DHA对小鼠脂肪组织和肝脏生脂及脂解基因转录表达的影响

【目的】探讨二十二碳六烯酸(DHA)对小鼠脂肪组织和肝脏生脂相关基因过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)、固醇调节元件结合蛋白-1c基因(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶基因(FAS),及脂解相关基因激素敏感脂酶基因(HSL)和甘油三酯水解酶(TGH)时序表达的影响。【方法】用不同浓度DHA(6.25和12.5 g/kg)灌胃小鼠,分别于0,1,2,4,8,16和24 h处死,取脂肪组织和肝脏,提取总RNA,半定量(semi-quantitative,SQ)RT-PCR方法检测生脂及脂解基因PPARγ、SREBP-1c、FAS,及脂解相关基因HSL和TGH的时序表达规律。【结果】脂肪组织中DHA均可促进PPARγ、FAS、HSL和TGH基因的转录表达,8 h达到峰值,其后表达量下降;抑制SREBP-1c基因的表达,8 h达到最低,之后上升。肝脏中DHA均可抑制PPARγ、SREBP-1c、FAS和HSL基因的转录表达,且表达量分别于8,8,8和16 h达到最低,之后表达量上升;DHA对TGH的作用不显著(P>0.05)。【结论】DHA通过促进脂肪组织中脂肪分解及抑制肝脏中脂肪合成与分解来调节动物体脂沉积。     

Vc对Cd中毒小鼠骨骼肌中Musclin基因及生脂基因表达的影响

为探讨维生素C(Vc)调控Cd中毒小鼠骨骼肌中Musclin基因及生脂基因的转录表达规律,用RT-PCR方法研究小鼠Musclin基因及生脂基因(FAS、PPARγ、TGH)表达水平的变化。结果表明,Cd对小鼠Musclin基因及生脂基因的表达具有显著抑制作用(P0.05),Vc+Cd组与只加Cd组比较,小鼠Musclin基因及生脂基因的表达水平明显升高,Musclin与FASmRNA表达存在显著负相关(P0.01),与PPARγ基因存在显著正相关(P0.05),与TGH基因相关性不显著(P0.05)。研究结果说明,Vc可提高Cd中毒小鼠骨骼肌中的Musclin基因及生脂基因的表达水平。     

日粮添加DHA对肉仔鸡生长及脂肪代谢基因转录的后效作用

 【目的】探讨二十二碳六烯酸（DHA）微藻粉对肉仔鸡生长和脂肪代谢的影响及其持续效果,为揭示DHA调节动物脂肪沉积的机理提供依据。【方法】1周龄AA肉仔鸡日粮中添加DHA微藻粉,添加2周,分别在3、4、5周时屠宰,取组织样提总RNA,采用RT-PCR技术检测各组织中基因转录表达。【结果】DHA微藻粉显著增加肉仔鸡日增重和饲料转化率,降低腹脂率,降低血清中总胆固醇TC、甘油三酯TG和低密度脂蛋白胆固醇LDL-C含量,增加高密度脂蛋白胆固醇HDL-C含量（P＜0.05）,停止添加1周后仍有显著作用（P＜0.05）。DHA微藻粉可提高肝脏过氧化物酶增生物激活受体（PPARα）和肉碱酰基转移酶（CPT-1）mRNA表达,抑制脂肪酸合成酶（FAS） mRNA表达,停止添加后,可促进上述基因的表达（P＜0.01）。DHA微藻粉能促进乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、FAS和 CPT-1 mRNA表达,抑制腹脂中脂蛋白脂酶（LPL）mRMA表达,停止添加后,试验组中各基因表达低于对照组（P＜0.01）。DHA微藻粉显著抑制胸肌中脂肪合成和脂肪酸氧化的基因表达（P＜0.01）,停止添加1周后,试验组中FAS、LPL、CPT-1 mRNA表达高于对照组（P＜0.05）;停止添加2周后,可抑制脂肪合成与分解基因的表达（P＜0.01）。DHA微藻粉显著抑制腿肌中FAS mRNA表达,促进ACC、LPL、CPT-1 mRNA表达;停止添加1周后,显著地抑制合成与分解基因表达（P＜0.01）;但停止添加2周后,观测到相反现象。【结论】DHA微藻粉对肉仔鸡各组织中脂肪代谢影响不同,在肝脏和腿肌中抑制脂肪合成,促进氧化,停止添加2周后,促进脂肪合成与分解;在脂肪组织中可促进脂肪合成与分解,停止添加后,呈相反作用;在胸肌中抑制脂肪合成与氧化,停止添加后出现相反作用。     

