脱脂柞蚕蛹蛋白用复合中性蛋白酶水解制备多肽的工艺条件优化试验

利用蛋白酶对脱脂柞蚕蛹蛋白进行酶解制备具有活性的多肽,可以提高柞蚕蛹蛋白的应用价值。为了建立适合工业化应用的脱脂柞蚕蛹蛋白的酶解工艺条件,首先采用单因素试验考察料液质量浓度、复合中性蛋白酶种类与使用浓度、酶解温度和时间4个因素对脱脂柞蚕蛹蛋白水解度的影响,得出较适合的工艺条件是:料液质量浓度60 g/L,3 g/L复合中性蛋白酶中的风味蛋白酶与蚕蛹专用复配蛋白酶按1∶1质量比混合,酶解温度55℃,酶解时间10 h。进一步采用Box-Behnken设计及响应面分析法对工艺条件进行优化,在复合中性蛋白酶质量浓度4.85 g/L、料液质量浓度41 g/L、酶解温度55℃、酶解时间10.66 h的最佳酶解条件下,脱脂柞蚕蛹蛋白的理论水解度为45.82%,实际水解度为45.75%。利用优化的酶解工艺条件制备柞蚕蛹蛋白活性肽,具有酶解效率高、稳定性好、操作简单、生产成本低的特点。     

pH及阳离子浓度对柞蚕蛹蛋白溶解性的影响

对不同pH及阳离子浓度下柞蚕蛹蛋白的溶解性进行了研究。结果表明,柞蚕蛹蛋白的等电点pI为4.2~4.5。测定不同的阳离子对其溶解度的影响顺序为Zn2+>Ca2+>Mg2+>Na+,随着阳离子浓度的增加,蛹蛋白的溶解性增加,当离子浓度超过1.0 mol/L时,其溶解性则降低。     

益生菌发酵制备金针菇抗氧化肽的研究

试验旨在获得高活性的金针菇抗氧化肽,优化益生菌发酵制备金针菇抗氧化肽的条件。试验以金针菇为发酵基质,以抗氧肽对2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）自由基清除率为指标,对枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和黑曲霉3种益生菌进行了筛选,使用pH值沉淀法分离抗氧化肽的最适pH值,采用单因素和响应面试验对发酵条件（液料比、发酵时间、发酵温度、金针菇用量）进行考察。结果显示,枯草芽孢杆菌适合发酵金针菇制备抗氧化肽;沉淀抗氧肽的最适pH值为6;最佳发酵条件为液料比4.50 mL/g、发酵时间30 h、发酵温度35℃、金针菇用量40.00 g,此条件下金针菇抗氧化肽对ABTS自由基清除率预测值为95.60%,实测值为96.75%,实测值与预测值相差很小,表明此响应面法优化的工艺可靠,截留分子量小于3 kD的抗氧肽活性最强。研究表明,通过此法制备的金针菇抗氧肽具有很强的抗氧化性,为金针菇产品的开发利用提供了参考。     

家蝇蛹的营养成分分析及抗氧化肽制备工艺研究

研究着力于分析家蝇蛹的成分,探索比较家蝇蛹抗氧化肽的制备方法,考察酶解法制备抗氧化肽的工艺条件。实验用水提醇沉法(WAM)、热变性法(TDM)和酶解法(EHM)制备得到家蝇蛹抗氧化肽,检测了三种方法制备产物的得率、应用OPA法测得多肽的含量、聚丙烯酰胺凝胶电泳—银染法表征其分子量分布、比较抗氧化肽在五种体外抗氧化体系(ABTS自由基清除、DPPH自由基清除、羟基自由基清除、FRAP法测还原、亚铁离子螯合)中的抗氧化能力;最后通过单因素试验优化酶解法制备工艺。实验结果显示:水提醇沉法、热变性法和酶解法制备抗氧化肽的得率分别是(18.35±0.43)%、(25.11±0.49)%、(70.80±0.36)%;OPA法检测的多肽含量分别为(53.87±2.74)%、(43.33±1.07)%、(66.50±9.02)%;热变性法制备的抗氧化肽的自由基清除能力和还原能力均较强,酶解法制备抗氧化肽的亚铁离子螯合能力最优,而水提醇沉法的各项指标值均较低。单因素实验结果显示,最佳酶解条件为温度60℃、酶解时间30 min、加酶量6 000 U/g。以上结果提示,家蝇蛹营养成分丰富,酶解法和热变性法均能有效制得强抗氧化活性物质,具有开发成饲料或饲料添加剂的潜力。     

