基因组2b灭活疫苗、美国棘波插入、干扰素λ对猪流行性腹泻病毒感染力的影响

干扰素λ为干扰素家族Ⅱ中的一种。干扰素λ与IFN-alpha相比表现出更为强大的抗病毒活性并主要作用于黏膜上皮。基因组2b(genogroup 2b)分离株比基因组1b(genogroup 1b)分离株具有更高的感染力和致病性。基因组2b(genogroup 2b)灭活疫苗的研发使猪流行性腹泻病毒基因组2b分离株得到有效的预防。美国棘波插入lowa106(S-INDEL)对猪流行性腹泻病毒(PC21A)的部分保护可能提示我们不同核苷酸的作用。猪流行性腹泻病的流行正是因为猪流行性腹泻病毒毒株的基因变异导致变异株毒力增强以及现有疫苗难以有效免疫。猪流行性腹泻病毒感染力太强。本文将从基因组2b灭活疫苗、美国棘波插入、干扰素λ三个方面进行讨论。     

白细胞介素和干扰素γ对绵羊体外受精胚胎体外发育影响的研究

利用SOFM+0.8%BSA+1mM谷氨酰胺作为绵羊胚胎的培养液,分别添加LIF、IL-1β、IL-2、IL-6及IFN-γ,以研究LIF、IL-1β、IL-2、IL-6及IFN-γ对绵羊早期胚胎发育的影响。结果说明,LIF促进2～8细胞胚胎发育至桑椹胚,同时也能够促进桑椹胚向扩大囊胚和孵化囊胚发育。但IL-1β、IL-2、IL-6及IFN-γ对绵羊早期胚胎的发育无显著影响。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒抑制神经细胞干扰素的产生

猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)属于β属冠状病毒成员,其具有典型的嗜神经性。多种冠状病毒可逃避宿主先天性免疫的识别而表现出明显的致病性,但宿主的先天性免疫在PHEV感染过程中发挥的作用还不是很清楚。为了明确神经细胞在PHEV感染过程中细胞自身的免疫应答状况,本研究对参与先天性免疫的重要炎性细胞因子和相关的通路变化情况进行了检测分析。用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对PHEV感染小鼠脑神经瘤母细胞(N2a)不同时间点的样品进行检测,结果证明没有IFN-β的表达,说明PHEV不能引起神经细胞产生Ⅰ型IFN。收集感染N2a细胞24h的上清,ELISA方法检测TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ的分泌情况,仅有IL-6呈现高水平表达,说明PHEV感染N2a细胞诱发了IL-6的先天性免疫反应。免疫荧光方法检测PHEV感染N2a细胞24h后重要核转录因子IRF-3和NF-κB的核定位情况,发现NF-κB移位到了胞核,IRF-3仍然存在于胞浆,说明PHEV仅激活了NF-κB信号通路。以上试验结果表明,PHEV进入中枢神经系统时可逃避神经细胞以IFN-β为主的免疫识别,该结果可为深入开展PHEV抑制机体干扰素产生的机制研究奠定基础。     

重组猪γ-干扰素对免疫猪SRBC和BA抗体产生影响的研究

γ-干扰素(IFN-γ)是巨噬细胞、NK细胞的主要活化因子,可增强主要组织相容性复合体(MHC Ⅰ类和MHCⅡ类)分子的表达,增强抗原呈递细胞对抗原的呈递作用,促进T、B淋巴细胞的分化和成熟,促进B细胞分泌抗体.     

