草莓茎尖培养脱毒效果研究

以草莓"丰香"品种为材料,利用匍匐茎剥取茎尖,以茎尖培养结合改良热处理、冷处理、二次脱毒等方法来进行草莓脱毒研究,用电镜及野生草莓小叶嫁接法进行鉴定,结果表明,草莓脱毒效果与剥取的茎尖大小有关,茎尖越小,脱毒效果越好.以0.5mm(毫米)大小剥取茎尖,直接剥取茎尖法不能够彻底清除病毒,而二次脱毒法、改良热处理 茎尖培养法、冷处理 茎尖培养法等获得的植株都没有检测到病毒,脱毒效果良好.其中改良热处理 茎尖培养法的茎尖成活率最高,达47.37%.因此最适宜的脱毒法为改良热处理 茎尖培养法,即先将草莓匍匐茎放在40℃热水中处理4h(小时),再剥取≤0.5mm(毫米)大小的茎尖进行培养,脱毒效果良好.     

番木瓜茎尖的玻璃化法超低温保存及其植株再生

 研究了番木瓜( Carica papaya L. ) 茎尖玻璃化法超低温保存的一些影响因素。结果表明: 无菌试管苗在MS + BA 0.5 mg/L + NAA 0.1 mg/L + GA₃ 1.0 mg/L 的培养基上生长较好。番木瓜茎尖超低温保存较佳体系是: 3～5 cm的茎尖在含有5 %二甲基亚砜(DMSO) 培养基上预培养3 d , 解剖镜下剥取含1～2 个叶原基的茎尖(1.5～2.5 mm长) , 先在室温下于60 %的玻璃化溶液(PVS2) 中装载40～50 min , 再用PVS2于0 ℃下处理30 min , 换1 次PVS2 溶液后迅速投入液氮。保存24 h 后, 在40 ℃水浴中化冻, 用1.2 mol/L 的蔗糖培养液洗涤两次, 转入继代培养基上再培养, 成活率和再生率分别达53.7 %和52.6 %。再生植株生根后可移栽成活。     

大蒜茎尖玻璃化法超低温保存技术研究

 用山东‘苍山大蒜’进行了茎尖玻璃化法超低温保存技术的研究。5～8 mm大蒜茎尖在MS +0.7 mol/L蔗糖的固体培养基上预培养7 d, 切取3.0～3.5 mm的茎尖, 在20℃下经60% PVS2 处理60 min,再于0℃下用PVS2 处理5～60 min后, 换适量新鲜PVS2 , 浸入液氮。保存2 d或1个月后取出, 在37℃水浴中解冻2 min, 用MS + 1.2 mol/L蔗糖液体培养基洗涤2次, 每次10 min, 经过恢复培养, 茎尖成活率最高可达到100%。     

玻璃化法超低温保存柑桔茎尖及植株再生

 采用玻璃化法对柑桔茎尖的离体超低温保存进行了研究。约10 mm 长的柑桔茎尖于含5 %二甲基亚砜(DMSO) 的培养基上预培养3 d , 切取2～2. 5 mm 长的茎尖, 室温下60 %玻璃化溶液2 (PVS2) 装载20～30 min , 然后用PVS2 于0 ℃处理50～60 min , 换入新鲜的PVS2 , 迅速投入液氮中, 24 h 后在40 ℃水浴中迅速化冻, 再用1. 2 mol/L 蔗糖培养基洗涤2次, 接种于含BA 1. 0 mg/L 的MT培养基上, 26 ℃暗培养1 周后转于正常光下培养。枳壳茎尖超低温保存后用氯化三苯基四氮唑(TTC) 法检测, 成活率为100 % , 培养再生率达到90 % ,再生后的苗能正常生根, 与对照没有形态上的变异, 移栽可成活。     

高淀粉甘薯茎尖脱毒与组培技术研究

以高淀粉专用甘薯品种‘渝薯2号’茎尖为外植体,通过组织培养研究了不同消毒方法、不同茎尖大小、不同浓度生长调节剂配比、不同培养方式对茎尖脱毒和成苗效果的影响。结果表明：外植体用0.1%升汞溶液消毒7～8min,可达到理想的消毒效果;切取分生组织带2个叶原基、大小0.3～0.4mm的茎尖接种于＂MS＋1.0mg/LBA＋0.05mg/LNAA＋0.5mg/LGA3＂培养基上一次培养最好。     

