木薯块根总RNA提取方法的比较和改进

[目的]为更好地利用基因操作手段改良木薯品质和提取高质量的木薯总RNA提供科学依据。[方法]采用4种方法提取木薯块根RNA,筛选一种最简单、有效的方法,并利用RT-PCR技术克隆木薯淀粉分支酶,分析所提取RNA的质量。[结果]结果表明,用改进的CTAB法和plant RNAReagent kit均能提取高质量的RNA,用plant RNAReagent更能节省时间,而且纯度比较高。对plant RNAReagent提取的RNA进行RT-PCR克隆,克隆出了与木薯淀粉合成有关的SBEII基因。[结论]plant RNAReagent kit提取的RNA,其质量可以满足基本的试验要求。     

番茄组织总RNA提取方法研究

从RNA的完整性、纯度和产量等方面比较了TRIzol,RNAplant,TRIpure等3种RNA提取试剂对番茄不同组织部位总RNA的提取效果.结果表明,RNAplant能从成熟组织中获得较高质量和产量的总RNA,用该方法提取的番茄老化组织总RNA经RT-PCR能成功进行内参检测.     

非洲菊不同组织总RNA提取

以非洲菊为材料,采用Trizol试剂法、改良的异硫氰酸胍法、CTAB法和尿素—氯化锂法,提取非洲菊的花、花蕾、叶、花梗和根的总RNA。所得RNA经1%琼脂糖凝胶电泳以及紫外分光光度计分析,结果表明Trizol法和改良的异硫氰酸胍法适用于花和根组织,尿素-氯化锂法对花蕾和叶组织RNA有较好的提取效果,而花梗组织RNA最好采用CTAB法。     

豚鼠牙齿组织总RNA的提取研究

[目的]研究对RNA丰度值低、硬度大、处理困难的牙齿组织总RNA的提取和纯化技术。[方法]采集10只Hartley豚鼠的切齿和臼齿,分别对其进行了总RNA的提取和纯化,对所提纯的总RNA进行了琼脂糖凝胶电泳鉴定,以及浓度和纯度的测定。[结果]切齿和臼齿总RNA均可见明显的28S、18S和5S三条带,RNA浓度均大于100 ng/μl,A260/A280值均在1.7～2.0之间,A260/A230值在0.1～0.7之间,总RNA的提纯效果较好。[结论]为动物硬组织总RNA的提取提供了技术参考。     

鱼腥草叶片总RNA提取方法研究

[目的]筛选出适合鱼腥草（Houttuynia cordata）叶片RNA提取的方法。[方法]以鱼腥草叶片为材料,比较了经典RNA提取试剂盒、Trizol试剂盒A、Trizol试剂盒B以及富含多糖类材料RNA提取试剂盒提取鱼腥草RNA的效果。[结果]Trizol试剂盒A、Trizol试剂盒B和经典RNA提取试剂盒难以提取出高质量的RNA,而富含多糖类材料RNA提取试剂盒提出的RNA质量高,完整性好,可以满足进一步分子生物学研究的要求。[结论]普通RNA提取试剂盒难以提取出鱼腥草叶片的RNA。     

大麦不同器官总RNA提取方法研究

[目的]探索出一套较好的大麦总RNA提取方法。[方法]以大麦的叶片、茎秆和子粒为试验材料,探索各器官总RNA提取方法。[结果]所得产物的检验结果表明,总RNA具有整齐且清晰的28S rRNA、18S rRNA条带,A260/A280均介于1.8~2.0。将提取的叶片总RNA反转录成c DNA,RT-PCR检测PCR产物在1 500 bp处。[结论]用此方法提取的大麦各器官总RNA质量较好,纯度较高,完整性较好,可用于进一步的分子生物学研究。     

胀果甘草发芽率测定及总RNA提取初步研究

以胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Batalin)种子为试验材料,通过实验室培养出甘草幼苗,利用Trizol试剂法来获取甘草叶片的总RNA,进一步通过琼脂糖凝胶电泳和测定吸光度(D值)以确定RNA浓度及纯度。试验结果表明,甘草种子的萌发率可达85%以上,采用本研究的方法可得到较纯RNA,紫外灯下可以观察到明显的28S、18S、5S的RNA条带,分光光度计测得的D值均为1.85,由此可以看出本实验室条件下培养的甘草萌发率较高,所获取的RNA完整且纯度较高。     

雷公藤叶片总RNA提取方法初探

以3年生雷公藤实生苗幼嫩叶片及雷公藤组培苗为提取材料,采用CTAB、CTAB-LiCl、CTAB-Trizol、Trizol、天根试剂盒以及百泰克试剂盒等6种方法,提取雷公藤叶片总RNA。结果表明,CTAB法及CTAB-LiCl法经纯化、浓缩后得到的RNA完整性较好且纯度较高,可以用于后续研究。     

小麦总RNA的小量快速提取

以小麦幼苗的叶、茎和根组织为材料,采用CTAB法和尿素法分别提取其总RNA。结果表明,CTAB法提取的总RNA经电泳检测,28S rRNA和18S rRNA带型完整;A260/A280的比值接近2,纯度较高;将提取的总RNA反转录合成cDNA,可用于RT-PCR分析。尿素法提取叶和茎组织的总RNA质量较好,但提取根组织的效果较差。说明CTAB法较适合小麦幼苗各组织总RNA的提取。同时,两种方法提取过程中均不使用液氮,可节约试验成本。     

细菌总RNA提取方法的研究进展

总RNA的提取是进行实时荧光定量PCR,Nothem杂交分析,cDNA文库的建立等分子生物学研究的基础.概述了目前国内外细菌总RNA提取方法的现状,对提取过程中的常见问题进行了分析,并且对其未来的发展趋势进行了展望.     

