地被菊'映洁红菲'再生及遗传转化体系的建立

以地被菊'映洁红菲'试管苗叶片为试材,采用组织培养法,研究了6-苄基腺嘌呤、萘乙酸激素浓度、蔗糖浓度、MS浓度、NO3-和NH+的浓度比、羧苄青霉素浓度及潮霉素浓度对不定芽分化的影响,以期建立'映洁红菲'高效的再生体系,为地被菊转基因体系奠定基础.结果 表明:在6-BA和NAA浓度分别为2.0、0.6 mg·L-1,蔗糖浓度为30 g·L-1,NO3-:NH4+为30∶30,基本培养基3/4MS中,'映洁红菲'叶片中愈伤组织诱导和不定芽分化率达到最高,平均每个叶盘分化3.22个不定芽,诱导率75.67％.在生根培养基中加入浓度为0.75 mg·L-1 IBA时,根系生长最好.'映洁红菲'遗传转化时,羧苄青霉素浓度为250mg· L-1,潮霉素浓度为2.0 mg·L-1,适合作为选择压.     

2种抗生素对甜瓜子叶外植体不定芽分化的影响

探讨了卡那霉素和羧苄青霉素对黄河蜜甜瓜子叶不定芽分化的影响。结果表明,25mg/L卡那霉素对不定芽分化开始产生抑制,75mg/L时完全抑制不定芽的分化;羧苄青霉素在低于或等于400mg/L时无抑制作用,500mg/L时开始对不定芽分化产生抑制作用;卡那霉素与羧苄青霉素同时使用无互相作用的效应产生,对不定芽分化并无增效或减效作用,与卡那霉素单独使用效果相似。     

转化用抗生素对青花菜离体再生的影响

为确定农杆菌转化青花菜时所用抗生素的适宜浓度,在分化与生根培养基中分别添加不同浓度的卡那霉素(Km)、500 mg/L的羧苄青霉素(Cb)与头孢霉素(Cef),探讨了对青花菜离体再生的影响.结果表明:青花菜外植体对Km比较敏感,表现在分化阶段10 mg/L Km能抑制带柄子叶与下胚轴分化不定芽,在生根阶段15 mg/L Km能完全抑制根的生出.在脱菌抗生素的使用上,分化阶段宜用Cb,并逐步降低浓度,生根阶段宜用低浓度的Cef.     

胶东卫矛再生体系的建立

通过对胶东卫矛不同外植体来源、不同激素种类以及激素配比的比较,初步建立了胶东卫矛组织培养及再生体系:胶东卫矛茎段愈伤组织诱导培养基为MS 6-BA0.5mg/L(毫克/升) IBA0.05mg/L(毫克/升),分化培养基为MS 6-BA0.5mg/L(毫克/升) IBA0.05mg/L(毫克/升),生根培养基为MS NAA0.4mg/L(毫克/升) IBA0.1mg/L(毫克/升);在此基础上进一步进行了抗生素敏感性实验,确定了胶东卫矛茎段转化的卡那霉素筛选浓度为50mg/L(毫克/升),羧苄青霉素浓度为200mg/L(毫克/升),为胶东卫矛的遗传转化奠定了基础.     

羧苄青霉素对几种浆果分化及生长的影响研究

研究了羧苄青霉素对蓝莓、树莓及蔓越莓3种浆果不同外植体的再生、生长的影响及对农杆菌的抑制作用。结果表明:在分化阶段蓝莓与树莓羧苄青霉素浓度应在200~300 mg/kg,而且继代时间应在7 d,而蔓越莓可以采用400 mg/kg,继代时间可在7~14 d;在生根阶段3种植物羧苄青霉素浓度应在200 mg/kg以下。     

2种抗生素对甜瓜子叶外植体不定芽分化的影响

探讨了卡那霉素和羧苄青霉素对黄河蜜甜瓜子叶不定芽分化的影响。结果表明，25mg／L卡那霉素对不定芽分化开始产生抑制，75mg／L时完全抑制不定芽的分化；羧苄青霉素在低于或等于400ms／L时无抑制作用，500mg／L时开始对不定芽分化产生抑制作用；卡那霉素与羧苄青霉素同时使用无互相作用的效应产生，对不定芽分化并无增效或减效作用，与卡那霉素单独使用效果相似?     