激素、光照对"红脸颊"草莓茎尖分化的影响

以草莓品种红脸颊茎尖为外植体,研究了激素、暗处理、光照强度对茎尖分化的影响,以期建立高效的茎尖分化体系。结果表明,在MS基本培养基中,添加6-BA0.5mg/L＋NAA0.1mg/L的激素配比是诱导＂红脸颊＂草莓茎尖分化成苗的最佳激素组合;暗处理5d后采用2000lx光照光培养（14h/d）的条件最有利茎尖分化成苗,萌芽率86.7%。     

香蕉茎尖的玻璃化法超低温保存及其植株再生

 以香蕉(Musa spp. ) 为试材, 对其离体培养茎尖玻璃化法超低温保存影响因素进行研究。结果表明, 不定芽在MS + 3.0～5.0 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA的培养基上分化较好。香蕉茎尖超低温保存较佳体系是: 2.0～3.0 cm的茎尖在含0.4 mol/L蔗糖培养基上预培养2 d, 剥取带1～2个叶原基的茎尖(长1.0～1.5 mm) , 室温(25℃) 下装载液(MS + 2 mol/L甘油+ 0.4 mol/L蔗糖) 装载20～30 min, 然后用玻璃化溶液( PVS2 ) 于0℃下处理40 min, 换1次PVS2后迅速投入液氮。保存至少1 h后, 在40℃水浴中化冻90 s, 用1.2 mol/L蔗糖培养液洗涤2次, 每次10 min, 然后转入含0.3 mol /L蔗糖的MS培养基上,暗培养10～15 h后转移到含0.5 mg/L 62BA的MS培养基中, 暗培养1周后转移到正常光下, 3个香蕉品种(巴西蕉、广东香蕉2 号、广东粉蕉1 号) 的成活率分别为75.9%、40.0%和69.6% , 再生率分别为63.4%、35.0%和63.4%。再生植株生长和分化正常, 生根后可移栽成活。     

甜樱桃茎尖培养及PNRSV的RT-PCR检测

 研究了茎尖大小、接种方式、培养基成分、试材基因型对甜樱桃品种茎尖培养的影响。1 年生成熟枝条上茎尖成苗率为8. 3 %～23. 7 % , 嫩梢上的茎尖成苗率为27. 3 %～37. 5 %。利用RT-PCR 技术对部分甜樱桃试管苗进行了早期病毒鉴定, 筛选出一些不带李坏死环斑病毒(PNRSV) 的甜樱桃试管苗,并证明甜樱桃试管苗微茎尖培养不能有效脱除PNRSV。     

辣椒茎尖培养脱毒研究

以云南小米椒为试材，经无菌发芽，在2～3真叶时，经35℃处理4周，取无菌苗生长点，以MS为基本培养基，在其中分别添加6-苄基腺嘌呤(6-BA)、玉米素(ZT)、细胞激动素(KT)、赤霉素(GA3)、吲哚乙酸(IAA)和萘乙酸(NAA)等生长调节剂进行培养。经筛选，发现其中MS BA7．0mg／L IAA0．05mg／L比较适宜于茎尖培养。MS ZT8．0mg／L GA32．0mg／L比较适宜于茎的伸长。将长2cm以上的芽无根苗转入1／2MS IAA0．2mg／L NAA0．1mg／L的培养基上有利于根的生长。生根后移入土壤可正常生长。1～1．5mm长的茎尖成苗脱毒率达96．3％。0．1～0．5mm长的茎尖脱毒率达100％。     

草莓热处理脱病毒的研究

试验研究了草莓盆栽苗及茎尖组培苗热处理的脱毒效果,并对盆栽苗热处理致死原因作了初步探索。结果表明,影响草莓盆栽苗热处理寿命的一个重要因素是根际温度。采用根系保护变温法(39℃/18℃昼/夜),由于根际温度变低(29℃/14℃/昼/夜),“绿色种子”品种苗寿命达30—90天。经90天热处理后,脱毒率达66％。热处理期间,分期取母株上原有的匍匐茎进行茎尖培养(外植体为1.0毫米),其组培苗脱毒效果(y)与热处理天数(x)呈极显著的正相关(y=24.45+1.33x,r=0.9388匍匐茎最长寿命达30天,相应的茎尘组培苗脱毒率为88.9％。采用茎尖组培苗进行热处理脱毒,“女峰”39℃/18℃变温30天结合38℃恒温30天;“明晶”,“女峰”38℃恒温46天的脱毒率均达到100％;“80—9—4”,“女峰”39℃/18℃变温60天,脱毒率分别为82％和88％。     