复合酶水解乳清蛋白制备抗氧化肽的工艺优化

以乳清蛋白为原料,采用酶法水解,分析酶解温度、pH值、底物浓度和酶底比对复合酶水解乳清蛋白的影响,通过单因素试验确定各因素的最适工艺参数,再通过正交试验及验证实验进一步确定乳清蛋白的最佳酶解条件。结果表明:根据单因素试验结果,并综合考虑水解度、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率和铁离子螯合能力4项指标的正交试验结果,最终确定乳清蛋白的最佳酶解条件为酶解温度60℃、pH 8.5、底物质量浓度2.5 g/100 mL、酶底比3.5％。以上述最佳参数为酶解条件进行验证实验的结果表明,验证实验结果与正交试验结果相符,进一步验证了本研究确定的酶解条件为最佳条件。     

响应面法优化柞蚕蛹多糖的提取工艺及其抑菌活性研究

为确定柞蚕蛹多糖的最佳工艺条件及其抑菌活性,试验将柞蚕蛹作为材料,利用水提取法提取柞蚕蛹多糖,并用滤纸片法检测柞蚕蛹多糖的抑菌活性。结果表明,柞蚕蛹多糖最适宜的提取条件为料液比1∶45 g/mL,时间3.16 h,温度75℃,进行3次重复试验,所得柞蚕蛹多糖平均提取率为1.38%。柞蚕蛹多糖对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠杆菌均有抑制作用,对金黄色葡萄球菌抑制效果最好。 [关键词]柞蚕蛹|多糖|提取|响应面|抑菌     

响应面法优化桑叶黄酮的提取工艺及提取物抗氧化性能的研究

为了给桑叶黄酮作为天然抗氧化剂开发提供参考依据,试验以桑叶为研究对象,通过单因素试验分析了超声波辅助、提取时间、提取温度、料液比以及乙醇浓度对桑叶黄酮提取率的影响,利用响应面法优化了桑叶黄酮提取工艺,并结合1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除试验评估了提取物的抗氧化性能。结果表明:超声波辅助能够显著提高桑叶黄酮提取率(P<0.05);响应面模型得到的提取条件为乙醇浓度54.75%、提取时间17.61 min、料液比1:30.24(g/m L)、温度50.27℃,此时桑叶黄酮提取率最高为3.64%;实际测得提取时间17 min、提取温度50℃、料液比1:30(g/m L)、乙醇浓度55%的条件下桑叶黄酮提取率为3.62%,与理论值相对偏差为0.55%,且该条件下提取物DPPH自由基清除活性为99.12%。     

母乳乳清蛋白抗氧化活性肽的研究

母乳是婴幼儿的最佳食物来源,而乳清蛋白是营养和活性物质的基础,其中生物活性肽对人体健康具有重要促进作用.为研究母乳乳清蛋白抗氧化活性肽,采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶4种酶制备抗氧化活性多肽,通过单因素试验和响应面分析对乳清蛋白酶解工艺进行优化.结果表明:中性蛋白酶最适于母乳乳清蛋白抗氧化肽的制备,此时的最佳工艺参数为pH 7.21、反应温度50.03℃、酶与底物比(E/S)4 486.68 U/g、酶解时间5h;影响1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率的因素大小为:酶与底物比＞温度＞pH值.利用大孔树脂、葡聚糖凝胶过滤色谱G-25、G-15分析得出组分峰Ⅰ抗氧化活性最强,其DPPH自由基清除率达到了60.31％.     

响应面法优化党参多糖提取工艺及抗氧化活性研究

为探究党参多糖最优提取工艺并研究其体外抗氧化活性,以党参多糖提取率为响应值,以提取时间、提取温度和料液比3个因素为自变量,通过Box-Benhnken中心组合法设计3因素3水平试验方案优化提取工艺,并通过DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力和还原力测定考察党参多糖的抗氧化活性.结果:最佳提取工艺条件为:提取时间2...     

