喜马拉雅旱獭弓形虫病血清学检测

用弓形虫的重组蛋白GST-SAG1作为ELISA诊断抗原,采用ELISA检测方法,对青海省祁连县喜马拉雅旱獭血清进行了弓形虫病的血清学检测。结果表明,被检92份喜马拉雅旱獭共检出阳性血清25份,阳性率约为27.17%。结果提示,青海省祁连县的喜马拉雅旱獭中存在弓形虫病的感染。     

喜马拉雅旱獭泌尿器官组织学观察

对青藏高原喜马拉雅旱獭的肾、输尿管、膀胱和尿道进行了组织学观察。结果表明:皮质肾单位较髓质肾单位多,在大小上无明显差异;输尿管管壁由黏膜、肌层和外膜组成;膀胱壁包括黏膜、黏膜下层、肌层和外膜;尿道壁由变移上皮、海绵体、肌层和外膜构成。     

喜马拉雅旱獭部分脏器的组织学观察

喜马拉雅旱獭(Marmota himayana)属于啮齿目、松鼠科、旱獭属。它主要分布于青藏高原高寒草原草甸环境中，是青藏高原特有动物。近年来，国内一些学者对旱獭进行了生态学、人工驯养和组织学方面的研究，但对喜马拉雅旱獭泌尿器官组织结构未见系统报道。为丰富动物组织学内容，也为高原医学积累资料，对喜马拉雅旱獭的部分脏器进行了组织学观察。     

猪弓形虫病的ELISA诊断及试剂盒建立

用弓形虫的重组蛋白P30作为ELISA诊断抗原,进行了ELISA诊断试剂盒的建立,并对互助县猪弓形虫病的血清学诊断。经对所收集的139份猪血清抗体进行检测,共检出阳性血清8份,阳性率为5.76%。结果说明互助县猪群中存在弓形虫病的感染。     

青海省牛弓形虫病的ELISA诊断及试剂盒建立

用弓形虫的重组蛋白SAG1作为ELISA诊断抗原,建立了ELISA诊断试剂盒,并对青海省牛群进行弓形虫病的血清学诊断。经对所收集的1856份牛血清进行弓形虫抗体检测,共检出阳性血清71份,阳性率约为3.83%。结果表明青海省牛群中存在弓形虫病的感染。     

阿尔金山自然保护区喜马拉雅旱獭夏季的食性分析

分析新疆维吾尔自治区巴音郭楞蒙古自治州若羌县阿尔金山国家级自然保护区喜马拉雅旱獭夏季食物组成及营养生态位,为喜马拉雅旱獭科学管理提供基础资料。2012年7~8月,对采集的喜马拉雅旱獭60份粪样组合为10个复合样本进行粪便显微组织分析,同时将研究区域采集的植物标本进行鉴别,之后通过显微镜对比分析确定食物组成及比例,并计算生态位宽度。喜马拉雅旱獭夏季采食11科18属20种植物,按科统计,禾本科(24.55%)、莎草科(17.82%)、豆科(16.31%)和菊科(10.57%)是喜马拉雅旱獭的主要食物。参考装片集合的46种植物的大约一半(43.48%)出现在粪样中。喜马拉雅旱獭夏季的食物以禾草和杂类草为主。     

喜马拉雅旱獭心肌低氧适应的组织学特点

为了阐明喜马拉雅旱獭心肌适应高原低氧环境的组织学特点,试验以5只成年喜马拉雅旱獭为研究对象,以SD大鼠为对照,采取左心室心肌组织,运用组织学技术研究其心肌肌纤维直径和表面积密度;免疫组织化学方法检测心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)及微血管密度(MVD)等指标,运用电镜技术测算心肌线粒体的部分结构参数,包括平均体积、面数密度、体积密度等。结果表明：喜马拉雅旱獭心肌肌纤维直径比SD大鼠小,并存在显著差异(P<0.05),而喜马拉雅旱獭心肌肌纤维表面积密度大于SD大鼠且差异显著(P<0.05),喜马拉雅旱獭的VEGF含量和MVD均高于SD大鼠且差异显著(P<0.05),喜马拉雅旱獭心肌线粒体的平均截面积、平均体积均小于SD大鼠且差异显著(P<0.05),而喜马拉雅旱獭心肌线粒体的体积密度、面数密度均大于SD大鼠且差异显著(P<0.05)。说明与SD大鼠相比,喜马拉雅旱獭的心肌特点表现为肌纤维直径小、表面积密度大、VEGF含量和MVD高的特点,心肌线粒体表现为平均体积小、面数密度和体积密度大的特点,喜马拉雅旱獭心肌对高原具有低氧环境适应的组织学特征。     

