱内,每个网箱均放入500尾刚孵化出来的宽体金线蛭幼苗,分为福寿螺组和田螺组2个组,每组5个网箱。福寿螺组以福寿螺幼螺为饵料培养宽体金线蛭幼苗,田螺组为对照组,以田螺幼螺为饵料培养宽体金线蛭幼苗,试验共进行39 d。结果表明,福寿螺组和田螺组中宽体金线蛭幼苗的成活率和日增重均存在显著差异(P0.05),说明福寿螺幼螺较田螺幼螺更适合作为宽体金线蛭幼苗的饵料。     

土壤湿度及稻草基质对宽体金线蛭繁殖性能的影响

[目的]探明土壤湿度及稻草作为基质对宽体金线蛭繁殖性能的影响,为促进宽体金线蛭规模化养殖发展提供参考依据.[方法]将规格整齐的2龄性成熟且具有生殖环带的宽体金线蛭亲本放养到30%、40%、50%、60%和70%等5个土壤湿度及40%湿度稻草基质的养殖箱中,分别观察其亲本存活率、产茧数、卵茧规格、卵茧孵化率及孵化量情况.[结果]经过30 d的繁殖周期,不同土壤湿度下的宽体金线蛭亲本存活率、产卵茧数和产茧率存在显著差异(P<0.05,下同),但所产卵茧规格无显著差异(P>0.05,下同).其中,土壤湿度为60%时,亲本存活率、产卵茧数及产茧率最高,土壤湿度为30%时最低.通过拟合的回归方程计算得出:土壤湿度为58.80%时,卵茧孵化率最高,达95.56%;土壤湿度为57.61%时,卵茧孵化量最高,为27.59尾.40%湿度稻草基质条件下的宽体金线蛭亲本存活率、产卵茧数和产茧率均显著低于相同湿度土壤基质的结果;在两种基质条件下,宽体金线蛭卵茧的孵化率和孵化量也无显著差异,孵化率均高于90.00%,孵化量为20.67~22.00尾.[结论]土壤湿度对宽体金线蛭的繁殖性能和卵茧孵化效果影响显著,但对所产卵茧规格无显著影响,其中以土壤湿度保持在60%时的效果最佳.     

宽体金线蛭人工繁殖技术

介绍了宽体金线蛭幼苗人工繁育技术,包括场地和水质选择,产卵池、孵化池和防逃设施的建设,宽体金线蛭的种蛭选择和饲喂以及卵茧孵化、幼苗饲喂和管理的关键技术。     

温度对宽体金线蛭生长的影响

[目的]研究不同温度对宽体金线蛭的生长的影响,为宽体金线蛭的人工养殖提供科学依据。[方法]随机分为4个试验组,在不同温度（15、20、25、30℃）下养殖20d,每组2d测1次体重,比较各组宽体金线蛭的日增重。[结果]15、20、25、30℃条件下平均日增重分别为2．04％、2．99％、3．23％、0．62％。在15～20℃范围内,随着温度的升高其生长明显加快（P〈0．05）;20～25℃平均日增重率最高,达到2．99％～3．23％,差异不显著（P〉0．05）;超过30℃则宽体金线蛭生长显著下降,存活率为55％。[结论]宽体金线蛭生长的适宜温度是20～25℃。     

网箱养殖密度对宽体金线蛭生长性能的影响

为研究养殖密度对宽体金线蛭(Whitmania pigra)生长性能的影响,将室外网箱养殖密度设计为30(D1)、40(D2)、50(D3)、60(D4) ind/m~2,试验持续35 d,试验结束后测定各组宽体金线蛭的生长性能指标。结果表明,在本试验条件下,随着放养密度的增加,宽体金线蛭的体质量和体长增加量随之增加,达到一定的养殖密度后,又转而下降;在养殖密度为50 ind./m~2的条件下,日增体质量最大;在养殖密度为40 ind./m~2的条件下,终末体长、日增体长和存活率最大。综合前人研究结果与生产实践来看,宜将养殖密度控制为40 ind./m~2,有助于保证宽体金线蛭虫体健康,并促进其较快地生长,结果可为网箱养殖宽体金线蛭适宜养殖密度的确定提供了科学依据。     

温度和饵料对宽体金线蛭仔蛭生长和存活的影响

设置4组不同的试验温度(15、20、25、30℃),随机各放入100条宽体金线蛭(Whitmania pigra)仔蛭,养殖25d后测定体长、体重和存活率,探讨了温度对宽体金线蛭仔蛭生长和存活的影响;另外随机设置3个试验组,在相同温度下分别投喂蛋黄、轮虫+中华圆田螺、轮虫+静水椎实螺,探讨了饵料对宽体金线蛭仔蛭生长和存活的影响。结果表明:宽体金线蛭仔蛭在不同温度条件下的生长速度和存活率存在显著差异(P0.05)。在水温为25℃条件下,仔蛭生长速度最快、存活率最高;而30℃下的仔蛭存活率最低、生长最慢。投喂不同的饵料,仔蛭的生长速度和存活率也有显著的差异(P0.05)。投喂轮虫和静水椎实螺组的仔蛭生长速度最快、存活率最高;投喂蛋黄组的仔蛭存活率最低、生长速度最慢。     