小鼠可溶性腺苷酸环化酶基因的表达特性

为研究可溶性腺苷酸环化酶（sAC）基因的组织特异性表达及其在不同周龄小鼠睾丸中的表达情况，探讨其在精子发生及获能中的作用，运用RT-PCR法分析小鼠sAC基因的组织表达情况及其发育的时序性变化。结果显示，sAC基因优先表达于睾丸和附睾，表达量随发育周龄的增长而呈增加趋势：于2周龄开始检测到它的表达，随后表达量显著增加至6周龄，再逐渐增长至一个平台期，呈现出发育阶段性，说明sAC在精子形成及获能过程中具有特殊作用。     

谷氨酰胺和天冬胺酰胺对肉鸡部分脂肪性状及生脂基因mRNA表达水平的影响

 【目的】选用320只1日龄AA肉公鸡,研究谷胺酰胺和天冬胺酰胺对肉鸡部分脂肪性状、血脂指标及相关生脂基因mRNA表达水平的影响,研究2种氨基酸对肉鸡脂代谢的影响机制。【方法】采用双因子完全随机设计,将试验鸡按体重随机分为4个处理组,分别在玉米-豆粕型基础饲粮中添加1%的谷氨酰胺和天冬胺酰胺,试验期为42 d。屠宰后测腹脂率,游标卡尺测皮下脂肪和肌间脂肪厚度,比色法测定血清甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、高密度脂蛋白固醇（HDL-C）,RT-PCR技术检测肝脏、腹脂组织中乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、脂肪酸合成酶（FAS）、肉毒碱棕榈酰基转移酶Ⅰ（CPT-1）、脂蛋白酯酶（LPL）、肉毒碱棕榈酰基转移酶α（PPARα）mRNA水平的变化。【结果】饲粮中混合添加谷氨酰胺和天冬胺酰胺可显著提高肉鸡增重（P＜0.05）,对料肉比无显著影响（P＞0.05）,显著提高肌间脂肪宽和皮下脂肪厚（P＜0.05）,对腹脂率和全净膛率无显著影响（P＞0.05）;谷氨酰胺组和天冬胺酰胺组可显著降低腹脂率（P＜0.05）,显著增加皮下脂肪厚和肌间脂肪宽（P＜0.05）;添加谷氨酰胺和天冬胺酰胺后可显著降低血液TG含量（P＜0.05）,提高血液TC含量和降低HDL-C水平,影响血脂代谢。3个试验组肝脏中ACC、FAS、CPT-1、PPARα基因转录表达显著降低（P＜0.05）;谷氨酰胺组LPL 基因表达显著增加（P＜0.05）。3个试验组脂肪组织PPARα转录表达显著增加（P＜0.05）,谷氨酰胺组和天冬胺酰胺组脂肪组织ACC转录表达显著降低（P＜0.05）,混合组脂肪组织FAS、LPL基因转录显著降低（P＜0.05）,而CPT-1转录则表达显著增加（P＜0.05）。【结论】饲粮中添加谷胺酰胺和天冬胺酰胺可提高肉鸡生产性能,在一定程度上减少腹脂沉积,改善胴体性状。     

小鼠性腺特异表达基因GSE的表达特征研究

采用RT-PCR和原位杂交的方法检测了小鼠GSE(gonad-specific expression gene)基因在性腺中的表达特征.RT-PCR分析表明,GSE mRNA在出生后第14天的小鼠的睾丸中和刚出生小鼠的卵巢中可检测到,这时间正是生殖细胞减数分裂发生的时期;原位杂交分析的结果揭示,GSE mRNA分布于精母细胞Ⅰ(粗线期)、圆形精细胞和伸长的精细胞中,这一结果与RT-PCR分析的结果相吻合.研究结果提示,GSE与配子发生过程中的减数分裂有关.     

小鼠Klf4基因的原核表达研究

[目的]对小鼠Klf4基因重组蛋白进行原核表达分析。[方法]利用双酶切从重组质粒p MXs-Klf4上回收小鼠Klf4基因片段,克隆入p ET-41a(+)载体后转化BL21大肠杆菌,用IPTG诱导表达,探讨诱导表达最佳浓度和时间,最后采用SDS-PAGE对重组蛋白进行鉴定及分析。[结果]重组质粒Klf4-p ET-41a(+)在IPTG诱导下可表达与预期相符的约为51 ku的KLF4蛋白;经IPTG刺激后重组蛋白表达增多,以0.8 mmol/L IPTG诱导6 h为佳;重组蛋白以包涵体形式存在于大肠杆菌BL21中。[结论]小鼠Klf4基因可在原核细胞中表达。     

