柔嫩艾美耳球虫地克珠利抗药株的实验室诱导

采用药物浓度递增法,以0．07mg／L地克珠利为起始诱导浓度连续传代,以最适抗球虫指数（POAA）、病变记分减少率（RLS）和相对卵囊产量（ROP）3项指标综合判定抗药性。经12次传代,该诱导虫株对1．5mg／L地克珠利具有完全抵抗力。试验结果表明,用实验室方法诱导柔嫩艾美耳球虫抗药株完全可行。     

柔嫩艾美球虫地克珠利和马杜拉霉素抗药株与敏感株孢子化卵囊18SrDNA基因的差异

为探讨抗球虫药物地克珠利和马杜拉霉素对柔嫩艾美球虫18SrDNA的影响，分别对人工诱导的柔嫩艾美球虫地克珠利抗药株（ETAD）、马杜拉霉素抗药株（ETAM）和药物敏感株（ETDS）孢子化卵囊的18SrDNA基因进行了克隆测序，并通过生物信息软件进行对比差异分析。结果显示，ETAM株有3个碱基发生突变（T170突变为C，T646突变为C，G694突变为C）；ETAD株有1个碱基发生突变（T646突变为C）。经进一步分析比较，发现ETAM株18SrRNA的二级结构与ETDS株的差异很大，而ETAD株18SrRNA的二级结构则与ETDS株的完全相同。这些碱基的突变有可能是导致E．tenella产生抗药性的原因之一。     

地克珠利抗柔嫩艾美耳球虫凤阳地理株的效果观察

将 60只 1日龄蛋公鸡于无球虫条件下饲养至 30日龄时随机分为 5组 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组 )。Ⅰ组用地克珠利饮水 (每千克水 1mg) ;Ⅱ组地克珠利混饲 (每千克饲料 2mg) ;Ⅲ组为药物对照组 (每千克饲料克球粉 5mg) ;Ⅳ组为感染不给药 ;Ⅴ组为不感染不给药组。于给药当天 ,除Ⅴ组外 ,其他组鸡每只接种 1× 1 0 5个柔嫩艾美耳球虫凤阳地理株孢子化卵囊。根据各组鸡的存活率 ,相对增重率 ,病变记分 ,血便记分和抗球虫指数来观察药物疗效。试验结果表明 ,地克珠利能有效的控制凤阳地理株柔嫩艾美耳球虫。     

柔嫩艾美耳球虫（E，Etenella）马杜拉霉素抗药株和敏感株孢子化卵囊的蛋白质差异分析

利用双向电泳技术，对本实验室诱导保存的柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株与敏感株的蛋白质表达图谱进行差异比较和分析，发现两者之间差异有4个蛋白质斑点，利用MALDI—TOF—TOF质谱技术对3个差异明显的蛋白质斑点进行分析鉴定，获得3个明确的肽质量指纹图谱，通过在NCBInr数据库中检索分析，确定了其中1种蛋白质为球虫子孢子表面抗原TA4。另外2种蛋白质与疟原虫的Pfjl和线粒体转运蛋白受体Tom40具有很高的同源性，上述蛋白的鉴定将对球虫的抗药性产生机理和柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株的分之标志物提供了研究方向。     

马杜霉素与地克珠利联合应用抗鸡柔嫩艾美耳球虫效果试验

鸡球虫病是严重威胁养鸡业的一种寄生原虫病。15～20日龄雏鸡发病率高，死亡率可达80％以上。目前，鸡球虫疫苗在实践中应用效果不是十分理想。因此，采用药物防治球虫病仍是控制本病的主要手段。虽然国内应用的抗球虫药物种类很多，但由于各地虫株的差异和球虫较易产生耐药性，导致球虫病的治疗效果不是十分理想。为防止球虫产生耐药性，较好的办法是定期变换或联合应用作用机理不同的药物，     

13株柔嫩艾美耳球虫分离株对地克珠利及盐霉素耐药情况分析

为了解不同地区球虫对地克珠利(DIC)与盐霉素(SAL)的耐药情况,收集了来自江苏、山东、福建、安徽、河南地区共13个鸡场的球虫样本,对其进行了DIC与SAL的耐药性分析.试验时对每个虫株分别设药物防治组、感染不用药组和空白对照组,以抗球虫指数、病变记分减少率、相对卵囊产量、最适抗球虫活性百分率为指标进行综合评定.结果...     