宽体金线蛭的生物学特性及养殖技术

宽体金线蛭是我国中药材水蛭的主要品种和来源,而其野生数量急剧下降。因此宽体金线蛭的人工养殖日趋受到重视。根据多年的研究和养殖试验,对宽体金线蛭的生物学特性(形态特征、活动和栖息习性、食性、繁殖)和养殖技术(养殖池的建造、种蛭来源及放养、繁殖、饲养管理)进行了综述。     

不同饵料对宽体金线蛭生长的影响

为确定宽体金线蛭的最佳饵料,在外界条件相同 (相同的温度、光照等)条件下,分别单独投喂螺蛳、河蚌和原生动物,以及混合投喂螺蛳和原生动物,每5 d称量1次体重,连续称量7次,35 d后比较各组宽体金线蛭的日增重。结果单独喂食螺蛳后,宽体金线蛭体重增加明显;在螺蛳饵料中添加原生动物,对宽体金线蛭的生长有进一步的促进作用;而单独投喂河蚌或原生动物后,宽体金线蛭的体重呈明显的下降趋势。试验表明螺蛳与原生动物混合是宽体金线蛭的最佳饵料。     

宽体金钱蛭的人工养殖

宽体金线蛭俗称蚂蟥,别名水蛭.水蛭的唾液中含有多种活性物质,其中最主要的是水蛭素(hirudin),是一种抗凝物质,具有一定的药用价值.现将宽体金线蛭人工养殖技术简介如下.     

养殖宽体金线蛭营养成分分析

采用国标方法对养殖宽体金线蛭(Whitmania pigra)的常规营养成分、氨基酸组成和脂肪酸组成进行测定及分析。结果显示,养殖宽体金线蛭鲜样中水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分含量分别为83.52%、13.03%、1.21%和0.95%;共检测出17种氨基酸,氨基酸总量(TAA)为639.73 mg/g,其中包括人体必需的氨基酸(EAA)7种,总量为230.57 mg/g,EAA/TAA和EAA/NEAA数值分别为36.04%和56.35%,符合FAO/WHO推荐的优质蛋白质标准;共检测出14种脂肪酸,总计含量是25.10 mg/g,其中饱和脂肪酸(SFA)和不饱和脂肪酸(UFA)含量分别为11.49 mg/g(45.78%)和13.61 mg/g(54.22%),必需脂肪酸(EFA)3种,含量为4.94 mg/g(19.68%)。结果表明,养殖宽体金线蛭常规营养成分与野生宽体金线蛭相似且略高;具有良好的氨基酸组成,蛋白质营养价值较高;药用氨基酸和脂肪酸组成均揭示了其在治疗心血管疾病及降血脂的积极作用。     

基于线粒体Cytb序列的3个宽体金线蛭群体遗传多样性分析

对江苏省扬州高邮、苏州张家港、泰州海陵3个地区宽体金线蛭自然群体的线粒体Cytb基因全序列进行了测定和分析。结果显示:宽体金线蛭Cytb基因全长1 146 bp,样本的A、G、T、C平均含量分别为27.57%、15.77%、43.49%、13.17%,A+T含量(71.06%)明显高于G+C含量(28.94%)。在77个宽体金线蛭样本中,共检测到96个多态位点,其中有58个简约信息位点,获得47个单倍型,共享单倍型数目1个。3个宽体金线蛭群体的平均单倍型多样性、核苷酸多样性、平均核苷酸差异数分别为0.9781、0.0133、15.20,其中泰州海陵群体的单倍型多样度(0.987 7)和核苷酸多样度(0.013 1)最高。3个群体间的遗传分化指数F_(st)为0.065 1～0.175 6,且差异显著(P0.05),不同群体间存在一定的遗传分化。分子方差分析(AMOVA)表明,11.13%的变异来自群体间,88.87%的变异来自群体内。用邻接法构建的单倍型系统发育进化树显示,不同地理群体的个体呈交错分布,没有形成明显的地理谱系。中性检验和核酸不配对分布结果表明,3个宽体金线蛭野生群体总体大小保持相对稳定,没有发生明显的种群扩张。     