低氧适应动物喜马拉雅旱獭的组织学观察

对生活在青藏高原（海拔３２００－３４００m）喜马拉雅旱獭的肝脏、肺、肾、卵巢、甲状腺等器官结构进行了组织学观察。     

喜马拉雅旱獭对D型肉毒毒素的敏感性实验

本文主要是测定喜马拉雅旱獭对D型肉毒梭菌毒素的敏感性。应用序贯法测定了D型肉毒毒素生物灭鼠剂对喜马拉雅旱獭最小致死量(LD01)。测定结果为D型肉毒毒素生物灭鼠剂对喜马拉雅旱獭的LD01为375万MLD,表明喜马拉雅旱獭对D型肉毒毒素等敏感性相对高原鼠兔和中华鼢鼠低。     

人工饲养条件下喜马拉雅旱獭血脂和血液流变学指标测定

测定人工饲养条件下喜马拉雅旱獭血脂及血液流变学指标,并对雌雄个体间及与野生状态下喜马拉雅旱獭相关指标进行比较。结果表明:人工饲养喜马拉雅旱獭雌、雄性个体全血黏度(ηa)、全血还原黏度(ηn)、红细胞压积(HCT)、红细胞刚性指数(IR)及血沉方程K值(KESR)差异均不显著(P0.05);野生状态与人工饲养条件下的旱獭血液流变学和血脂水平比较显示,野生成体旱獭血浆黏度(ηp)、红细胞沉降率(ESR)、全血还原黏度(ηn)、红细胞电泳指数(ES)、胆固醇水平(CHOL)、甘油三酯(TG)水平均显著高于人工条件下驯养旱獭的指标(p0.01)。以上数据的获得将为喜马拉雅旱獭作为实验动物进行应用开发提供基础资料。     

羊弓形虫病间接ELISA诊断方法的建立

为比较5种弓形虫抗原的诊断效果,建立实用的羊弓形虫病诊断方法,本研究制备了弓形虫速殖子全虫抗原和4个重组蛋白(GRA1、MIC3、MAG、BAG1),正交试验比较其免疫反应性,从中筛选出相对优势抗原并建立羊弓形虫病间接ELISA(iELISA)诊断方法,用于检测弓形虫特异的IgG抗体。研究结果表明：除BAG1外上述4种抗原均具有较好的免疫反应性,综合考虑选择致密颗粒蛋白1(GRA1)作为诊断抗原建立了GRA1-iELISA,其检测弓形虫抗体灵敏度大于1∶100(血清稀释度),且不与羊莫氏巴贝斯虫、吕氏泰勒虫、捻转血毛线虫阳性血清发生交叉反应,特异性良好;运用建立的方法和改良凝集试验分别对采自山羊屠宰场的80份血清样品进行检测,测得的弓形虫感染阳性率分别为28.75%(23/80)和31.25%(25/80),二者总符合率为82.5%。本研究建立的ELISA检测方法对羊弓形虫病的诊断以及商业化试剂盒的开发具有重要参考价值。     

青海改良种绵羊弓形体病的血清学调查

应用间接血凝试验(IHA)，对采集的160份青海改良种绵羊血清，进行了弓形体病的血清学抗体定性检测。结果检出7份阳性血清，血清学阳性率为4．38％。     

青海省动物弓形虫病的血清学检测

应用弓形虫的间接血凝试验（IHA）,对来自青海省境内的部分土种绵羊、马属动物、藏獒、骆驼、喜马拉雅旱獭、高原鼠兔、中华鼢鼠、藏羚羊和实验小鼠等动物的1039份血清样品,进行弓形虫特异性抗体的检测。结果检出68份阳性血清,阳性率为6.54%。     

用重组的牛巴贝斯虫棒状体蛋白1作为ELISA诊断抗原进行牛群中牛巴贝斯虫病的血清流行病学调查

用重组的牛巴贝斯虫棒状体蛋白1（Bc—RAP-1）作为ELISA诊断抗原,对采自青海省湟中县的120份奶牛血清样品,进行抗Bc—RAP-1特异性抗体的检测。结果检出7份阳性,阳性率为5．83％,说明该地区牛群存在牛巴贝斯虫的感染。     