草莓组培苗的病毒检测与其果实品质分析

以2种不同大小的草莓茎尖分生组织为试材,进行组织培养,分别获得再生小植株并进行病毒检测,利用上述脱毒母株和农家自留种苗分别繁育匍匐茎子苗,研究了2种子苗的病毒发生率与果实品质,以期通过草莓脱毒试验为脱毒苗的应用推广提供参考依据。结果表明：不同草莓品种的病毒含量有差异,并且病毒外壳蛋白表达量与其核酸转录量一致。切取草莓匍匐茎约5 mm茎尖分生组织进行第一次脱毒,其部分再生小植株仍然携带了低浓度病毒。与之相比,再切取试管苗约0.5 mm茎尖组织进行第二次脱毒,其再生率虽然仅为31%,但是二次脱毒株均为无毒苗。利用已鉴定的脱毒母株和农家自留种苗分别繁育匍匐茎子苗,经过定植后发现2种子苗的病毒病发生率差异极显著。二次脱毒母株繁育的子苗果实可滴定酸含量显著低于农家自留种苗(P<0.05),而可溶性总糖等品质参数差异不显著。综上所述,以0.5 mm茎尖分生组织为外植体进行草莓组织培养,可以获得优质的脱毒母株,相关研究成果有助于未来草莓良繁体系建设。     

草莓茎尖组培技术的简化和降低成本试验

现以草莓匍匐茎尖为试材,在草莓组织培养初代接种过程中对茎尖消毒、驯化和培养基配制方面进行简化和廉价替代的试验研究。结果表明:逐层剥离初代接种效果优于常规接种;廉价替代培养基的继代和生根培养与常规培养基本相同;采用简化技术可降低成本55%左右。     

苹果组培苗脱毒试验

热处理是苹果获得无病毒原种材料的有效途径之一。我们研究了不同品种苹果组培苗热处理对褪绿叶斑病毒、茎沟病毒的脱毒率和影响组培苗脱毒的因素 ,现报道如下。(1)材料和方法　分别从经指示植物和血清酶联免疫检测带有褪绿叶斑病毒、茎沟病毒的国光、金晕、秋富 1号、优良短枝、北斗苹果树正在生长的新梢上取茎尖 ,用 70 %酒精处理 4 0秒 ,再用 0 .1%升汞处理 8分钟 ,用无菌蒸馏水冲洗 3～ 4次 ,接种到外植体培养基MS+6 - BA1.5 mg/ L上 ,茎尖正常分化后 ,移入 MS+6 - BA1.2 mg/ L +IAA0 .3mg/ L +蔗糖 30 g/ L+琼脂 7g/ L的分化培…     

提高草莓茎尖组织培养脱毒效率研究

采用茎尖２次脱毒法，对宝交早生等６个草莓品种茎尖进行组培脱毒，经检测可全部脱除草莓斑驳病毒（ＳＭｏＶ）、草莓轻型黄边病毒（ＳＭＹＥＶ）、草莓镶脉病毒（ＳＶＢＶ）和草莓皱缩病毒（ＳＣｒＶ）。茎尖２次脱毒法，操作简便、易掌握，脱毒率达１００％，分化率达７９％。     

银条茎尖玻璃化法超低温保存及其植株再生

 为长期稳定保存银条种质, 建立了玻璃化法超低温保存其茎尖的技术体系。选择继代4次的 银条无菌壮苗, 5 ℃低温驯化14 d; 剥取5 mm的茎尖, 在含有0.5 mol·L ^{- 1}蔗糖的MS (无Ca^{2 +} ) 液体培养基预培养1 d; 25 ℃条件下经改良MS + 2PVS₂装载20 min; 在- 20 ℃, 95%乙醇浴中以PVS₂脱水处理4h; 更换新鲜的PVS₃后投入液氮, 保存24 h后取出冷冻管在40 ℃水浴中化冻1 min; 以含有1.2 mol·L ^{- 1}蔗糖的改良MS (无Ca^{2 +} ) 溶液洗涤2 次, 每次10 min; 冻存后的茎尖相对存活率超过70%。将冻存后的茎尖转接到再生培养基上, 暗培养20 d后转入正常光照条件下培养, 存活率达63.7%; 继续培养得到正常分化和生长的再生植株, 生根后可移栽成活。     