柔嫩艾美耳球虫抗药性相关基因M20的克隆与表达

利用前期构建的柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株与各自母株之间的抑制性消减文库而获得的ESTs序列,选择其中一个差异表达的EST序列（克隆号为M20）,采用RACE技术,以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA为模板,扩增获得了该基因的全长cDNA序列,命名为M20,该基因全长847 bp,包括一个525 bp的开放阅读框,编码174个氨基酸,预测理论分子量约为19 ku。实时荧光定量PCR结果显示,该基因在敏感株中表达量高于地克珠利抗药株和马杜拉霉素抗药株;在不同发育阶段中,未孢子化卵囊表达量高于孢子化卵囊、子孢子以及裂殖子阶段虫体。将该基因克隆于原核表达质粒pET28b中,构建重组质粒pET28b-M20,转化大肠杆菌BL21（DE3）后,经IPTG诱导表达获得了重组蛋白,分子量约约为23 ku,该蛋白以包涵体形式存在,在IPTG诱导8 h后表达稳定,Western blot检测表明,其具有较好的免疫原性。     

柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)马杜拉霉素抗药株和敏感株孢子化卵囊的蛋白质差异分析

利用双向电泳技术,对本实验室诱导保存的柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株与敏感株的蛋白质表达图谱进行差异比较和分析,发现两者之间差异有4个蛋白质斑点,利用MALDI-TOF-TOF质谱技术对3个差异明显的蛋白质斑点进行分析鉴定,获得3个明确的肽质量指纹图谱,通过在NCBInr数据库中检索分析,确定了其中1种蛋白质为球虫子孢子表面抗原TA4.另外2种蛋白质与疟原虫的Pfj1和线粒体转运蛋白受体Tom40具有很高的同源性,上述蛋白的鉴定将对球虫的抗药性产生机理和柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株的分之标志物提供了研究方向.     

柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药株的实验室诱导

为了研究耐药性柔嫩艾美耳球虫产生耐药性的机理,本研究在实验室条件下,采用药物浓度递增的方法,以15 mg/kg为起始诱导浓度,对柔嫩艾美耳球虫盐霉素耐药性进行诱导.经过10次传代,获得了对60 mg/kg盐霉素耐药的柔嫩艾美耳球虫虫株.以抗球虫指数、最适抗球虫活性百分率、病变记分减少率和相对卵囊产量四项指标综合判定柔嫩...     

柔嫩艾美耳球虫野外分离株对3种化学合成药物的抗药性

取近年分离的６个广东柔嫩艾美耳球虫（Ｅimeria tenella）野外株,以病变记分减少率（ＲＬＳ）和抗球虫指数（ＡＣＩ）作为判断指标,检测了它们对地克珠利、球净和球痢灵的抗药怀。结果发现,５个野外分离株对地克珠利抗药,１个敏感;６个野外分离株均对球痢灵抗药。参考株（ＧＤ株）对地克珠利、于净这２种药物仍很敏感,但对球痢灵部分抗药。     

地克珠利对球虫感染雏鸡血清抗氧化功能的影响

选择120只14日龄雏鸡,随机分为对照组(Ⅰ)、感染组(Ⅱ)和地克珠利组(Ⅲ),每组40只.除Ⅰ组外,其余每只鸡口服感染8.0x104个E.tenella孢子化卵囊,分别于感染后第0、3、6、9、12天,每组随机取鸡5只,心脏采血,对血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量进行测定.结果表明,与Ⅰ组比较,Ⅱ组血清SOD活性在感染后3、6、9 d极显著降低(P《0.01),GSH-Px活性在感染后6 d下降显著(p《0.05),MDA含量和CAT活性均表现不同程度的升降,但差异不显著(p》0.05).在感染高峰期(6 d),Ⅲ组血清SOD、GSH-Px、CAT活性虽然与Ⅱ组的差异未达显著水平,但分别较其提高了7.33%、19.82%和52.08%,MDA含量降低了14.58%,且GSH-Px、CAT活性与MDA含量与Ⅰ组比较差异不显著.提示地克珠利在一定程度上能增强球虫感染鸡的抗氧化能力.     

