切梢小蠹伴生菌分离培养及其种类研究

为了探究切梢小蠹伴生菌的种类,在10个不同的地点采集树干内的切梢小蠹成虫及其坑道蓝变组织样品,采用MEA培养基对伴生菌进行分离、纯化和形态学鉴定。结果表明,切梢小蠹的伴生菌子实体和菌落形态各异,分属Ophiostoma和Leptogramphium。虫种上,云南切梢小蠹、横坑切梢小蠹和松芽小蠹的伴生菌多为Ophiostoma spp.,而华山松切梢小蠹伴生菌多为Leptogramphium spp.;寄主上,云南松和思茅松上的切梢小蠹伴生菌多为Ophiostoma spp.;而华山松上的小蠹虫伴生菌为Leptogramphium spp.。研究结果为揭示切梢小蠹的危害机理提供了基础信息。     

伴生菌诱导的云南松挥发性化合物对云南切梢小蠹嗅觉行为影响研究

为了明确伴生菌诱导的云南松挥发性化合物对云南切梢小蠹嗅觉行为的影响,基于HS-SPME-GC/MS前期的分析结果,用8种云南松主要挥发性成分作为气味源,用多臂嗅觉仪测定云南切梢小蠹的嗅觉反应,筛选有较强引诱力的4种化合物测定不同气味组合对云南切梢小蠹引诱力,研究伴生菌对云南松挥发性成分的影响.结果表明,伴生菌间诱导云南...     

纵坑切梢小蠹伴生菌危害机理的研究

该文对纵坑切梢小蠹伴生菌Leptographium yunnanense的危害机理作了初步研究，结果表明，L.yunnanense在与小伴随侵入后，产生致病毒素对寄主树林进行危害，从而辅助纵坑切梢小蠹成功定殖于寄主树木内，该毒素在低浓度条件下仍维持一定的致病力，进一步表明伴生菌在小蠹虫成功蛀害的过程中具有重要的作用。     

温度对纵坑切梢小蠹伴生菌——云南半帚孢生长的影响

本文研究了纵坑切梢小蠹伴生菌云南半帚孢Leptographium yunnanense在不同温度下，在PDA培养基，云南松木段和活树上的生长变化情况，结果表明：在5－20℃温度范围内，真菌的生长随温度的升高而加快，云南松韧皮反应区长度逐渐增大；在20－35℃温度范围内，真菌的生长随温度的升高而逐渐减弱，韧皮反应区逐渐减小，说明温度变化使真菌的生长力与云南松的抗性之间的对比力量改变，从而导致真菌的生长长度和韧皮反应区发生相应变化。     

伴生菌(L.wingfieldii)对苏格兰松病害作用研究

研究纵坑切梢小蠹Ｔｏｍｉｃｕｓｐｉｎｉｐｅｒｄａ的主要伴生菌Ｌｅｐｔｏｇｒａｐｈｉｕｍｗｉｎｇ－ｆｉｅｌｄｉ在六种温度下的生长力及对苏格兰松Ｐｉｎｕｓｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ的侵染力和致病力。在１０℃～２５℃范围内，Ｌ．ｗｉｎｇｆｉｅｌｄｉ随温度升高生长加快，而在３℃或３０℃下生长受到抑制。接种苏格兰松的前１０天表现出一定侵染力，但也诱发了树木的抗性反应，该反应抑制伴生菌的进一步扩张。在伴生菌较高密度接种下，寄主木质部有大量伴生菌、松脂分布，部分木质部也因失去水分而丧失正常功能，表明Ｌ．ｗｉｎｇｆｉｅｌｄｉ对苏格兰松有较强致病力。     

4种切梢小蠹携带伴生菌的带菌率差异

[目的]为了弄清中国云南4种切梢小蠹伴生菌的携带率差异,了解伴生菌在蠹害过程中的互作关系。[方法]采用人工接种法和野外调查法,检测松树韧质部是否蓝变,判断切梢小蠹带菌情况,统计分析小蠹试验材料的带菌率。[结果]云南切梢小蠹成虫带菌率(80%)明显高于横坑切梢小蠹(63%)、松芽小蠹(53%)、华山松切梢小蠹(56%)。切梢小蠹幼虫的带菌率最高(90%),其次是蛹的带菌率(78%),新成虫的带菌率最低(58%)。切梢小蠹头(33%)、足(30%)、翅(32%)3个重要器官带菌率差异不明显。林间调查表明,切梢小蠹伴生菌提高了小蠹蛀干繁殖的成功率。[结论]首次报道了中国云南4种切梢小蠹伴生菌的带菌特性及其差异,研究结果为揭示云南省切梢小蠹成灾机制及探索切梢小蠹有效防控新途径提供了科学数据支持。     

