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奶牛孕酮单克隆抗体的制备及其酶免疫测定方法的初步建立 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]制备奶牛孕酮McAb,建立孕酮酶免疫检测方法,为研制检测试剂盒奠定基础。[方法]用琥珀酰亚胺法将孕酮与钥孔血蓝蛋白(KLH)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备完全抗原,免疫BalB/c小鼠,建立杂交瘤细胞株制备McAb,对McAb特异性、亚类、交叉反应性及相对亲和力等进行鉴定,筛选最佳McAb,建立酶免疫检测方法。[结果]获得3株杂交瘤1F6、2G6和2A11,腹水效价依次为1∶1×106、1∶1×105和1∶8×104,其中1F6为IgG2b亚型,2G6和2A11为IgM亚型,3株McAb都能和游离孕酮发生特异性反应,相对亲和力1F6>2G6>2A11,其中1F6对雌二醇的交叉反应率小于0.01%。选用1F6与酶标孕酮建立ELISA检测方法,制作标准曲线,检测范围为0.5~100.0ng/ml。[结论]该研究制备的单克隆抗体,可用于建立孕酮酶免疫检测方法,为奶牛孕酮水平的定量监测提供了较实用的方法。 相似文献
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[目的]研制鸭肝炎病毒的单克隆抗体。[方法]将DHV-W株的鸭胚尿囊液经冻融、氯仿处理和超速离心纯化后,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,探讨DHV特异性强、敏感性高、简便快速的DHV抗原诊断方法。[结果]经间接ELISA筛选获得1株能稳定分泌DHV的单克隆抗体的杂交瘤细胞株5G8。特性鉴定结果表明该株单抗ELISA效价较高且特异性好,中和特性稍差。杂交瘤细胞冻存6个月和12个月后复苏能稳定分泌特异性抗体。[结论]HDV的McAb成功制备为DHV的快速诊断、筛选特定基因探针等技术奠定了基础。 相似文献
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本文重点报道了作者本人研制发明的T氏诱生剂诱发小鼠腹腔肿瘤大量生产McAb的过程及其有关的统计学和免疫学分析结果.本研究利用T氏诱生剂诱发试验的小鼠共50只,平均每只鼠可收获纯化的McAb约为150mg左右,生产周期仅需9~12 d,而用传统的诱生腹腔肿瘤法生产McAb,平均每只鼠只收获纯化的McAb约14mg左右.本研究所生产的McAb的量约是传统法的10倍,这在国内外尚属首创.投入生产约一年多的实践证明,T氏诱生剂可在短期内诱发小鼠腹腔的杂交瘤细胞分泌大量的、高活性的McAb.利用T氏诱生剂诱发小鼠腹腔肿瘤法生产McAb具有产量大、纯度高、活性强、生产周期短、成本低、方法简便等优点. 相似文献
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应用于油菜研究的简便银染AFLP标记技术的构建 总被引:55,自引:1,他引:55
扩增片段长度多态性 (Amplifiedfragmentlengthpolymorphism ,AFLP)是近几年发展起来的新一代分子标记技术 ,自 1 995年Zabeau和Vos以论文形式正式发表以来[1 ] ,该方法已被广泛应用于生物多样性研究、图谱构建、基因分离、QTL分析、品种鉴定、杂种优势预测和标记辅助选择育种等多方面的研究 ,涉及到的作物有水稻[2~ 4] 、玉米[5 ,6] 、西红柿[7] 、马铃薯[8,9] 、大麦[1 0~ 1 3] 和大豆[1 4 ] 等 ,但在油菜上还未见报道。目前几乎都使用到对人体有害的同位素标记和价格昂贵的试剂盒 … 相似文献
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[目的]用B.melitensis16M提纯的LPS和O链抗原作为检测抗原,研制出针对B.melitensis16M的单克隆抗体(McAb),将其标记胶体金,建立一种诊断布病的胶体金免疫层析方法。[方法]B.melitensis16M全菌免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备McAb,测定免疫球蛋白亚类及亲和力。用HiTrapProteinGHP亲和层析纯化抗体并用胶体金标记,建立胶体金免疫层析方法。选择最佳反应模式组装成试纸条,对其特异性、敏感性、稳定性、阳性病料试验。[结果]筛选出能稳定分泌抗B.melitensis16M的种特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株2D10、3C6、1E10,单抗亚类分别为IgG2a、IgG1,亲和常数(k)介于1×10-8 ̄2.6×10-10。根据配对实验,以3C6为最佳包被抗体,2D10为最佳金标抗体。抗体IgG标记浓度为30μg/ml时,检测效果最佳。同时,与B.melitensis16M多抗IgG作为包被抗体、2D10为金标抗体的检测体系对比,两种包被方法组装的试纸条最低检出量为5.0×103CFU/ml,且不与其它菌发生交叉反应,保持期≥100d。以荧光定量PCR为参照,试纸条检测80份阳性病料,检检出率为100%。[结论]建立的胶体金免疫层析方法检测B.melitensis16M快速、简便、可靠,有望开发成为布病快速诊断试剂盒。 相似文献
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水稻品种种性研究:Ⅲ.水稻品种品质性状的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
对水稻品种稻米品质的研究,国际水稻研究所已在广泛进行,并有一套较完整的品质鉴定方法[1]。闵绍楷等对国内外稻米品质研究较全面地进行总结[2]。张文绪等对我国水稻品种的蒸煮品质研究有了一定的进展[3]。华南地区优质水稻品种生产,历史悠久,传统的优质品种如马坝油粘和增城丝苗,闻名中外。华南农业大学从1972年开始进行水稻优质品种育种工作,先后育成了学农1号、马坝晚占1号[4]、五山早占[5]和虎门占等品种,作者等近年来进行水稻品种品质性状研究,已获一定结果。本文作初报道。 相似文献
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研究通过骨髓瘤细胞SP2/O与经金黄色葡萄球菌(S.aureus)Trap蛋白免疫的小鼠脾细胞融合,并进一步筛选种单克隆化,获得了11株稳定分泌抗TraP蛋白的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,其中8株McAb(2A1、3A6、381、184、2C5、4C7、5C3和2D8)亚类为IgGl,3株McAb(2A7、3A1和1c4)亚类为IgM,轻链均为K链。8株IgGl型McAb的小鼠腹水的抗体效价均达到1:128000,交叉实验结果显示这8株McAb不与S.aureus的ClfA、ClfB、Cna、FnbPA和IsdB蛋白以及链球菌的GapC蛋白反应,具有良好的特异性,Western—blotting结果显示这8株McAb识别的都是TraP的线性表位。 相似文献
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[目的]建立厨馀堆肥的腐熟度评估指标。[方法]通过对厨馀堆肥好气堆积处理的研究,了解腐熟厨馀堆肥特性。[结果]确定堆肥的pH值、电导率、有机质、全氮、碳氮比、阳离子交换容量、养分和污染物含量等作为堆肥腐熟度的评估指标。[结论]该研究可为厨馀堆肥制作和施肥提供理论依据。 相似文献
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[目的]总结维吾尔族药物牛舌草的研究和应用概况。[方法]查阅相关论文,对牛舌草的药材性状、化学成分、药用价值进行归纳。[结果]牛舌草的多种药用功效与其中丰富的黄酮、多糖、维生素和氨基酸等成分有关。[结论]牛舌草具有极大的潜在开发和利用价值。 相似文献
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