柔嫩艾美耳球虫癸氧喹酯耐药株的诱导研究

采用药物浓度递增法,在实验室条件下进行柔嫩艾美耳球虫耐药虫株的诱导。以5.4 mg/kg癸氧喹酯为起始诱导浓度连续传代,以病变记分减少率(RLS)、最适抗球虫指数(POAA)和抗球虫指数(ACI)3项指标综合判定耐药性,经9次传代,成功地诱导出对54 mg/kg癸氧喹酯具有完全抵抗力的耐药虫株,为进一步的球虫耐药的分子机理研究提供材料。     

不同地理株柔嫩艾美耳球虫对地克珠利敏感性试验

进行了3个不同地理株的柔嫩艾美耳球虫(吉林株、山东株、黑龙江株)对地克珠利饮水剂的敏感性试验.分别给予试验组鸡1×105个孢子化柔嫩艾美耳球虫卵囊,感染后饮水给予地克珠利药物治疗.结果表明,3株球虫的敏感性不同,其敏感顺序为:山东株＞黑龙江株＞吉林株.由此可见,柔嫩艾美耳球虫不同地理株间存在对地克珠利的敏感性差异.     

尼卡巴嗪对鸡柔嫩艾美耳球虫田间株的敏感性试验

以最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)为指标,检测了尼卡巴嗪对秦皇岛株和唐山株柔嫩艾美耳球虫的敏感性.结果表明,唐山株柔嫩艾美耳球虫对尼卡巴嗪无耐药性,秦皇岛株对其呈轻度耐药性.提示尼卡巴嗪在唐山和秦皇岛地区可以继续合理使用,但应控制用量和使用时间,以...     

柔嫩艾美耳球虫对地克珠利和百球清的交叉耐药性检验

分别采用地克珠利和百球清饮水剂对3株来源和特性不同的柔嫩艾美耳球虫株进行了交叉耐药性检验。结果表明，从未接触过百球清的敏感株和由敏感株诱导而成的地克珠利耐药株均表现出对百球清高度敏感；而曾使用过二种药物的野外分离虫株，则表现出对两种药物高度耐药。由此可见，两种药物并不存在必然的交叉耐药性。     

2株柔嫩艾美耳球虫对5种抗球虫药的抗药性

选择130只21日龄雏鸡，研究了柔嫩艾美耳球虫（E.tenella)南京株和凤阳株对地克珠利（Diclazuril)、马杜霉毒（Maduramicin)、氯羟吡啶（Clopidol)、氯苯胍（Robenidine)和氨丙啉（Amprolium)的抗药性。试验鸡随机分成13组，其中每株球虫均设5个感染用药组，1个感染不用药组，另设1个不感染不用药组，每组10只鸡。以POAA，RLS，ROP，ACI作为指标。结果表明，2株柔嫩艾美耳球虫均对氨丙啉轻度抗药，对地克珠利敏感或轻度抗药，对氯羟吡啶中度抗药。对马杜霉和氯苯胍中度抗药或安全抗药。提示：目前在凤阳地区可合理地使用地克珠利和氨丙啉，对氯羟哟啶应慎用，对马杜霉素和氯苯胍须减少或暂停使用。     

柔嫩艾美耳球虫YL株抗药性研究

用柔嫩艾美耳球虫杨凌株 ( YL t)对 1 4日龄雏鸡进行感染 ,检测了该虫株对 4种常用抗球虫药 (马杜拉霉素、地克珠利、克球粉和氯苯胍 )的敏感性。以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标 ,进行综合评定 ,其抗药程度分为无抗药性、轻度抗药性、中度抗药性和完全抗药性 4个等级。结果表明 ,该虫株对马杜拉霉素有轻度抗药性 ,对地克株利有完全抗药性 ,对克球粉和氯苯胍无抗药性。     

柔嫩艾美耳球虫交叉抗药性试验

以雏鸡为试验对象,以抗球虫指数(ACI)为判断指标,检测5 mg/kg马杜霉素,70 mg/kg盐霉素,1 mg/kg 地克珠利对抗盐霉素株、抗地克珠利株和实验室保存的敏感株的控制效果。结果表明,马杜霉素对3 个虫株都有很好的抑杀效果,地克珠利也可有效地控制抗盐霉素株,同时,盐霉素也可有效地控制抗地克珠利株,说明盐霉素和地克珠利2种药物之间没有交叉抗药性。