鹿血抗氧化肽不同分子量肽段抗氧化活性的研究

采用超滤法分离鹿血抗氧化肽提取液,得到了4种不同分子质量的鹿血抗氧化肽。通过不同肽段清除DPPH自由基、亚铁还原能力和氨基酸含量的测定,得出分子质量3 ku肽段抗氧化性最强,其具有抗氧化能力的氨基酸含量最高。     

一株高效降解蚕蛹蛋白的菌株筛选与初步鉴定

筛选、鉴定能高效降解缫丝蚕蛹蛋白的菌株,用于提高缫丝蚕蛹生产食品和动物饲料的营养价值。从蚕蛹储藏车间及周围的土壤中收集细菌,经富集培养、干酪素平板初筛和发酵蚕蛹蛋白复筛,获得一株产蛋白酶活性较高的菌株,命名为CY21。该菌株在32℃、pH 7.0条件下培养60 h后所产蛋白酶的比活力可达到272.7 U/mg。通过形态学观察、经典生理生化试验以及16S rDNA序列系统发育分析,初步确定该菌株为芽孢杆菌属(Bacillus)与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)亲缘关系很近的一个菌株。     

蚕蛹油成分及提取工艺研究进展

蚕蛹油脂含量丰富,具有多种药理作用。介绍了超临界CO2萃取蚕蛹油,并进一步提取不饱和脂肪酸以及α-亚麻酸的工艺研究概况。蚕蛹油功能性成分提取工艺的改进,对蚕蛹综合利用具有重要意义。     

不同水平蛋白质底物对猪结肠微生物体外发酵特性和菌体合成能力的影响

本试验旨在体外条件下,探究不同水平蛋白质底物对猪结肠微生物发酵特性的影响,了解猪结肠微生物对蛋白质的利用规律。以成年猪结肠内容物为微生物接种物,在结肠微生物发酵液中分别添加0(C组)、0.10(L组)、0.25 g/L(H组)酪蛋白水解物,厌氧发酵不同时间点(3、6、9、12、18、24 h),分别测定累积产气量、p H及微生物蛋白、氨态氮、挥发性脂肪酸浓度。结果显示:1)发酵3、6 h时,L组和H组p H显著低于C组(P0.05)。2)L组和H组累积产气量均高于C组。3)L组和H组各时间点微生物蛋白浓度均显著高于C组(P0.05),6 h时H组又显著高于L组(P0.05)。3)L组和H组各时间点氨态氮浓度均显著高于C组(P0.05)。4)短链脂肪酸和支链脂肪酸浓度随着发酵时间延长而增加,同时随着蛋白质水平增加而增加。由此可见,蛋白质底物的添加促进了肠道微生物菌体合成,但是过多的蛋白质底物水平并不能进一步提高微生物蛋白浓度;随着蛋白质水平增加,肠道微生物发酵特性进一步提高。     

酶解蚕蛹蛋白制备血管紧张素转换酶抑制肽的工艺优化

采用碱性蛋白酶水解蚕蛹蛋白,制备血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)抑制肽,是蚕蛹蛋白深度开发的途径之一。以ACE抑制率为响应值,用响应面分析法研究酶解温度、酶解pH和加酶量等因素对酶解产物的ACE抑制活性的影响,优化制备工艺。结果表明,各因素对制备ACE抑制肽的活性影响程度由大到小依次为酶解pH、酶解温度、加酶量。获得碱性蛋白酶水解蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为:酶解温度50.8℃,酶解pH 9.0,加酶量3 500 U/g。在此条件下,蚕蛹蛋白酶解产物对ACE的理论抑制率最高可达96.67%,验证值为96.49%±1.75%,IC50值为0.102 mg/mL,预测模型可靠性高,可应用于蚕蛹ACE抑制肽的酶法制备。     

蚕沙和稻秸不同比例组合对瘤胃微生物体外发酵的组合效应

本文采用瘤胃微生物体外发酵法研究了不同比例蚕沙(SE)和稻秸(RS)的组合效应。试验将SE:RS设计为100∶0(SE100组)、80∶20(SE80组)、60∶40(SE60组)、40∶60(SE40组)、20∶80(SE20组)、0∶100(SE0组)的比例,分别进行体外发酵批次培养24 h和体外发酵产气培养72 h,测定产气参数和发酵特性指标。结果表明:1)SE100组理论最大产气量显著高于其他各组(P<0.05),SE80组的24和72 h累积产气量显著高于其他组(P<0.05)。2)24 h时培养液总挥发性脂肪酸浓度为SE80组>SE100组>SE60组>SE40组>SE0组>SE20组,乙酸/丙酸为SE80组SE100组>SE60组>SE80组>SE40组>SE0组。4)随着蚕沙比例的升高,底物体外有机物消化率越高。5)SE80组多项指标组合效应指数为0.76,SE80组>SE40组>SE60组>SE20组。蚕沙和稻秸组合改善了体外瘤胃微生物发酵特性和产气参数,且蚕沙和稻秸的最佳比例为80∶20。     