健康和受蠹害云南松及云南切梢小蠹后肠挥发性物质的分析与比较

利用GC—MS联用仪和计算机信息检索法对健康云南松、逍受云南切梢小蠹危害云南松树干的韧皮部及云南切梢小蠹后肠的挥发性物质进行了分析比较。分析结果表明：健康云南松树干和受蠹害树干韧皮部的挥发性物质在组成和含量上存在明显差异。与健康树干相比较，受蠹害树干韧皮部的挥发性物质中的α-蒎烯的含量大大减少，而月桂烯和3-蒈烯的相对含量增加；此外，蠹害木树干韧皮部挥发性物质中还检测出异松油烯、4-烯丙基苯甲醚存在。从云南切梢小蠹雌、雄虫的后肠挥发性物质中，都检测出马鞭草烯醇、桃金娘烯醛、桃金娘烯醇存在；而马鞭革烯酮只存在雄虫的后肠挥发性物质中。根据分析结果，列云南松和云南切梢小蠹互作的机制进行了初步探讨。     

云南切梢小蠹与横坑切梢小蠹蛀梢期的竞争研究

2000年5月至2001年5月,研究了云南切梢小蠹与横坑切梢小蠹蛀梢期的种间竞争,比较了2种松小蠹在其寄主云南松树冠的垂直分布规律.结果表明,不同月份2种松小蠹在云南松树冠的垂直分布的存在差异,并随着月份的变动而发生变化.横坑切梢小蠹多危害较细的松梢,而云南切梢小蠹多危害较粗大的松梢.2种松小蠹的其它蛀梢习性(危害梢的年龄、攻击部位、蛀道长度等)文中也进行了比较.结论,云南切梢小蠹对云南松树梢的攻击能力强于横坑切梢小蠹.     

云南松3种切梢小蠹梢转干期竞争共存的时空生态位

【目的】研究横坑切梢小蠹、云南切梢小蠹和短毛切梢小蠹梢转干期在寄主云南松树冠和树干中的分布规律及三者之间的竞争互存关系,为其种群监测和综合防治提供理论基础。【方法】采用抽样调查法,根据生态位理论,从时间和空间资源利用上分析云南省大理市祥云县云南松梢转干期树冠和树干中3种切梢小蠹的种群分布和生态位关系。【结果】树冠中横坑切梢小蠹雌、雄高峰期均晚于云南切梢小蠹,短毛切梢小蠹无明显高峰期;横坑切梢小蠹主要分布在树冠下层,云南切梢小蠹和短毛切梢小蠹主要分布在树冠上层;云南切梢小蠹入侵初期可分布于整个树干,随着横坑切梢小蠹由树干基部向上部入侵过程而逐步向中上部分布;横坑切梢小蠹虫口密度在树干不同高度差异显著,而云南切梢小蠹虫口密度则在蛀干后期差异显著;3种切梢小蠹种间在时间和空间资源利用上存在差异,且性别间也存在差异;横坑切梢小蠹的时间生态位宽度大于云南切梢小蠹,但在空间资源利用上弱于云南切梢小蠹,短毛切梢小蠹与横坑切梢小蠹和云南切梢小蠹在时间资源利用上生态位分离;横坑切梢小蠹、云南切梢小蠹和短毛切梢小蠹在1月对空间资源的利用最大。【结论】横坑切梢小蠹和云南切梢小蠹通过对时空资源的分配和弥补达到种群共存和同源竞争,短毛切梢小蠹与横坑切梢小蠹和云南切梢小蠹在时间资源利用上生态位分离。     

伴生菌（L.wingfieldii）对苏格兰松病害作用研究

研究纵坑切梢蠹Ｔｏｍｉｃｕｓ ｐｉｎｉｐｅｒｄａ的主要伴生菌Ｌｅｐｔｏｇｒａｐｈｉｕｍ ｗｉｎｇｆｉｅｌｄｉｉ在六种温度下的生长胃及对苏格兰松Ｐｉｎｕｓ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ的侵染力和致病力。     