宽体金线蛭基因组SSR序列特征分析 及其分子标记开发

[目的]分析宽体金线蛭基因组SSR序列特征,并开发多态性SSR分子标记,为宽体金线蛭种质遗传多样性分析及良种选育等提供有效的分子标记.[方法]利用基因组de novo测序技术对宽体金线蛭基因组进行扫描,通过序列拼接得到基因组序列,利用Tandem Repeats Finder v4.09查找拼接序列SSR位点,分析SSR序列特征并使用PRIM-ER3 Input(version 2.3.7)设计引物,随机选择三碱基、四碱基和五碱基SSR分子标记引物50对对8份宽体金线蛭DNA样品进行PCR验证,并以多态性SSR分子标记分析宽体金线蛭江苏高邮群体遗传多样性.[结果]测序拼接共得到148803个scaffolds序列,scaffold序列长度181~564229 bp,平均1544 bp,总长度230 Mb,N50为5948 bp,GC含量36.94%.宽体金线蛭基因组中三碱基重复SSR位点最多,有136890个,占总SSR位点的68.43%;其次为四碱基重复,有33769个,占总SSR位点的16.88%;六碱基、五碱基、二碱基和单碱基重复分别有11813、7110、6546和3907个,占总SSR位点的5.91%、3.55%、3.27%和1.95%.基序为AAT/ATA/TAA/ATT/TTA/TAT的SSR位点数量最多,其次为ATG/TGA/GAT/TAC/ACT/CTA、AGT/GTA/TAG/TCA/CAT/ATC和AAC/ACA/CAA/TTG/TGT/GTT,其他基序位点数量较少.有11871个SSR位点设计出引物,占总SSR位点的5.93%;选择的50对引物中有18对引物在8份宽体金线蛭DNA样品中具有多态性;群体遗传多样性检测发现宽体金线蛭江苏高邮群体18个SSR位点的平均等位基因(Na)3.81个,观测杂合度(HO)为0.0000~0.6429,平均为0.3631,期望杂合度(He)0.0701~0.7792,平均为0.4869,群体遗传多样性水平低.[结论]采用高通量测序技术开发SSR分子标记效率高,且新开发的18个宽体金线蛭SSR分子标记多态性丰富,可用于宽体金线蛭资源保护和利用.     

不同体质量规格的日本医蛭适宜越冬密度与繁殖性能研究

为了探究不同体质量规格的日本医蛭越冬的适宜密度以及对卵茧、幼苗的影响,选用不同体质量规格(A组为1 g, B组为2 g, C组为3 g, D组为4 g, E组为混合规格体质量组)的日本医蛭于面积为0.5 m~2的自制越冬池中越冬繁殖,记录越冬后日本医蛭存活数、产茧数量及卵茧孵化情况.结果显示, A-D组最佳越冬密度分别为3.174 kg/m~2,3.188 kg/m~2,2.904 kg/m~2和3.168 kg/m~2. A-D组平均产茧率为1.15,1.21,1.20,1.20.卵茧质量、幼苗平均质量随日本医蛭越冬规格增加而增加,出苗数也相应增多.结果表明,生产中为了获得较大规格的幼苗,应选择相对较大的亲本进行越冬繁殖,且单位面积总投放量控制在3.0～3.5 kg时,存活率最高,平均产茧率最大.     

蛭弧菌在大菱鲆养成中的应用研究

[目的]用蛭弧菌促进大菱鲆的生长,提高存活率,消除养殖水体中的弧菌。[方法]采用20 d的换水周期,以不添加蛭弧菌的养殖池为对照组（B组）,往水体中添加蛭弧菌的养殖池为蛭弧菌添加组（C组）,以生产性的养殖池作为参照（A组）,以成活率、增重率、体重平均日增长量、体长增长率、体长平均日增长量、肥满度为判断依据,确定蛭弧菌对大菱鲆生长的影响;对换水前后各组养殖水体中所含弧菌数进行检测。[结果]蛭弧菌添加组大菱鲆的生长指标和存活率显著高于生产组和对照组（P〈0.05）;与生产组相比,蛭弧菌添加组大菱鲆的成活率提高了13.23%,增重率、体重平均日增长量、体长增长率、体长平均日增长量、肥满度分别提高了663%、130.35mg、28.09%、31.82μm、4.99。蛭弧菌添加组的弧菌数明显减少。[结论]蛭弧菌能够提高大菱鲆的成活率,促进其生长发育,并能有效控制养殖水体中弧菌数。     

宽体金线蛭的实用养殖技术

水蛭俗称蚂蟥，是传统的中药材之一，一直靠自然采捕来满足市场供给。随着现代生物技术的应用和提高，水蛭素的提取加工和医学临床应用，以及中成药的开发、研制和推广，对水蛭的需求量逐年增多，加之自然环境的污染和人为过度采捕，资源总量逐年减少，价格却在不断攀升，人工养殖就成为发展的必然。宽体金线蛭是目前中药材市场上主要的经营品种，也因其个体大、生长快、产量高成为养殖的首选对象。     

水蛭养殖难在哪儿

野生水蛭可以人工养殖吗?　　水蛭俗称蚂蟥,野生品种数量多。最常见泥蚂蟥体形小,多生长在稻田里,不宜养殖。适宜人工养殖的水蛭有几种?　　可供药用水蛭主要有三种：日本医蛭(稻田吸血蚂蟥)、尖细金线蛭(茶色蛭)、宽体金钱蛭(扁水蛭)。前两种体形较小,养殖效益低,宽体金钱蛭体形大,长6—13厘米,宽1.3—2.2厘米。水蛭的市场价格怎样?　　水蛭干品药市收购价每公斤100—150元,这一价格三五年内不会有太大变化。目前搞水蛭养殖人很多,成功的却很少。原因在于多数人未掌握水蛭养殖技术的关键环节,对水蛭生活习性根本不了解。邮寄水蛭…