瘤胃能氮同步释放对奶牛微生物蛋白合成和瘤胃发酵的影响

本研究通过体外产气试验,研究瘤胃能氮同步释放对微生物蛋白合成和瘤胃发酵的影响。试验选用4头健康、泌乳中期的荷斯坦奶牛作为瘤胃液供体动物,采用单因子试验设计,设置3种不同能氮同步化指数的等能、等氮日粮(日粮A,SI=0.74;日粮B,SI=0.83;日粮C,SI=0.91)。结果表明,随着日粮SI值增加,微生物蛋白合成量显著增加(P<0.05)、氨氮浓度在8和12 h极显著下降(P<0.01);A组与B组相比,在8 h时,产气量、pH达到了显著或极显著差异(P<0.05;P<0.01),12 h时,挥发性脂肪酸含量达到了极显著差异(P<0.01)。结果显示,日粮能氮同步释放可显著影响瘤胃微生物蛋白的合成量和氨氮浓度。     

不同代谢葡萄糖水平对绵羊人工瘤胃发酵特性、微生物蛋白质浓度和产气参数的影响

本试验旨在通过人工瘤胃体外培养,研究不同代谢葡萄糖水平下的绵羊瘤胃发酵特性、微生物蛋白质浓度和产气参数。采用单因子试验设计,共设计4个代谢葡萄糖水平[125(A)、138(B)、153(C)、168 g/kg(D)]。体外试验所用瘤胃液采自4只安装有永久性瘤胃瘘管的绵羊。分别于培养0、2、4、6、8、12、24 h采集2 mL培养液用于分析。结果表明:1)8~24 h培养液pH随着代谢葡萄糖水平的提高而出现显著或极显著下降(P0.05或P0.01);氨氮浓度在2 h时D组显著高于A组(P0.05),而在6 h时A组显著高于其他3组(P0.05)。2)D组6h培养液细菌蛋白浓度显著高于A组(P0.05);随着代谢葡萄糖水平的提高,培养液丙酸、丁酸、总挥发性脂肪酸的浓度总体呈升高趋势,乙酸/丙酸呈下降趋势。3)随着代谢葡萄糖水平的提高,理论最大产气量极显著降低(P0.01),达1/2理论最大产气量的时间极显著缩短(P0.01);潜在产气量无显著变化(P0.05),24 h产气量和产气速率常数分别显著或极显著下降和上升(P0.05或P0.01)。结果提示,提高代谢葡萄糖水平,可以提高丙酸、总挥发性脂肪酸的浓度,同时可为绵羊提供较多的生糖前体物质。     

发酵蚕蛹豆粕粉替换鱼粉对断奶仔猪生长性能、血清生化指标及器官指数的影响

本试验旨在研究发酵蚕蛹豆粕粉替换鱼粉对断奶仔猪生长性能、血清生化指标及器官指数的影响,及确定其适宜的替换水平。选用120头(28±1)日龄断奶、初始体重为(7.64±0.67)kg的健康"杜×长×大"三元杂交仔猪,分为4组,每组3个重复,每个重复10头猪。对照组饲喂基础饲粮,3个试验组分别用发酵蚕蛹豆粕粉替换基础饲粮中25%、50%、100%的鱼粉。预试期3 d,正试期21 d。结果表明:1)各组试验全期平均日增重、平均日采食量(ADFI)、料重比均差异不显著(P0.05),但对照组第1周ADFI显著高于25%替换组(P0.05),50%、100%替换组第2周ADFI显著高于25%替换组(P0.05)。2)25%替换组血清总胆固醇含量显著高于对照组(P0.05),25%替换组血清高密度脂蛋白胆固醇含量显著高于对照组和50%替换组(P0.05),25%替换组血清载脂蛋白B含量显著高于50%替换组(P0.05),对照组血清总蛋白含量显著高于50%替换组和100%替换组(P0.05)。3)各组腹泻率、器官指数、血清免疫球蛋白含量均差异不显著(P0.05)。综合各项指标,发酵蚕蛹豆粕粉可替代饲粮中25%的鱼粉,而不影响断奶仔猪的生长性能。