纳豆激酶溶血栓作用的研究

本研究通过纳豆激酶纤维蛋白溶解活性实验、纳豆激酶体内血栓溶解实验对纳豆激酶的溶栓作用做了较全面的研究。对纤维蛋白溶解活性研究结果显示：高、中、低剂量的纳豆激酶均能显著地降低血浆优球蛋白的溶解时间、显著地降低血浆纤维蛋白原的含量、显著地增加纤维蛋白裂解产物的含量,表明纳豆激酶具有较强的纤维蛋白溶解性,且同等剂量的纳豆激酶和尿激酶相比,前者的纤溶性大于后者;体内血栓溶解的实验结果显示：纳豆激酶可明显地延长血栓形成时间、显著减少股动脉的长度及湿重并明显提高血栓的再通率、显著减少肺内血栓的形成,表明纳豆激酶具有较强的体内溶栓作用,且同等剂量的纳豆激酶和尿激酶相比,前者的溶栓作用高于后者。显示了纳豆激酶具有强大的溶栓作用,且起效快、药效长,有望成为一代溶栓药物。     

对蚯吲纤溶酶的性质和纤溶活性的研究

从蚯蚓组织中分离纯化出一种纤溶酶。研究表明,其最适pＨ的值为８．０,最适温度为５ ．７℃,热稳定性较好,金属离子Ｎa＾＋,Ｋ＾＋,Ｍg＾２＋等可提高此酶的活力,而Ｈg＾２＋,Ｃa＾２＋等对此酶有一定的抑制作用。采用平板法测定此酶的血纤维蛋白溶解活性,证明此酶具有强烈的纤溶活性。     

高活性纳豆激酶工艺改进研究

[目的]优化高活性纳豆激酶的纳豆生产工艺条件。[方法]从市售纳豆产品中分离筛选出高活性的菌株作为试验菌株,采用固态发酵的方法制备纳豆,对影响纳豆激酶产量的主要因素浸泡时间、接种量、发酵时间等进行考察,研究高活性纳豆激酶的工艺条件。[结果]利用对甲基苯磺酰L精氨酸甲酯(TAME)法测定纳豆激酶活性,确定最佳纳豆激酶酶活的纳豆生产工艺条件为浸泡时间8 h、接种量10%、发酵时间48 h。[结论]该研究可为高活性纳豆激酶的生产提供参考。     

纳豆激酶研究进展

纳豆激酶是由枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)分泌表达的碱性丝氨酸蛋白酶,具有极强的纤维蛋白溶解活性。研究表明,纳豆激酶纤溶活性强、副作用小,可用于开发溶栓药物。介绍了纳豆激酶的溶栓机理,就纳豆激酶的功效、生产菌种选育、发酵条件的优化、酶活性位点及定向进化等方面进行综述。     

纳豆激酶研究进展

对纳豆激酶的理化性质、基因与蛋白结构、纳豆激酶基因的克隆与表达及体外溶栓活性测定方面的研究进展进行了综述,并对纳豆激酶的发展前景进行了展望。     

对蚯蚓纤溶酶的性质和纤溶活性的研究

从蚯蚓组织中分离纯化出一种纤溶酶。研究表明,其最适pH值为80,最适温度为57℃,热稳定性较好,金属离子Na+,K+,Mg2+等可提高此酶的活力,而Hg2+,Ca2+等对此酶有一定的抑制作用。采用平板法测定此酶的血纤维蛋白溶解活性,证明此酶具有强烈的纤溶活性。     

纳豆激酶生产菌的定向筛选

本实验利用目标纳豆枯草芽孢杆菌所应具有的耐热性，耐盐性及显著的蛋白酶活性等生物学特性设计定向选育方案，从日本纳豆和纳豆发酵剂样品中筛选蛋白酶活力高，并溶血纤维蛋白特异性显著的枯草芽孢杆菌，最终从1种干纳豆中分离筛选出1株芽孢杆菌，代号为：HL986，其培养物中1种蛋白酶的溶栓性和分子量都十分接近已有报道的纳豆激酶（NK）。     

纳豆激酶液体发酵条件的优化

以纳豆枯草芽孢杆菌（Bacillus subitilis natto）为出发菌株，对其液体发酵生产纳豆激酶（Nattokinase，NK）的培养基组成（碳源、氮源、碳氮比和金属离子组成）和培养条件（温度、pH值，发酵时间、接种量和装液量）对产酶量的影响进行了研究。结果表明：液体发酵培养基的最佳碳源为木糖，浓度为1．5％；最佳氮源为大豆蛋白胨，浓度为2．0％；添加无机盐组分为MgSO4 0．05％、CaCl2 0．02％、K2HPO4／KH2PO 40．1％／0．1％。发酵培养的最佳温度为37℃，pH7．0时有利于菌体产酶，最适装液量为100mL／250mL，接种量以2％为最佳，最适种龄为18h；发酵周期为3d。通过优化培养基和发酵条件，产酶量达到1081 U／mL。     

纳豆激酶酱醪制作的可行性研究

[目的]研究纳豆激酶酱醪制作的可行性。[方法]通过整合纳豆激酶发酵工艺与酱油发酵生产工艺,使单次原料发酵产出2套产物,利用两者发酵原料的相同性,通过调整发酵条件实现2种发酵工艺的整合。[结果]该工艺成功制得含有纳豆激酶的酱醪。[结论]该研究证明整合纳豆激酶发酵工艺与酱油发酵生产工艺,单次原料发酵可以产出含有纳豆激酶的酱醪。     

