气肿疽梭菌致病性试验

前言气肿疽梭菌Clostridium Chauvoei也叫气肿疽杆菌Bacillus Chauvoei,费塞氏梭菌Clostridium feseri,以及Bacillus carbonis,Bacillus anthracis symptoatici等。在Soltys,M.A.的著述中提到,虽然在1782年Charbert已认为气肿疽与炭     

气肿疽梭菌检测方法概述

气肿疽(Clostridium chauvoei infection)病原体为气肿疽梭菌,是一种发生于反刍动物的急性、热性、败血性传染病。常见的典型症状为发病动物肌肉丰满部位发生炎性、气性肿胀,触压有捻发音,该病的流行有一定的地方性、季节性,多发生在潮湿的山谷、牧场,且在天气炎热的多雨季节。近几年常有暴发牛气肿疽的报道,给养殖业的发展带来了巨大的冲击和经济损失,同时也逐渐地威胁到畜牧生产和人类的安全。国内关于该病的研究多数为病例报道,对于该病的详细研究和综述却是少之又少,论文参考国内外相关文献,从方法、原理、优缺点等多个方面阐述气肿疽的检测方法,以期为该病的诊断提供参考。     

气肿疽梭菌毒素的研究

菌株 C_(54)-1在牛肉肝蛋白胨汤中培养,产生的毒素对小白鼠的毒力是在厌气肉肝汤中培养时的10倍.平皿扩散、层析过滤等方法对毒素作定性和定量的分析,证实α、β、γ、δ四种毒素均存在;证明α毒素可分为三种组分;还分离出一种称为ε的新溶血素。明确了毒素毒力和溶血性的关系.试验表明,类毒素免疫,豚鼠能抵抗全培养物的攻毒;体内外抗毒素都能中和毒素的致死性;IgG 是主要的保护抗体.     

气肿疽梭菌免疫学检测方法概述

气肿疽梭菌是一种具有组织毒性、有鞭毛的孢子化革兰氏阳性菌,可引气肿疽这种反刍动物高致死性急性疾病。常见的典型临床症状为发病动物肌肉丰满部位发炎、肿胀,触压可听到类似捻发音,流行呈现一定的季节性,并有区域性流行的特征。牛气肿疽在养殖场中一旦传播流行,往往会伴随巨大的经济损失,所以更加需要加强对该病的防控与诊断。本文整理了气肿疽梭菌的3种免疫学检测方法(间接ELISA、Dot-ELISA、免疫胶体金技术),以供参考。     

气肿疽梭菌延边样的分离鉴定

牛、羊等反刍动物的气肿疽病是由气肿疽梭菌感染引起的严重危害畜牧业发展的一种疾病,本研究从延边州延吉市采集疑似气肿疽梭菌感染的牛肝脏、脾脏、肌肉等组织进行气肿疽梭菌的分离鉴定。结果表明:经病原学检查、生化鉴定、动物试验及分子生物学鉴定,本试验成功对气肿疽梭菌进行了分离,该菌株细胞毒素、cct A基因与Gen Bank上已发表的气肿疽梭菌ATCC 10092菌株的同源性达到99.0%,此结果为该地区气肿疽病的免疫和微生态防治提供了重要的参考依据。     

气肿疽梭菌NanA基因克隆及生物信息学分析

为了对气肿疽梭菌NanA基因进行克隆及生物信息学分析,试验根据GenBank中已发表的气肿疽梭菌NanA基因序列设计并合成1对特异性引物,以气肿疽梭菌总DNA为模板,扩增出NanA目的基因并克隆至pMD18-T载体中,对测序正确的NanA基因进行序列对比分析,对NanA蛋白进行理化性质分析与二级结构预测,同时使用在线软件预测NanA蛋白三级结构。结果表明:成功扩增出气肿疽梭菌Nan A基因,与参考序列相比,共存在3处核苷酸突变,核苷酸序列和氨基酸序列与NCBI公布的JF4135 NanA基因序列的同源性均为99.8%。NanA蛋白分子质量约为71 ku,具有较高的抗原指数,二级结构以β-折叠和无规则卷曲为主,有多个抗原表位区域。     

二重PCR方法鉴别气肿疽梭菌和腐败梭菌

用包含16S～23S rDNA间隔区和23S rDNA的部分序列作为气肿疽梭菌特异性标志,以α毒素部分序列作为腐败梭菌特异性标志,建立了鉴别气肿疽梭菌和腐败梭菌的二重PCR方法。结果显示：气肿疽梭菌C54-1株扩增出大小为509 bp的条带,腐败梭菌C55-1株、C55-16株均扩增出大小为148 bp的条带,均与预期吻合;而产气荚膜梭菌C57-1株、C59-37株,肉毒梭菌C62-4株,诺维梭菌C61-4株均未扩增出任何条带。扩增产物的测序结果进一步证实了本方法的特异性。菌株的生物学特性试验结果也符合相应气肿疽梭菌和腐败梭菌的特点。本研究所建立的二重PCR方法可用于气肿疽梭菌和腐败梭菌的快速鉴定。     