纵坑切梢小蠹伴生菌--云南半帚孢毒素作用机理的初步研究

用纵坑切梢小蠹伴生菌——云南半帚孢Laeptographium yunnanense的毒素处理后，云南松和华山松体内与抗病性密切相关的过氧化物酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶的活性都明显地下降，表明该毒素可以通过抑制寄主体内与抗性有关的酶的活性来削弱寄主的抗性，从而有利于菌在寄主体内侵染生长。云南松的酶活性下降的程度较大，而华山松的酶活性较高，毒素处理后活性受抑制的程度相对较小，这表明华山松对云南半帚孢的抗御能力较云南松的强，这也是云南境内云南松受害严重而华山松受害轻微的重要原因之一。     

云南松纵坑切梢小蠹聚集信息素研究

通过对云南松纵坑切梢小蠹聚集信息素的研究，证实该虫种的雌雄成虫均能释放聚集同类的信息素，用气相色谱和质谱色谱仪进行性定量分析，从雌雄成虫后肠和虫粪提取物中分析出聚集信息的主要成分是氧化单萜烯醇：反式－马鞭草烯醇、桃金娘烯醇，Δ＾３－皆烯－１０－醇和马鞭草烯酮，另外，嘛松枝韧皮中分析出对松纵坑切梢小蠹具有强烈吸收力的碳氢单萜烯：α－蒎烯和Δ＾３－蒈烯。通过对聚集信息素单组分及混合剂进行室内和林间生物     

油松挥发性物质分析及红脂大小蠹的触角电位反应

分布于山西的油松树脂中的挥发性物质主要成份为(R)-( )-α-蒎烯、(S)-(-)-β-蒎烯和(S)-( )-3-蒈烯,占萜烯总量的97%以上,其中(S)-( )-3-蒈烯的比例最大,另外还有香叶烯、( )-柠檬烯、莰烯、孟二烯和水芹烯等成份.触角电位反应中,雄性红脂大小蠹对油松挥发性物质中(S)-(-)-α-蒎烯、柠檬烯和(S)-( )-3-蒈烯的反应较为强烈,而雌性红脂大小蠹对油松挥发性物质中(S)-( )-3-蒈烯、柠檬烯、(S)-(-)-α-蒎烯和香叶烯的反应较为强烈.雌性红脂大小蠹较雄性红脂大小蠹对这些挥发性物质更为敏感.寄生于我国油松的红脂大小蠹对树体挥发物的反应与原产地美国有较大的差异,产生变化可能与寄主挥发物成分和环境变化有关,但其机制还有待于进一步研究.     

纵坑切梢小蠹伴生菌云南半帚孢毒素活性的生物检测

比较研究了不同生物检测材料及方法在纵坑切梢小蠹伴生菌——云南半帚孢毒素的生物活性检测上的适应性，结果表明该毒素不仅对云南松产生病害作用，对思茅松和华山松同样产生病害作用。用切根幼苗为材料对该毒素进行生测，所需时间虽较短，但幼苗所产生的症状较复杂，不易观察和确定；以松树及其木段为材料将该毒素进行接种试验，则在韧皮部位形成明显的反应区，与接菌产生的反应症状一样，容易确定，但木段上出现反应症状的时间较短，因此，以木段为材料，采用接种法进行该毒素活性检测较好。     

红塔山自然保护区切梢小蠹种群数量及危害调查研究

在红塔山自然保护区的灵照山片区和徐家山片区的云南松林中设置调查样地29个,对切梢小蠹种群、生物学特性及危害特征进行调查研究。结果表明,红塔山自然保护区发生的切梢小蠹主要有云南切梢小蠹和横坑切梢小蠹2种,在种群数量分布上以横坑切梢小蠹占优势,平均占78.30%。2种切梢小蠹同时存在于同一林分中形成交叉危害,对枝梢危害长度和树干危害部位存在明显差异。建议在切梢小囊蛀梢期及转干繁殖前及时采取措施降低虫口密度。     