纳豆激酶液体发酵培养基优化研究

以纳豆激酶生产菌为出发菌株,利用单因素与完全随机试验,优化其液体培养基组成（碳源、氮源和碳氮比）。结果表明：液体发酵培养基的最佳碳源为淀粉,浓度为2.00%;最佳氮源为酵母粉,浓度为1.50%;最适种龄为7.00 h,发酵周期为26.00 h。通过优化培养基,产酶量可达到720.70 U/mL。     

Studies on a Novel Fibrinolytic Enzyme(Nattokinase)in the Vegetable Cheese Natto

ＳｔｕｄｉｅｓｏｎａＮｏｖｅｌＦｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃＥｎｚｙｍｅ（Ｎａｔｔｏｋｉｎａｓｅ）ｉｎｔｈｅＶｅｇｅｔａｂｌｅＣｈｅｅｓｅＮａｔｔｏＸｕＺｈｏｎｇ,ＺｈｅｎｇＺｈｉｙｉｎｇ,ＺｈａｏＸｉａｏｄｏｎｇ,ＣａｎｇＪｉｎｇ,ＺｈａｏＧｕｏｈｕｉ...     

纳豆加工工艺的研究

纳豆是日本的一种传统性食品,近年研究发现其具有许多保健功能.通过正交试验和产品感官评定,得到的纳豆生产优化工艺是：菌种为B-1,大豆浸泡时间为14 h,蒸煮时间20 min（121℃）,接种量4%,最佳发酵温度为37℃,最佳发酵时间为24 h,NaCl 3%,蔗糖2%,在4℃下后熟24 h.     

纳豆芽孢杆菌脲酶酶学性质的研究

为了研究不同的碳源、氮源和不同的培养条件对纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)脲酶产量的影响,以及不同温度、pH和几种金属离子对脲酶活性的影响,采用了滴定法(国标法,标准号GB/T 1356787-1997)和Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定不同碳源、氮源和不同培养条件培养的纳豆芽孢杆菌(CGMCC No.2801)脲酶总活性和浓度,以及不同温度、pH和金属离子条件下的脲酶活性。结果表明,当以谷氨酸为氮源、蔗糖为碳源、pH7、37℃条件下培养12h时脲酶的浓度最高,为57.2μg/mL。脲酶催化反应的最适条件为35℃、pH 7。实验选用的5种金属离子对脲酶活性均有抑制作用,抑制强度为Cu2+Zn2+Fe2+Mg2+Mn2+,最大抑制率为36.4%。这些结果为纳豆芽孢杆菌脲酶的进一步研究及低产氨纳豆芽孢杆菌的构建奠定了基础。     

纳豆菌的发酵条件优化及纳豆制备方法改良

对实验室分离到的纳豆菌Y-07进行了发酵条件的优化,确定了最佳碳源、氮源分别为葡萄糖和大豆蛋白胨,最佳发酵温度为35℃。通过制备方法的改良得出,添加适当比例的大豆蛋白胨和葡萄糖,可以提高纳豆制品的质量。     

9株纳豆菌产酶活力的比较研究

对9株纳豆菌产纳豆激酶和超氧化物歧化酶活性进行了研究,从中选出1株产纳豆激酶(NK)和超氧化物岐化酶(SOD)能力较高的菌株(NS-W-6)。该菌株在普通大豆培养基上能产生大量纳豆激酶和SOD酶,产纳豆激酶活力为1 766.25 U/mL,超氧化物歧化酶活力为214.85 U/mL。     

饲用纳豆菌提取液抑菌效果的研究

实验旨在研究不同pH值饲用纳豆菌提取液对玉米霉菌和酵母菌的抑制效果。将饲用纳豆菌经24h与48h培养,提取上清液,采用药敏试纸法进行不同pH值饲用纳豆菌提取液对玉米霉菌与酵母菌的抑菌实验。结果发现,不同pH值的饲用纳豆菌提取液对玉米霉菌与酵母菌均有一定的抑菌作用,酸性环境有利于纳豆菌提取液中活性物质发挥抗菌活性。研究揭示,饲用纳豆菌提取液发挥抑菌作用具有选择性,并与提取液pH值相关,该结果为其在生产实践中用作饲用天然抗菌剂提供科学参考。     

纳豆菌的抗菌作用研究

为了寻找天然生物防腐剂,对纳豆菌的抗菌作用及其发酵液的抗菌成分进行了研究。纳豆菌经培养取其上清液,用Sevage法提取蛋白,无水乙醇提取多糖,制备蛋白及多糖水溶液。采用管碟法测定培养物上清液、蛋白及多糖水溶液的抗细菌和真菌能力。研究发现培养物上清液、蛋白及多糖水溶液均具有广谱抗菌作用,对细菌、真菌皆有一定的拮抗作用,特别是对志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母具有较强的抗菌作用,其中以志贺氏菌最为敏感;同时经比较分析发现,抗菌作用的主要组分是蛋白;纳豆菌的抗菌物质可起到杀菌作用,而非抑菌作用。     

豆豉纤溶酶高产突变株的选育

[目的]从豆豉中筛选出高产纤溶酶的菌株,并通过平板筛选得到高产突变株。[方法]从6种不同豆豉样品中,筛选得到具有较高纤溶酶活性的菌株,采用物理化学诱变方法进行复合诱变,再利用纤维蛋白平板对诱变后菌株进行筛选。[结果]得到1株高纤溶酶活力菌株,命名为DC-YC41,酶活达到742 IU/ml。[结论]初步判断,得到的这株高纤溶酶活力菌株为枯草芽孢杆菌。