番木瓜果肉RNA提取方法的比较

为了从成熟末期的番木瓜果肉中提取纯净完整的RNA,本试验采用了TRIzol试剂盒、改良TRIzol、SDS法、CTAB法等4种方法从番木瓜果实中提取总RNA。从RNA的完整性、产率和纯度等方面对这几种方法进行比较和评价,结果表明,采用改良TRIzol所得RNA完整性较其他方法好,条带清晰无明显降解,28S和18S RNA的亮度比约为2∶1,D260/D280达1.9且得率较高,为380.5μg.g-1,经RT-PCR后得到一特异条带表明该RNA可用于后续分子生物学操作。     

大白菜叶片总RNA提取方法的研究

利用不同浓度的水杨酸溶液处理苗龄为7 d的大白菜植株,在处理12 h后提取粗酶液并测定酶活.分别采用Trizol试剂法、改良SDS法、异硫氰酸胍法等方法对酶活力最高试验组的叶片提取RNA进行RT-PCR反应.结果表明,0.6 mmol·L-1水杨酸浓度诱导试验组效果最佳,几丁质酶的活力达到最大值;改良SDS法提取的大白菜叶片总RNA完整性好、纯度高, 提取的RNA可用于RT-PCR及RACE等实验操作.     

桃总RNA提取方法研究

以桃叶片为试材,比较SDS-苯酚法、优化SDS-苯酚法、LiCl沉淀法、凯基Trizol试剂法的提取效果及叶片存放时间对RNA质量的影响.结果表明,凯基Trizol试剂法效果较好,产量较高,提取周期最短,RT-PCR得到的条带与目的片段大小一致;而LiCl沉淀法提取的RNA产量较少;SDS-苯酚法产量高,但有较多DNA残留;优化SDS-苯酚法的DNA残留较少.不同存放时间的叶片提取效果表明,60 d以内提取的RNA产量和质量都较高,而超过60 d,随着存放时间的延长,RNA产量减少,质量变差,说明低温存放较长时间对RNA提取有一定的影响.     

适合RT-PCR的苹果芽RNA快速提取方法研究

[目的]从苹果单芽中高效、快速提取RNA,为后续分子生物学研究奠定基础。[方法]分别以苹果品种新红星、嘎拉和富士的单芽为材料,用改良SDS法提取RNA,并经过甲醛变性琼脂糖凝胶电泳和RT—PCR检测RNA质量。[结果]研究出一种高效、快速的苹果单芽RNA提取方法,该方法能在2．5h内得到完整的RNA,经RT—PCR检验,能获得理想的目的片段。[结论]该方法稳定可靠,适合苹果单芽RNA提取。     

草莓不同组织RNA提取方法的改良研究

探讨一种适于草莓不同组织的RNA提取的改良方法。通过增加裂解液震荡强度、离心柱多次吸附、增加去蛋白液温育次数及漂洗次数等步骤对EASYspin RNA提取总RNA操作方法进行改进。结果表明,改良方法提取的草莓根、茎、叶、果实、花中的总RNA,电泳检测都出现清晰的28S和18S两条明显的条带,表明总RNA完整性较好;紫外分光计分析其OD260/OD280值在1.88至2.06之间,OD260/OD230值均大于2.0,RNA浓度含量为310~500μg/mL,表明提取的总RNA纯度好、含量高;基于RNA中mRNA反转录的RT-PCR扩增Actin基因分析结果表明,改良方法提取的草莓不同组织的总RNA质量高。总之,经过电泳、紫外、反转录分析结果证实,改良EASYspin适于草莓果实等不同组织总RNA的提取,是草莓类似果树种类总RNA提取的首选借鉴方法。     

葡萄花序总RNA提取方法研究

[目的]为筛选出提取葡萄花序总RNA的最佳方法。[方法]以藤稔葡萄花序为试材,针对葡萄花序中多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了CTAB法、SDS／酚法以及经改良的CTAB法对藤稔葡萄花序总RNA的提取效果。[结果]3种方法均能从葡萄花序中提取到总RNA。其中,经改良的CTAB法能有效抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,获得纯度高、完整性好的总RNA。其28srRNA亮度约为18SrRNA的2倍,RT—PCR分析表明：该方法提取的总RNA适合于下一步的研究。[结论]经过改良的CTAB法提取葡萄花序总RNA的效果最佳。     

辣椒不同组织总RNA提取方法的比较

采用3种不同方法分别提取辣椒不同组织部位的总RNA,以期筛选适合于辣椒总RNA提取的材料与方法。1.2%琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测结果表明,方法二提取的辣椒叶片和茎总RNA样品的28 S和18 S条带明亮,质量好,产率高;对于辣椒幼果,方法三的提取效果最好;辣椒总RNA的提取效果具有组织特异性,不同组织部位RNA提取需有不同方法。     

油橄榄总DNA提取技术研究

采用3种方法(CTAB法、SDS法、试剂盒法)提取油橄榄叶片基因组DNA.分别从叶片质量、提取液的选择、PVP含量、抽提程序改进等方面设计试验,探索出适宜油橄榄DNA提取的优化反应体系,为油橄榄群体分子生物学的研究提供一个经济、简便、有效的DNA提取方法.     

几种果实总RNA提取方法的评价

RNA的提取是分子生物学的基本内容之一,高质量的RNA是进行基因克隆、基因表达等研究的必要前提.针对果实中多酚、多糖和次生代谢产物等含量较高的特点,综述了试剂盒法、热硼酸法、异硫氰酸胍法、十二烷基硫磺酸钠法、十六烷基三甲基溴化铵法及其改进方法的原理、特点和在果实RNA提取上的应用,并对不同的提取方法进行了比较.