利用HS-SPME-GC/MS法分析横坑切梢小蠹危害细叶云南松诱导抗性挥发物质

【目的】掌握横坑切梢小蠹危害与细叶云南松应激响应规律,探讨其与抗性有关的代谢挥发物关系,以期提出有效的防治措施。【方法】以广西乐业县雅长林场不同危害程度细叶云南松嫩梢为对象,利用顶空固相微萃取-气相色谱/质谱法研究细叶云南松诱导抗性挥发物质。SPME萃取优化条件为:在75℃固相萃取仪上平衡15 min,用75μm萃取头(DVB/CAR/PDMS)萃取15 min。【结果】重度危害检测出最多挥发组分,主要为萜烯类、醇类。细叶云南松主要代谢挥发产物与其受危害程度密切相关,随着受害程度的增加,α-蒎烯、3-蒈烯、β-石竹烯、β-毕澄茄烯的含量随之增加,β-蒎烯含量逐渐减少,且仅对照含有少量长叶烯成分。重度危害类型中β-蒎烯含量最低仅为对照的47.85%,而3-蒈烯升高幅度最大,高于对照62.83%。单萜类及倍半萜类含氧衍生物总量随受害程度增加而增加,表明含氧化合物增多其抗虫性减弱。【结论】3-蒈烯、β-蒎烯、β-榄香烯、β-石竹烯和β-毕澄茄烯含量差异是导致细叶云南松诱导横坑切梢小蠹虫抗性的主要原因。顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术适用于松针挥发性成分的快速分析,并为细叶云南松小蠹诱导抗性物质研究提供科学依据。     

受小蠹虫不同阶段为害的云南松光合生理反应分析

分析了15年生云南松在横坑切梢小蠹、云南纵坑切梢小蠹在蛀梢和蛀干为害期的针叶光合生理反应.Dun-can多重比较结果表明:云南松在小蠹虫蛀梢和蛀干期显著影响了针叶同化CO<,2>的能力,针叶净光合速率分别下降了31%和65%,气孔导度、蒸腾速率等光合指标也出现极显著下降(P<0.01).相关性分析表明:针叶净光合速率与各生理生态因子的相关关系以及主要生理生态因子之间的相关关系在小蠹虫不同的蛀害期而不同.小蠹虫蛀梢和蛀干为害显著降低了针叶叶绿素含量(P<0.05),但受蛀梢为害的云南松针叶叶绿素a/b值显著高于健康或受蛀干为害的云南松.针叶最大荧光(Fm)、最大光量子效率(Fv/Fm)以及Fv/Fo均因小蠹虫蛀梢和蛀干为害而显著下降,尤以在被蛀干时的针叶Fm、Fv/Fm、Fv/Fo下降幅度更大.综合分析表明:受小蠹虫"胁迫"(蛀梢、蛀干)后针叶叶绿素合成受到显著影响,引起了寄主云南松光合机构的破坏,导致寄主云南松树势下降,这必为喜欢攻击亚健康或衰弱林木的次期性昆虫创造合适的寄主.     

横坑切梢小蠹林间危害与诱捕量之间的相关性分析

【目的】明确聚集信息素对横坑切梢小蠹诱捕量与不同危害程度的云南松林有虫梢率之间的关系,为横坑切梢小蠹种群监测与防治提供技术支持。【方法】采用随机抽样法,调查云南省祥云县普淜镇和下庄镇2个样地云南松林内切梢小蠹的危害情况,并在由梢部危害转至干部危害期利用聚集信息素诱捕横坑切梢小蠹成虫,分析横坑切梢小蠹在梢转干时期的种群变化规律及有虫梢率与诱捕量之间的关系。【结果】普淜和下庄2个样地横坑切梢小蠹和云南切梢小蠹是优势种。普淜样地中横坑切梢小蠹占49. 75%,雌雄比为1. 06∶1;云南切梢小蠹占50. 25%,雌雄比为1. 32∶1。下庄样地中横坑切梢小蠹占54%,雌雄比为1. 45∶1;云南切梢小蠹占46%,雌雄比为1. 88∶1。2样地中横坑切梢小蠹蛀梢期树冠有虫梢率从上到下依次降低,普淜样地有虫梢率约为下庄样地的10倍。2样地横坑切梢小蠹的诱捕量在整个梢转干期呈现相同的规律,成虫扬飞均始于11月中旬,终见于翌年5月下旬,扬飞高峰期是3月初至4月下旬。诱捕器中天敌种群数量与横坑切梢小蠹数量有明显的跟随现象。诱捕器中横坑切梢小蠹雌雄性比在1∶1. 09～1. 71之间,雄性个体数量明显多于雌性。横坑切梢小蠹林间有虫梢率(y)与诱捕量(x)之间呈线性正相关,其中在高虫口密度普淜样地拟合函数关系式为y=0. 002 4x+0. 060 1(R^2=0. 67),低虫口密度下庄样地拟合函数关系式为y=0. 003 2x-0. 004 3(R^2=0. 71)。【结论】了解高、低虫口密度下横坑切梢小蠹在云南松树冠中的分布规律,利用聚集信息素诱捕可作为监测横坑切梢小蠹种群变化的有效方法,且诱捕量与林间有虫梢率呈线性正相关,诱捕量可反应横坑切梢小蠹在蛀梢期的有虫梢率。     