红蝉花离体培养的初步研究

选取红蝉花〔Mandevillasanderi (Hemsl )Woodsom〕带腋芽的成熟茎段 (顶芽以下第 3～ 5节 )、幼嫩茎段 (顶芽以下第 1～ 2节 )和顶芽作为外植体 ,用自来水冲洗 3～ 5次 ,洗去伤口流出的白色乳浆 ,在无菌条件下先用 70 %的酒精浸泡 2 0s,然后置于 0 1%HgCl2 溶液 (加 3～ 5滴吐温 - 80 )处理一定时间 (成熟茎段 8～ 9min ,幼嫩茎段和顶芽 4～ 5min) ,用无菌水冲洗 6～ 8次 ,每次 3min。消毒后的外植体接种于添加不同植物生长调节剂的MS培养基上进行光照培养。接着进行继代培养和生根培养试验。培养基 pH值 5 8～ 6 0 ,培养温度 (2 4…     

几种草莓优良品种的组培快繁和脱毒苗生产技术研究

以7个草莓优良栽培品种的匍匐茎为起始材料,试验出以MS为基本培养基附加BA 0.5 mg/L诱导草莓匍匐茎芽和茎尖植株再生、增殖、生根的培养基,确立了草莓组培快繁技术方法,同时探讨低成本下草莓试管苗的快繁技术,不仅能快速培养出大量脱毒苗,而且能取得较好的社会和经济效益。     

草莓茎尖组培脱毒和种苗三级繁育体系的建立

草莓常通过无性繁殖为生产提供种苗,而长期使用无性繁殖种苗易使品种退化,病毒感染严重,抗病力减弱,产量、质量、效益锐减,成为生产上迫切需要解决的问题。组织培养(简称组培)技术是草莓脱除病毒的一种最经济有效的途径。专家证明,草莓脱毒苗生长势强,抗病力提高,大果率增加,能增产30%~80%。为此,福建省福州市蔬菜科学研究所从2000年开始进行草莓茎尖组培脱毒研究。经过3年的实践,建立了较为完善的草莓脱毒苗三级繁育体系,产生了显著的社会效益和经济效益。现总结如下:1原原种的获得1·1培养基的配制草莓茎尖组织培养需要配制2种培养基:Ⅰ,…     

蓝药睡莲组织培养外植体消毒方法的研究

以蓝药睡莲的根状茎、根、叶片、叶柄及种子作为外植体,进行消毒试验研究。结果表明:采用根状茎及种子为材料消毒效果较好。根状茎的适宜消毒方法:清洗干净→无菌水冲洗2次→无菌水浸泡震荡30 min→无菌水冲洗1次→0.1%Hg Cl2浸泡20 min→无菌水冲洗1次→5.0%Na Cl O浸泡5 min→无菌水冲洗5次,成功率55.56%;种子的适宜消毒方法:取纱布包种子→无菌水冲洗2次→0.04%Hg Cl2消毒1 min→无菌水冲洗5次,发芽率75.56%。     

“白雪公主”草莓茎尖组培快繁体系研究

为了建立草莓品种"白雪公主"的组织培养快速繁殖体系,取匍匐茎的茎尖为外植体,对MS(蔗糖25g/L,琼脂5.5g/L)添加不同浓度的6-BA和IBA用于诱导培养和增殖培养的效果,对诱导培养前暗处理的作用,对1/2MS(蔗糖20g/L,琼脂5.5g/L)添加IBA(0.5mg/L)用于再生芽生根培养的效果等进行了研究。结果表明,暗处理3d能够促进茎尖萌发,提高萌发速度;MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L为适宜的诱导培养基,诱导率达82%以上;MS+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L为适宜的增殖培养基,增殖系数为8.0;不添加IBA的1/2MS是适宜的生根培养基,培养5d后生根率达100%,平均生根数为10条,平均根长为5.00cm。