龙胜县牛气肿疽流行病学调查

自1989年10月以来,牛气肿疽在我县呈地方性流行,至1992年6月止有9个乡56个村和一个国营牧场,发病牛1240头,死亡1120头,直接经济损失达31万多元(每头按280元计算)。牛气肿疽的发生,引起我们极大的关注。乃对该病进行流行病学的调查和分析。现报告如下:     

青年奶牛疑似感染气肿疽梭菌一例

1发病情况4月21日,某奶牛小区一青年牛患病,主人求治。现场临床检查:饮食欲废绝,精神沉郁,流涎。体温38.9℃,瘤胃不甚膨满,较实,右侧真胃区下沉,听诊各胃蠕动音均弱,心跳70次/分钟,一音弱,二音较强,呼吸未见明显异常,体况正常。直肠检查在     

一起猪气肿疽梭菌感染病例的诊治

<正>气肿疽是由专性厌氧菌气肿疽梭菌引起的反刍动物急性败血性传染病,然而笔者在防治一起牛气肿疽疫情过程中发现,猪群也可以被气肿疽梭菌所感染,在治疗气肿疽梭菌感染的猪群过程中,采用治疗牛羊气肿疽的方法,同样能够收到良好的治疗效果。1发病情况2013年7月28日,药草坪村委会大槽子村村民李某报告,他家所养的4头牛中,有3头牛发生疾病。笔者立即带领2名技术人员赶到现场。到现场     

融安县牛气肿疽流行情况及其防治

近几年我县流行牛气肿疽病,已成为危害牛只的主要疫病之一。为搞好本病的防治工作,笔者深入调查了解,现将情况报告如下。解放41年来,首次报导我县发生牛气肿疽病是在1954年9月。共有发病史八年,详见下表。     

气肿疽梭菌主要抗原及毒力因子的研究进展

气肿疽梭菌是一种严格厌氧的有芽孢的杆菌,可引起常见反刍家畜组织毒性缺氧,严重可致死,常为畜牧养殖业带来巨大的经济损失。气肿疽对反刍动物的影响存在已久,但其确切发病机制和相关毒力因子的作用仍未能被完全解读。随着研究的深入,已发现气肿疽梭菌的4种主要抗原和毒力因子在气肿疽发病过程中起着重要的作用。本文主要对气肿疽梭菌的4种主要抗原和毒力因子(细胞毒素A、鞭毛蛋白、神经氨酸酶和透明质酸酶)的相关研究进行总结概述,期望能为日后气肿疽检测方法和新型疫苗的研究提供参考。     

气肿疽梭菌致弱培育的研究(气肿疽弱毒菌苗研究第一报)

批林整风运动推动了兽医生物药品战线上科学研究工作的蓬勃发展,本刊前两期刊登的《羊链球菌弱毒菌苗的研究》《干燥猪瘟、丹毒二价苗的试验,试产及试用》和这一期刊登的《气肿疽弱毒菌苗研究》《深层培养无毒炭疽芽胞试验》等试验报告,都展示了我国兽医生物药品生产和科研工作的大好形势。我们热情支持这些工作。但同时也要看到这些新成果,还有一定的不完整性,需要进一步进行试验研究。如这一篇试验研究报告,说明了气肿疽弱毒铝苗对海猪及羊的免疫力很好,但对牛的试验结果很不规律,有的1毫升免疫攻10或20个致死量可以保护,有的攻1.5个致死量,仅保护3/4,似应用牛多作试验,以肯定对牛的最合适免疫量。并进一步试验如何保证菌苗效力的稳定。又该菌种通过动物后的稳定性问题,似亦应进行一些试验。     

免疫注射牛感染气肿疽病的启示

<正>我县在2016年秋防集中免疫时,出现一例因免疫注射操作不规范导致黄牛感染气肿疽,现将该病例介绍如下。1发病情况2016年9月,我县某乡包村防疫员对一农户的两头存栏牛进行臀部口蹄疫疫苗免疫注射,注射疫苗第2天,畜主反应家里的一头牛出现体温升高。精神沉郁,采食减少,同时被注射的后腿出现跛行,通知包村防疫员,包村防疫员因是集中免疫时间,没有认真检查患病牛,按照过敏反应注射肾上腺素,并对症给予促进食欲的复合     