Establishment of Double-antibody Sandwich ELISA to Diagnose Acute Toxoplasmosis

The zoonotic protozoa Toxoplasma gondii is an opportunistic pathogen and distributes worldwide. Acute Toxoplasma infection causes serious pathological damages. Dense granule protein 1(GRA1) secreted by dense granule is an important component of Circulating antigen, which is an indication of acute toxoplasmosis. We aimed to use a monoclonal antibody against TgGRA1 to establish an enzyme-linked immunosorbent assay that targets antigen GRA1 in serum for acute toxoplasmosis diagnosis. First, the spleens of TgGRA1-His immunized mice were fused with SP2/0 cells,then we screened hybridomas that can constantly secret monoclonal antibody to the supernatant and injected them into mice to produce a large amount of mAbs. After the identification and purification of ascites, we choose one mAb as a capture antibody, HRP conjugated mouse anti-TgGRA1 polyclonal antibody as a detection antibody to develop sandwich ELISA. This method was used to detect samples from swine and mice artificially infected with Toxoplasma gondii. Besides, the results were compared with that of nPCR and two commercial kits to evaluate the efficiency of sandwich ELISA. We successfully got 4 mAbs with ascitic titers of 10⁶-10⁷, their subtypes are IgG1. Indirect fluorescent assay and Western blot showed that all of them can react specifically with TgGRA1.1G2 mAb and HRP conjugated mouse anti-TgGRA1 polyclonal antibody were used subsequently to establish sandwich ELISA for diagnosing acute infection. After optimization, sandwich ELISA can specifically detect 1.563 ng·mL^-1 GRA1 or 100 ng·mL^-1 ESA in serum. When detecting experimental animal samples, the sandwich ELISA exhibited the high consistency with the results of nPCR and showed higher efficiency than the commercial kits. In summary, we established a sandwich ELISA for acute toxoplasmosis diagnosis that captures one certain toxoplasma antigen GRA1, samples of artificially infected animals can be detected by this method, which makes acute toxoplasmosis diagnosis more reliable. It has guiding significance for clinical treatment of acute toxoplasmosis.     

1种检测弓形虫急性感染的夹心ELISA方法

弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种人畜共患机会性致病原虫,其急性感染可导致宿主产生明显的临床症状和严重的病理损伤。弓形虫致密颗粒蛋白1（dense granuleprotein 1,GRA1）是一种良好的诊断抗原,也是弓形虫急性感染的标志物循环抗原（circulating antigen,CAg）的重要组分。本研究利用TgGRA1单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA方法,为急性弓形虫感染的检测提供依据。将免疫GRA1-His的小鼠脾细胞与SP2/0进行融合,筛选出能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。选择其中一种单抗与HRP标记后的鼠源GRA1多抗配对,建立1种双抗体夹心ELISA方法,检测人工感染弓形虫的猪和小鼠血清样品,并将检测效果与巢式PCR（nest PCR,nPCR）和商品化试剂盒进行比较。结果筛选到4株杂交瘤细胞,腹水效价为10⁶~10⁷,亚型均为IgG1;IFA和Western blot结果显示,4株单抗均具有良好的反应性和特异性。选择1G2单抗和HRP标记多抗配对,建立了循环抗原双抗体夹心ELISA方法,最低能够检测到血清中1.563 ng·mL^-1 GRA1抗原,或者100 ng·mL^-1 ESA。该方法与nPCR相比具有较高的一致性,较市售商品化试剂盒更为准确可靠。本研究第1次将GRA1抗原作为急性弓形虫感染的诊断指标,建立相应的检测方法,成功地在人工感染样品中检测到弓形虫急性感染,可为弓形虫急性感染的诊断提供参考,对临床上急性弓形虫病的治疗有指导意义。     

青海省海西地区改良绒山羊弓形虫病血清学调查

应用间接血凝试验(IHA),对采自青海省海西州的509份改良绒山羊血清进行了弓形虫病血清学调查,检出阳性血清88份,阳性率为17.29%.其中,德令哈市的307份血清,检出阳性血清36份,阳性率为11.73%;乌兰县的202份血清,检出阳性血清52份,阳性率为25.79%.     

青海省互助县牦牛弓形虫病血清学调查

应用IHA方法对青海省互助县7个地区100份牦牛血清进行了弓形虫病血清学调查,以抗体效价≥1:64为阳性判定标准,结果表明互助县7个地区不同程度感染牦牛弓形虫病,平均感染率为12.15%。并且不同性别的牦牛弓形虫阳性率差异不显著(P0.05),说明互助地区的牦牛群中弓形虫病的阳性率与性别无关。     

Toxoplasmosis in cats: Diagnosis, treatment and prevention

The clinical and parasitologic features of toxoplasmosis, serologic diagnosis, treatment, transmission and prevention are discussed.