小鼠Nanog基因原核表达载体的构建及表达

【目的】构建小鼠Nanog基因原核表达载体并进行表达，以期得到大量GST融合蛋白。【方法】根据GeneBank中的Nanog序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物，以含有Nanog基因片段的pNA992重组质粒为模板，经PCR扩增出918 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接，转化TGⅠ大肠杆菌，筛选阳性克隆，其扩增片段测序结果与原序列一致，表明原核表达载体pGEX-KG-Nanog已构建成功。提取pGEX-KG-Nanog质粒转化到BL21（DE3）表达菌株中，经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳鉴定，并优化其表达条件。【结果】在大肠杆菌中获得Nanog基因融合表达，主要以包涵体形式存在；融合蛋白的分子量为63 kD；以IPTG终浓度为0.8 mmol•L-1，诱导5 h后融合蛋白产量最高。【结论】小鼠Nanog基因在大肠杆菌中获得了高效表达，为今后Nanog蛋白的多克隆抗体制备奠定基础。     

小鼠IL-10基因的克隆及其原核表达

从ConA活化的昆明小鼠脾细胞中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增得到小鼠的IL-10基因.编码序列经测序验证后,将其克隆入表达载体pET-28a,构建IL-10基因的重组原核表达载体,在大肠杆菌(DE3)中诱导表达目的蛋白.SDS-PAGE结果表明,该表达产物的分子量与预期值相符,Western blot结果说明小鼠IL-10基因得到了表达.     

小鼠CRBN基因mRNA的组织表达谱研究

为了研究CRBN基因与常染色体隐性遗传非综合征轻型精神发育迟滞(ARNSMR)的关系,探讨小鼠CRBN基因mRNA在不同组织中的表达情况.应用Northern blot和Real-time PCR技术,研究小鼠CRBN基因在肺、肝、心脏、肾和大脑中的表达特点.结果表明,小鼠CRBN基因mRNA在肺、大脑中表达量较高,在心脏中表达量最低.说明小鼠CRBN基因在不同组织中广泛表达,除了与学习、记忆功能有关外,可能还与其他功能有关.     

DHA对C2C12细胞成脂分化过程中相关基因表达的影响

采用胰岛素、地塞米松和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤联合诱导C2C12细胞分化为脂肪细胞,诱导分化后加入100 mmol/L二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA).DHA处理8d后,收集细胞,提取总RNA,采用实时荧光定量PCR方法检测脂肪分化相关基因PPARγ、C/EBPα和ADD1转录表达水平.结果表明,C2C12细胞成脂分化时添加DHA能显著上调PPARγ、C/EBPα和ADD1基因的表达,并且联合添加维生素E后效果更显著.     

The Later Effects of DHA in Diet on Regulating Transcription of Lipid Genes of Broiler

The effect of docosahexaenoic acid (DHA) on lipid metabolism in broiler were studied in order to p rovide test results for polyunsaturated fatty acids (PUFA) regulating fatty deposition, 1-wk-old Arbor Acres (AA) broiler were fed with DHA microalgae and slaughtered after 2 wk. The tissues were stored for isolating total RNA. RT-PCR was used to analyze the expression changes of genes. DHA microalgae significantly increased average body gain and feed conversion rates, reduced the levels of total cholesterol (TC), total glycerin (TG), and low-density lipoprotein cholesterol (LDL-C) in serum and increased the content of high-density lipoprotein cholesterol. 1 wk later, the effects were still remained. In liver tissue, DHA microalgae increased the expression of PPARα and carnitine palmitoyltransferase-1 (CPT-1). 1 wk later, it was observed that DHA up-regulated the expression of fatty acid synthase (FAS), acetyl CoA carboxylase (ACC), lipoprotein lipase (LPL) and carnitine palmitoyltransferase-1 (CPT-1). 2 wk later, it still increased the expressions of FAS and CPT-1, but a converse result was observed for ACC and LPL. In adipose tissue, DHA microalgae suppressed the expression of PPARα and LPL, up-regulated the expression of ACC, FAS, and CPT-1. After withdrawal, the expression of genes in test group was significantly lower than that in control group (P＜0.01). In the muscle of chest, DHA microalgae significantly inhibited the gene expression (P＜0.01). 1 wk later, the expressions of FAS, LPL and CPT-1 in test group were significantly higher than that in control group (P＜0.05). 2 wk later, it was shown that DHA significantly inhibited fat synthesis and decomposition. In the leg, there was not any PPARα expression being detected, probably because of the less expression in muscle tissues or the regulation of PPARα had no relation to the case. DHA microalgae promote fat synthesis in the liver and inhibit in adipose and muscle tissues. It still has effects after 1 wk of withdrawal.     