气肿疽梭菌NanA基因核酸疫苗的免疫效果评价

为了检测气肿疽梭菌NanA基因核酸疫苗的免疫效果,在成功构建pVAX1-NanA真核表达重组质粒的基础上将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光鉴定其表达,并将成功构建的pVAX1-NanA质粒大量提取后免疫Balb/c小鼠,设置pVAX1-NanA核酸疫苗组、pVAX1空载体组和PBS对照组。对小鼠采血并分离血清,用ELISA测定血清中的IgG、IgG1、IgG2a抗体水平和IFN-γ、IL-4细胞因子水平;第3次免疫2周后,用流式细胞仪测定小鼠脾脏中的CD4~+和CD8~+T细胞水平。结果表明,pVAX1-NanA核酸疫苗免疫Balb/c小鼠后,小鼠血清中IgG、IgG1、IgG2a的抗体水平极显著高于pVAX1空载体组和PBS对照组(P0.01);IFN-γ和IL-4细胞因子水平极显著高于pVAX1空载体组和PBS对照组(P0.01);CD4~+、CD8~+T细胞分析表明, pVAX1-NanA免疫组的CD4~+和CD8~+T细胞水平显著高于pVAX1组和PBS对照组(P0.05),pVAX1-NanA核酸疫苗组的CD4~+/CD8~+T细胞比值高于pVAX1空载体组与PBS对照组(P0.05),pVAX1空载体组和PBS对照组之间无显著差异(P0.05)。试验成功制备了pVAX1-NanA核酸疫苗,且pVAX1-NanA核酸疫苗可刺激Balb/c小鼠产生体液免疫和细胞免疫。     

气肿疽梭菌PCR检测方法的建立及初步应用

为建立气肿疽梭菌(Clostridium chauvoei)的快速检测方法,根据Gen Bank中已发表的气肿疽梭菌ATCC10092细胞毒素Cct A基因序列(登陆号:JQ692583.1)设计了一对特异性引物,并以气肿疽梭菌标准株C54-1全基因组DNA为模板,对气肿疽梭菌细胞毒素Cct A基因进行PCR扩增,经过敏感性和特异性试验对该试验方法进行验证,并初步应用于临床检测。结果表明:建立的PCR检测方法具有快速、特异、敏感、高效等优点,与其他诊断方法相比更适用于气肿疽梭菌的诊断。     

气肿疽牛出败二联干粉苗初探

我国迄今用于预防牛气肿疽和牛出血性败血病的菌苗都是单价的传统的液体菌苗,而且剂量较大,均为5ml,特别是牛出血性败血病氢氧化铝菌苗,注射后局部形成一个     

气肿疽梭菌C54-1株的制备与检定

为研究气肿疽梭菌C54-1株(CVCC60001)的菌种特性,制备了1批气肿疽梭菌C54-1株,并对菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性、16S rDNA等进行检定,以及对于该菌的适宜培养基促生长能力等方面进行了比较。实验结果表明,该冻干菌种的形态及生化特性、培养特性、血清学特性、真空度、纯粹、剩余水分、毒力及免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版质量标准的规定。16S rDNA鉴定为气肿疽梭菌,相似度为99.93%。在免疫原性检定中,使用致死剂量攻毒时,免疫组能够4/4被保护,证明该菌明矾苗免疫效果良好。使用商品化梭菌培养基对于该菌培养进行了比对,证实商品化培养基替代厌气肉肝汤的可能性。本研究为气肿疽梭菌的制备和检定提供参考依据,并使用不同培养基进行比对研究,为该菌的稳定培养和疫苗工艺改进提供了研究基础。     

气肿疽梭菌CctA全长基因的克隆及生物信息学分析

为了解气肿疽梭菌(Clostridium chauvoei)细胞毒素CctA的生物学功能,参照GenBank中ATCC 10092株序列设计特异性引物,试验采用PCR技术扩增获得CctA基因。通过生物信息学分析软件DNAStar、EXPASY、Signal P、NetPhos Server V.3.1等程序,对CctA基因进行序列分析,并对其编码蛋白质的结构和功能进行预测。结果表明:CctA基因编码317个氨基酸;CctA基因编码蛋白质是一种偏酸性、稳定、亲水性蛋白,无跨膜区域,但存在信号肽,含有4个N-糖基化位点,1个O-糖基化位点,以及多个磷酸化位点,其中二级结构为混合型,无规卷曲最多,有22个优势的B细胞抗原表位。说明CctA基因是气肿疽梭菌的重要毒力因子,为预防黑腿病疫苗的候选抗原,本试验成功克隆CctA基因,并分析了其编码蛋白的特性,为进一步研究气肿疽梭菌CctA基因功能及其重组蛋白提供参考。