农杆菌介导萱草植株CHS基因的转化

以萱草‘香宝’愈伤组织为外植体,以10 d为继代周期,将携有PSN1301-CHS的农杆菌EHA105菌株侵染受体材料,使CHS基因导入到萱草‘香宝’中。建立萱草遗传转化的适宜条件:抑菌剂以浓度为350 mg/L的羧苄青霉素为宜;潮霉素为转化子的筛选剂,25 mg/L为适宜的作用浓度;转化中宜选择预培养时间为2 d;农杆菌菌液浓度OD600在0.6左右,选用重悬液为MS+3%糖;侵染时间为15 min;在菌液和共培养基中同加100μmol/L的乙酰丁香酮;共培养基时间为2 d。     

含内生菌外植体红掌组培方法的研究

为了解决组织培养中组织内部带菌的问题,以组织内部带菌的红掌为外植体,采用含有40%的次氯酸钠水溶液消毒10min,然后分别接种到各种含不同浓度的抗生素的培养基上,经过2～3次继代培养后发现:外植体在含有500mg/L的羧苄青霉素、100mg/L硫酸链霉素和1000mg/L的制霉菌素的培养基上生长正常,组织内部所带细菌和真菌得到了较好的抑制和消除。     

菊花新品系叶片外植体不定芽再生体系的研究

以'东林4号'、'东林6号'、'东林9号'3个优良菊花品系叶片外植体为试材,探讨了基因型、叶龄、潮霉素浓度等因素对菊花叶片不定芽再生的影响.结果表明:基因型是影响不定芽再生的重要因素,不同品系叶片不定芽再生的激素配比存在明显差异;同一品系,上层幼嫩叶片分化率明显高于中下部.'东林9号'品系叶片不定芽分化率高达90%,'东林9号'叶片及不定芽在30 mg/L的潮霉素中表现为全部死亡.东林4号最适分化培养基为:MS+3 mg/L BA+0.1 mg/L 2,4-D;东林6号最适分化培养基为:MS+2 mg/L BA+1mg/L NAA;东林9号最适分化培养基为:MS+0.5mg/L BA+1.5 mg/L NAA.     

甜蛋白基因MBLII 对莴苣的遗传转化

 以4 日龄莴苣(Lactua sativa L.) 无菌苗子叶为外植体, 通过根癌农杆菌介导,成功地进行了马槟榔甜蛋白基因MBLII 对莴苣的遗传转化。抗生素浓度和子叶外植体与农杆菌的共培养时间是影响转化的重要因素。附加卡那霉素( Kan) 50 mg/ L 的诱芽培养基MS I(MS+ NAA 0. 1 mg/ L+ 6􀀁BA 0. 1 mg/ L+ 羧卞青霉素500 mg/ L) 最适于侵染后子叶外植体的诱芽培养。在外植体与农杆菌共培养0~ 7 d 的范围内, 以共培养3 d 最佳( 生芽率58. 3%, 白化率29%) 。1~ 2 cm 再生芽移入诱根培养基MS II (MS+ NAA 0. 05 mg/ L+ Kan 50 mg/ L+ 羧苄青霉素300 mg/ L) 中, 诱根率可达100%。获得的抗性植株经组织化学及PCR 特异扩增鉴定和统计, 7. 6%阳性。Southern blot 结果证明MBL II 基因已整合到莴苣基因组中。     

一品红组培苗快繁技术的研究

以一品红带芽茎段、叶片为外植体,研究了不同激素浓度配比的MS培养基对愈伤组织、芽的分化及增殖和试管苗生根的不同效应。结果表明:最佳愈伤组织诱导培养基为MS+BA0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L(pH 5.6),诱导率达到92.5%;芽的分化最佳培养基为MS+BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L,不定芽的诱导率达到83.3%;芽的增殖培养基为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L,增殖系数为10.8;而最佳生根培养基为1/2MS+BA 0.2mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L,每芽生根数平均为3.5条。该研究结果为一品红组培苗的工厂化生产提供了可靠的技术指标。     

马蹄金组织培养与植株再生

以马蹄金无菌苗为试材,子叶为外植体,对马蹄金的组织培养进行系统的研究,讨论不同植物生长调节剂种类的组合及不同浓度的配比对愈伤诱导、分化的影响。结果表明:含不同植物生长调节剂的培养基对愈伤组织的诱导频率无显著差别,诱导率均达80%～100%,但愈伤的质地却有很大的不同,以5.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA和0.5mg/LIAA+1.5mg/L6 BA效果最好,其中0.5mg/LIAA+1.5mg/L6-BA可直接诱导出不定芽,诱导率高达82.61%;AgNO_3对愈伤组织的分化起着重要的作用,以0.1mg/LNAA+3.0mg/L6-BA+2.0mg/LAgNO_3分化的效果最好,分化频率高达76%;最佳的生根培养基为1/2MS+0.5mg/LIBA,生根率可达100%。     

彩叶草组织培养研究

以唇形科鞘蕊花属彩叶草(Coleus blumei Benth.)叶片为外植体,进行组织快繁的研究.结果表明:叶片组织培养中,最适宜的消毒处理为消毒剂采用0.1%升汞溶液,加入3～4滴吐温80,消毒时间为5 min,总体污染率低于20%;最适的愈伤组织诱导及继代培养基为1/2MS 2.0mg/L 6-BA 1.0 mg/L NAA的组合,其平均诱导率为72%;最适分化培养基是1/2MS 1.0 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA的组合,其平均分化率为85.4%;彩叶草不定芽的最适生根培养基是1/2MS O.5 mg/L NAA组合,其平均生根率为92.5%.     