奶牛日粮添加共轭亚油酸和二十二碳六烯酸对瘤胃纤维素酶活性的影响

本试验旨在研究在奶牛日粮中添加亚油酸(Linoleic acid,LA)和二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA)对奶牛瘤胃液中纤维素酶(水杨苷酶、木聚糖酶、羧甲基纤维素酶)活性的影响。结果表明,日粮中添加LA会抑制瘤胃中木聚糖酶的活性,但可提高水杨苷酶和羧甲基纤维素酶的活性,而DHA对3种酶的活性均有提高作用,其中LA和DHA对水杨苷酶和羧甲基纤维素酶活性的提高具有协同作用。木聚糖酶和水杨苷酶的活性均在饲喂后2h达到最高点,而羧甲基纤维素酶的活性则随着时间的变化呈降低趋势。     

贮藏条件对DHA微胶囊化学稳定性的影响研究

对照分析了光照与避光、有氧与真空包装/充氮包装、常温与高温/冷藏/冷冻等不同条件对DHA微胶囊的稳定性的影响.结果表明:光照、有氧条件、高温等贮藏条件均促进DHA微胶囊的氧化;其中影响DHA微胶囊稳定性的关键因索是隔绝氧气与否.将DHA微胶囊用锡箔袋真空包装,室温下放置8周,POV值仅由初始值1.7meq/kg增加到3.01 meq/kg,DHA保留率降为94.0%,DHA微胶囊的稳定性较好.     

饲粮中添加DHA复合添加剂对蛋鸡生产性能和蛋品质的影响

试验选用96羽海兰灰蛋鸡随机分成4个处理,每个处理6个重复,每个重复4只鸡,试验期为28 d.第Ⅰ组为对照组,第Ⅱ～Ⅳ组为试验组,分别添加DHA复合添加剂为2%、4%和8%.旨在探讨蛋鸡饲粮中添加DHA复合添加剂对蛋鸡生产性能和蛋品质的影响.结果表明:1)在整个试验期,第Ⅱ～Ⅳ组与第Ⅰ组相比,蛋鸡的平均产蛋率和平均料蛋比无显著差异(P>0.05),平均蛋质量极显著提高(P<0.01).2)在整个试验期,平均蛋形指数第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组与第Ⅰ组无显著差异(P>0.05);试验第1、2周,平均哈氏单位第Ⅳ组显著高于第Ⅰ组(P<0.05),试验第3周平均哈氏单位第Ⅳ组显著高于其他3组(P<0.05);第3、4周,平均DHA含量第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组极显著高于第Ⅰ组(P<0.01),且第Ⅳ组含量最高.从整体上看,饲粮中添加DHA复合添加剂能够提高蛋鸡生产性能和改善鸡蛋品质;从该试验结果来看,建议蛋鸡饲粮中添加8%DHA复合添加剂为宜.     

饲料中添加维生素E和二十二碳六烯酸对鲤鱼生长和抗病力的影响

以建鲤鱼种为研究对象,采用3×3双因子试验设计,在基础饲料中分中分别添加0、62.5、185.5 mg·kg-1维生素E(VE),每种维生素E水平分别添加0%、0.5%、1.5%二十二碳六烯酸(DHA)共制成9种试验饲料,探讨饲料中添加不同水平维生素E和DHA对建鲤生产性能、饲料利用和抗病力的影响.结果表明,维生素E的添加对各组特定生长率没有显著影响(p＞0.05).DHA的添加显著影响鲤鱼的特定生长率(P＜005),随DHA的添加,鲤鱼特定生长率显著高于对照组fP相似文献   

利用微藻培养生产DHA的研究进展

综述了微藻生产DHA的研究 ,包括藻种、理化因素、生产方式对微藻培养生产DHA的影响 ,以及目前提取DHA的主要方法。     

黄鳍金枪鱼眼窝油中DHA含量测定方法的优化

以黄鳍金枪鱼眼窝肉为原料,采用超临界CO2法提取跟窝油,并用响应面法对工艺条件进行优化,GC/MS外标法测定眼窝油中DHA的含量.结果表明:超临界CO2法提取眼窝油的优化工艺条件为提取时间185.7min,提取温度57.8℃,提取压力35.8 MPa,眼窝油提取率为20.2%;眼窝油中DHA的含量为19.6mg/g,相对总脂肪酸含量为27.1%.眼窝油中DHA含量较高,可用于DHA相关产品的开发.     

猕猴桃酱加工中还原型Vc和氧化型Vc变化的研究

试验研究了猕猴桃酱加工中还原型Vc(AA)与氧化型Vc(DHA)的变化及其控制 ,结果表明 :猕猴桃微波热烫能够保持较高的AA和DHA保存率。猕猴桃经打浆后 ,AA的损失率为 2 8.11% ,DHA损失率为 19.0 3% ;在打浆工序中用单一抗氧化剂EDTA二钠、茶多酚、植酸处理 ,对AA和DHA的保持效果以 0 .0 2 %的茶多酚最好 ,0 .0 2 %EDTA二钠次之 ;0 .0 1%～ 0 .0 3%EDTA二钠和0 .0 2 %茶多酚的混合处理可以有效控制AA和DHA的损失。真空浓缩有利于保持猕猴桃酱AA和DHA ,其最优条件为 :真空度 93.32kPa、加糖量 1∶0 .9、温度 6 0℃。