牦牛α-干扰素基因的克隆及其原核表达的研究

植物血凝素（PHA）诱导培养牦牛外周血淋巴细胞,提取总RNA,采用RT—PCR技术扩增牦牛IFN-α-A和IFN-α-Ⅱ基因,分别经PCR、酶切鉴定及测序分析后,再分别构建原核表达重组质粒,用SDS-PAGE和Westernblot分析IPTG诱导表达的重组蛋白。序列分析表明,牦牛IFN-α-Ⅱ基因ORF为570bp,与NCBI上发表的奶牛IFN-α-A参考序列同源性为94．4％,与黄牛INF-α-B基因（M10953）的同源性最高,为97．0％;牦牛IFN-α-Ⅱ基因ORF为588bp,与NCBI上发表的奶牛IFN-α-Ⅱ参考序列同源性为94．2％,与黄牛IFN-δ—1基因（XM-871297）的同源性最高,为96．1％。分子遗传进化树分析表明牦牛IFN-α-A和IFN-α-Ⅱ与黄牛、奶牛和水牛亲缘关系最近,与猪、马、人的次之,与其它动物都较远,说明这两基因均具有种属差异性。诱导表达重组蛋白分析表明,pGEX4T／IFN-α-A和pGEX4T／IFN-α-Ⅱ在大肠杆菌中得到了正确表达,均可表达约44ku的融合蛋白,主要以包涵体形式存在,且具有与抗血清发生反应的生物活性。     

基于WAMS的智能电网保护控制系统的策略研究

广域测量系统(WAMS, Wide Area Measurement System)作为智能电网保护控制系统的信息来源,其通信网络性能也成为智能电网保护系统的研究热点。在电网生产中,重要线路保护通道一般应具备两条独立的路由,满足双设备、双路由、双电源的要求。为了提高保护业务抵抗多点通道故障的安全可靠性,增强保护业务抗风险能力和通信通道组网灵活性,目前具备A/B双通道的保护设备正在逐步替换原有的单通道保护设备,但在运行中存在通道组网方式复杂、加重传输设备保护业务重载、不利于快速故障定位等问题,本文旨在结合主要保护通道组织方式,并根据实际生产运行情况提出安全可靠经济的通道组织方式,为智能电网保护控制提供新的分析手段,从保护控制层面有力支撑国家的坚强智能电网发展战略。     

伪狂犬病病毒在NF-κB家族p65基因敲除细胞系的复制规律研究

试验旨在研究伪狂犬病病毒(PRV)在NF-κB家族p65基因敲除细胞系中的复制规律。利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因定点修饰技术构建猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)p65基因稳定敲除细胞系。通过构建p65-sgRNA重组质粒,转染至HEK293T/17细胞,收取慢病毒,感染3D4/21细胞后利用嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7核酸酶检测敲除效率,再通过有限稀释法获得3D4/21-p65^-/-的稳定细胞系。CCK-8试剂盒检测3D4/21细胞中敲除p65基因后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测PRV-GFP感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后病毒增殖的差异;实时定量PCR检测PRV感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、TK基因mRNA表达水平及PRV感染细胞诱导的IL-1β和IL-6基因mRNA水平表达的变化;Western blotting检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后子代病毒滴度。结果表明,sgRNA2和sgRNA3的基因编辑效率较高,对其进行克隆化培养进而获得敲除p65基因的稳定表达细胞系;CCK-8试剂盒检测细胞活力表明,p65基因敲除对细胞活力无影响;流式细胞仪检测表明,同一时间点PRV-GFP在3D4/21-p65^-/-中的增殖显著高于对照细胞;实时荧光定量PCR表明在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、TK基因的mRNA表达水平,而抑制了IL-1β、IL-6基因的mRNA表达;Western blotting结果表明,在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定结果表明,同一时间点PRV-QXX在3D4/21-p65^-/-细胞中子代病毒的复制显著高于对照细胞。以上结果均表明,p65基因敲除可促进PRV在3D4/21细胞中复制。     