莰烯醛肟及其烃基醚衍生物的合成与抑菌活性研究

由莰烯醛(1)与羟胺盐酸盐反应合成了莰烯醛肟(2),继而与卤代烃反应合成了5种莰烯醛肟烃基醚衍生物,分别为:莰烯醛肟乙基醚(3a)、莰烯醛肟正丙基醚(3b)、莰烯醛肟正丁基醚(3c)、莰烯醛肟正戊基醚(3d)和莰烯醛肟苄基醚(3e)。通过红外光谱、质谱和核磁共振等仪器分析手段对产物结构进行了确认。在此基础上,采用菌丝生长速率法,评价了莰烯醛肟及其烃基醚衍生物对12种植物病原真菌的生长抑制作用,结果表明:产物对12种植物病原真菌皆有一定抑制作用,其中莰烯醛肟的抑菌活性最优,并且对油茶炭疽病的抑制效果最好,EC 50为39.25 mg/L,对水稻纹枯病菌、猕猴桃果实拟茎点霉、玉米赤霉病菌和毛竹枯梢病病原菌的EC 50为40~50 mg/L;在质量浓度为500 mg/L时,莰烯醛肟对水稻纹枯病菌等9种植物病原真菌完全抑制,对松枯梢病菌和七叶树壳孢菌的抑制率达97%以上,当药液浓度降低时,莰烯醛肟对大部分病原菌的抑制率仍然超过百菌清500 mg/L时的抑制率。虽然莰烯醛肟烃基醚衍生物的抑菌活性较莰烯醛肟有所降低,但对毛竹枯梢病菌、梨链格孢菌和玉米赤霉病菌的抑制率皆高于(或等于)百菌清。     

中国落叶松八齿小蠹伴生粘束孢属真菌的鉴定及其系统发育分析

【目的】对我国东北异域分布的3种落叶松林内齿小蠹粘束孢属(微囊菌目:粘束孢科)伴生真菌进行系统调查和分析,为研究其致病机制奠定基础,为控制森林病虫害提供理论依据。【方法】对异域分布的长白落叶松和华北落叶松八齿小蠹(鞘翅目:小蠹科)的虫体和坑道组织进行伴生真菌的分离纯化,进行生理学特性、菌落特征、微观形态学的观察,以及基于rRNA-ITS和TEF-1α多位点DNA序列的系统发育进行分析。【结果】落叶松粘束孢和黑梗粘束孢2种粘束孢属真菌与我国的落叶松八齿小蠹伴生,其中落叶松粘束孢为中国新纪录种。落叶松粘束孢和黑梗粘束孢都是首次从亚洲落叶松八齿小蠹上分离到,与落叶松八齿小蠹形成新的小蠹虫-真菌伴生关系。在亚洲落叶松八齿小蠹和中国落叶松坑道中发现了落叶松粘束孢,不仅丰富了菌株数量,也扩大了落叶松粘束孢的分布范围,同时也增加了中国地区粘束孢属真菌的种类。目前黑梗粘束孢仅在中国云南松梢木蠹象(鞘翅目:象甲科)上分离得到,本研究不仅增加了黑梗粘束孢的寄主种类,也扩大了寄主的分布范围。该种在我国的分布跨度区域巨大,可能是一个广泛分布的种。【结论】多基因序列特征表明来自云南松梢木蠹象和亚洲落叶松八齿小蠹2种不同生态位的黑梗粘束孢存在种下分化现象,进一步支持了在不同地理(或寄主)种群中发现伴生菌存在适应寄主植物和小蠹虫的分化潜力这一结论。落叶松粘束孢和黑梗粘束孢都是首次从亚洲落叶松八齿小蠹上分离到,为进一步研究其与落叶松八齿小蠹间的伴生关系,以及在危害寄主方面的协同作用提供良好的模式材料。