红掌愈伤组织增殖分化条件的优化

以红掌愈伤组织为材料,研究影响红掌愈伤组织增殖和分化以及芽增殖的因素。结果表明:以MS+6-BA1.0 mg/L+KT 0.3 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L为红掌愈伤组织增殖和分化的最佳培养基,培养到8周绝对生长速度达到910.31%、分化率达到100%,到150 d时分化指数达到24.17;在芽增殖培养试验中,以1/2 MS+6-BA2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+KT 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L为适宜培养基。在培养方式上,液体培养优于固体培养。     

苜蓿高频再生体系的建立

以10个品种苜蓿无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究了不同培养基、不同激素种类和配比对愈伤组织诱导率及分化率的影响。结果表明:国产苜蓿下胚轴外植体愈伤组织分化率最高;愈伤组织诱导最适培养基为MS盐+UM维生素+2mg/L 2,4-D+0.25mg/L KT+2g/L水解酪蛋白+6g/L琼脂+30g/L蔗糖;愈伤组织最适分化培养基为MS+0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA;最适生根培养基为1/2MS。     

番茄真叶愈伤组织诱导及植株再生研究

对番茄外植体诱导愈伤组织、愈伤组织分化和根的诱导条件进行研究.结果表明:适合外植体形成愈伤组织的培养基为MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L;适合愈伤分化的培养基为MS+BA 3.0 mg/L+IAA 0.2 mg/L;适合生根的培养基为1/2MS+IAA 0.1 mg/L.     

鹿药组织培养的研究

为保护鹿药这种野生植物资源,以生长旺盛的鹿药根茎为材料,进行愈伤组织诱导、愈伤组织分化、试管苗的生根、扦插和移植的研究,成功地建立起壳药根茎的再生体系。结果证明：MS＋ZT0．2mg/L＋CH20mg／L＋2,4-D1．5mg／L（或2．0mg／L）是鹿药根茎愈伤组织诱导培养的理想培养基;MS＋AgNO3 0．2mg／L＋BA0．2mg／L＋KT0．3mg／L＋NAA0．1mg／L是鹿药愈伤组织分化培养的理想培养基;1／2MS＋BA0．4mg／L＋NAA0．1mg／L是鹿药愈伤组织分化不定芽继代培养和增殖培养的理想培养基;1／3MS＋NAA0．1mg／L＋IAA0．4mg／L是鹿药生根培养和生根继代培养的理想培养基;移植到山坡上试管苗生长旺盛。     

菊苣组织培养及植株再生

以普那菊苣叶柄为外植体进行组织培养试验,结果表明:菊苣叶柄在5种培养基上均可诱导出愈伤组织,总出愈率在90%以上,但分化效果因培养基的不同而有较大的差异.诱导愈伤组织及分化的最佳培养基为:MS KT 1.0 mg/L十NAA 0.2 mg/L;生根培养基为:MS IBA 0.2 mg/L.     

合欢离体培养及高效再生体系的建立

以合欢种子和当年生枝条为材料,研究了合欢离体培养及再生体系,探讨了不同激素组合对合欢愈伤组织的产生、分化及生根的影响,筛选出高效产生愈伤组织培养基为MS+BA2mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.3mg/L;分化培养基为MS+BA1mg/L+NAA0.1mg/L;有利于生根的培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L,以上培养基均加30g/L蔗糖、8g/L琼脂。     

根癌农杆菌介导的西瓜遗传转化研究

利用带有内含子的GUS基因的瞬时表达,研究影响根癌农杆菌介导的西瓜遗传转化的若干因素。结果表 明:西瓜子叶块外植体对潮霉素较为敏感,15 mg/L是适宜的筛选浓度,可明显抑制非转化组织的生长;脱菌过程中 采用500 mg/L的头孢霉素,对外植体生长影响较小;农杆菌菌株EHA105对西瓜子叶块的侵染能力较强;预培养有 利于转化;共培养3-4 d有利于提高转化频率并避免了农杆菌的过度生长;OD600值为0.3的菌液侵染10min效果最 佳;共培养培养基中添加乙酰丁香酮可提高转化频率。