伪狂犬病病毒在NF-κB家族p65基因敲除细胞系的复制规律研究

试验旨在研究伪狂犬病病毒（PRV）在NF-κB家族p65基因敲除细胞系中的复制规律。利用慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因定点修饰技术构建猪肺泡巨噬细胞（3D4/21）p65基因稳定敲除细胞系。通过构建p65-sgRNA重组质粒,转染至HEK293T/17细胞,收取慢病毒,感染3D4/21细胞后利用嘌呤霉素筛选获得多克隆细胞系,T7核酸酶检测敲除效率,再通过有限稀释法获得3D4/21-p65^-/-的稳定细胞系。CCK-8试剂盒检测3D4/21细胞中敲除p65基因后对细胞增殖的影响;流式细胞术检测PRV-GFP感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后病毒增殖的差异;实时定量PCR检测PRV感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、TK基因mRNA表达水平及PRV感染细胞诱导的IL-1β和IL-6基因mRNA水平表达的变化;Western blotting检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定检测PRV-QXX感染3D4/21及3D4/21-p65^-/-细胞后子代病毒滴度。结果表明,sgRNA2和sgRNA3的基因编辑效率较高,对其进行克隆化培养进而获得敲除p65基因的稳定表达细胞系;CCK-8试剂盒检测细胞活力表明,p65基因敲除对细胞活力无影响;流式细胞仪检测表明,同一时间点PRV-GFP在3D4/21-p65^-/-中的增殖显著高于对照细胞;实时荧光定量PCR表明在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、TK基因的mRNA表达水平,而抑制了IL-1β、IL-6基因的mRNA表达;Western blotting结果表明,在3D4/21细胞中敲除p65基因促进了PRV gB、gE蛋白的表达;滴度测定结果表明,同一时间点PRV-QXX在3D4/21-p65^-/-细胞中子代病毒的复制显著高于对照细胞。以上结果均表明,p65基因敲除可促进PRV在3D4/21细胞中复制。     

新狼毒素B及其衍生物的抑菌活性研究

采用药敏纸片法对新狼毒素B(化合物1)及其羟基取代产物(化合物2)、羰基还原产物(化合物3)和狼毒色原酮(化合物4)、青霉素钠(化合物5)、头孢哌酮钠(化合物6)进行抑菌活性检测和比较。结果发现,化合物1和化合物2对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌5种供试菌均有不同程度的抑菌活性,即二者对革兰氏阳性菌和阴性菌均有活性,其中化合物1较化合物2的活性更强。化合物1~化合物5对4种球菌的抑菌活性大小次序为5>1>3>4>2。化合物1~化合物4、化合物6对大肠杆菌的活性大小为6>3>1>2>4。从而初步得出新狼毒素B分子中羟基为主要活性基团,另外,其经过羰基还原后虽然对4种球菌的抑菌活性有轻微的降低,但是对大肠杆菌的活性增强了,也就是说其抑菌活性的选择性提高了。     

猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A经NF-κB/MAPK通路对巨噬细胞RAW264.7影响的研究

通过猪链球菌2型分解代谢控制蛋白A(catabolite control protein A,ccpA)原核表达蛋白对巨噬细胞RAW264.7进行刺激,结果发现,猪链球菌2型ccpA蛋白可以调节巨噬细胞NO产生,另外该蛋白质可通过对iNOS、NF-κB、p38 和 ERK 1/2 MAPK等的调节,从而影响巨噬细胞RAW264.7对细胞因子IL-6、TNF-α和IFN-γ的分泌。该研究为类似蛋白质对免疫细胞NF-κB/MAPK等通路调节影响及细胞因子产生条件探索建立了基础。     

"新工科"背景下"工程训练"中俄双语教学模式的现状与对策研究

在科技变革背景下,"新工科"概念应运而生.在"新工科"背景下,我们国家迫切需要具备创新精神和创新能力的高素质复合型人才,而"工程训练"是工科学生在本科期间实践教学环节中的重要一环,着重锻炼学生的创新思维与动手能力.同时,近年来,俄罗斯经济快速复苏,市场发展潜力巨大.在"新工科"和中俄深入合作的背景下,对于"工程训练"的...