鸡传染性喉气管炎病毒疫苗株gB基因的克隆与序列测定

根据国外已发表的鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因序列，设计了一对引物并以ILTV基因组为模板，经PCR特异性扩增出ILTV疫苗株的gB基因，基因产物大小为2．62kb，与设计相符，并对其进行了序列测定。     

第46代鸡贫血病病毒细胞凋亡素基因的体外扩增、克隆、序列比较

通过聚合酶链式反应（PCR）扩增了第46代鸡贫血病病毒（CAV）Cux株的细胞凋亡素（Appoptin)基因，并克隆入pGEX－5X－3质粒载体中，通过限制性内切酶分析、序列测定，验证了克隆的正确性。细胞凋亡素基因全长为363bp，编码121个氨基酸。与Meehan.等发表的CAV Cux株序列相比，第46代细胞适应毒的细胞素基因的第209个核苷酸由C→T，与澳大利亚株，美国株CVA序列分别有5个和2个碱基的差别，并且均匀分布在5'端前210碱基区，而在3'端序列较为保守。与同处欧洲的英国株CAV序列相比，序列较为一致，本研究对所克隆的凋亡素编码蛋白进行了疏水性分析和抗原表位优势分析。     

鸡传染性贫血病毒广西株全基因组的克隆与序列分析

为了解鸡传染性贫血病毒(CIAV)广西分离株全基因变异情况,设计3对特异性引物,对CIAV广西分离株(GXC060821)的全基因进行PCR扩增、克隆和序列分析.结果显示,广西分离株的全基因为2 292个核苷酸,含有3个互相重叠的开放阅读框(ORF).序列分析表明,本CIAV分离株与国内外其他31个CIAV毒株比较核苷...     

鸡传染性支气管炎病毒T株核衣壳蛋白基因(N)的克隆及序列测定

根据IBV病毒已报道基因序列设计了一对用于扩增鸡传染性支气管炎病毒T株核衣壳蛋白基因（N）的引物，经RT－PCR得到了预期大小的扩增产物；将目的的条带纯伦并回收以后，克隆到pMD18－T质粒载体中，对插入片段进行序列测定，并与已发表的IBVN基因序列进行了比较和分析，表明具有高度相似性。证明我们克隆了IBVT株的N基因。     

鸡传染性支气管炎病毒国内分离株核蛋白基因的克隆与序列分析

本研究参考已发表的鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因序列，设计了一对核蛋白基因的特异性引物NP5、6，经RT-PCR扩增得到了IBV国内分离株DB株、XJ株、DC株、HD株的1199bp的核蛋白基因片段，并进行了克隆和序列测定。将4个国内分离株核蛋白基因的序列与国外发表的参考毒株的核蛋白基因序列进行了比较和分析，结果显示这4个毒株与澳大利亚群的参考毒株亲缘关系最为密切，核苷酸序列同源性86%-91%。其中DC株发生了较大程度的变异。国内分离株核蛋白基因核苷酸的变异引起了蛋白质二级结构的部分改变。     

鸡传染性支气管炎病毒SX-H09株膜蛋白基因的克隆及序列分析

对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)陕西分离株SX-H09株膜蛋白(M)基因进行克隆和序列分析.根据GenBank发表的IBV基因序列设计1对特异性引物,RT-PCR扩增IBV M基因片段,并进行克隆、序列测定和分析.结果表明,SX-H09株M基因全长为678 bp,编码225个氨基酸.同源性比较可知,SX-H09株M基因...     

嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒W93疫苗株S1基因的克隆与序列测定

根据国外已发表的鸡传染性支气管炎病毒（IBV）S1基因序列，设计了两对引物并以RT－PCR特异性扩增出嗜肾型IBV W93疫苗株的S1基因，基因产物大小为1.62kb，与设计相符，对其进行序列测定后，与标准毒株H52、H120、M41、BEAU株的S1基因进行同源性比较，结果表明，W93株与H52、H120、M41和BEAU株的核苷酸序列的同源性分别为96．8％、97．1％、96．9％和96．8％，由此可以看出嗜肾型IBV W93疫苗株与标准毒株在S1基因上具有高度的同源性。     

鸡传染性支气管炎病毒HN99株S1基因的克隆与序列测定

根据基因库中收录的鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)S1基因的序列 ,设计了一对引物并采用RT -PCR扩增了鸡传染性支气管炎病毒HN99株的S1基因 ,扩增产物进行了克隆、测序 ,获得了IBVHN99株S1基因片段 ,其大小为1 739bp(含前导序列 ) ,其核苷酸序列与H1 2 0、H52、M41、Gray、Holte的S1基因核苷酸序列同源性较低 ,分别为 79.1 %,79.2 %,77.3%,77.8%,79 .4%,有大量的点突变并伴有基因插入和缺失 ;IBVHN99株的S1基因推导的氨基酸与H1 2 0、H52、M41、Gray、Holte株氨基酸的同源性分别为80 .1 %,79.9%,79.5%,78.5%,78.5%,经S1基因系统进化分析 ,提示IBVHN99株与其它各毒株的亲缘关系较远 ,初步证实IBVHN99株为一新的IBV毒株     

鸡传染性喉气管炎病毒王岗株gE基因的克隆及序列分析

根据鸡传染性喉气管炎病毒（AILTV）美国农业部（USDA）标准毒株的基因序列，在ALITV gE基因起始密码子上游和终止密码子下游设计了1对引物pAL1和pAL2。以AILTV王岗株DNA为模板，进行PCR扩增，得到约1.5kb的片段，经酶切鉴定为AILTV gE基因。将此PCR产物与pUC19质粒载体用限制性内切酶Pst I消化、连接，转化JM83大肠埃希氏菌感受态细胞，用限制性内切酶酶切和PCR方法鉴定阳性重组质粒pRHE。对其进行测序后，与AILTV USDA标准攻毒株的gE基因序列进行比较，发现其核苷酸同源性为99．5％，所编码氨基酸的同源性为99．2％。     

3 株鸡传染性喉气管炎病毒TK基因的克隆与序列分析

鸡接种传染性喉气管炎病毒（ILTV）弱毒疫苗是预防传染性喉气管炎（ILT）的主要措施,但由于目前使用的弱毒疫苗对雏鸡仍有一定毒力,可引起潜伏性感染及疫情扩散,毒力易于返强,强弱毒无法鉴别诊断等不足,因而缺失毒力基因而保留抗原性的基因工程疫苗等新型ILT疫苗的研制势在必行。研究表明,TK基因是疱疹病毒增殖非必需基因和主要的毒力基因,在神经组织感染与潜伏性感染中具有重要作用。利用基因技术敲除掉病毒的TK基因,可使病毒毒力下降,但不改变其免疫原性,     

鸡贫血病毒哈尔滨分离株VP2基因克隆测序和比较

通过PCR方法克隆了从我国哈尔滨分离的一株鸡贫血病毒（CAV）的VP2基因，并对之进行了测序，该基因的开放读码框由65bp组成，编码216个氨基酸。通过将本次克隆的基因与GenBank收录的CAV的VP2基因比较，同源性至少为99％，未发现与本次克隆的VP2蛋白完全一致的CAV分离株，与之同源性最好的是CIA－1的VP2蛋白，相差1个氨基酸，与Cux-1也仅相差2个氨基酸，因此从该蛋白看CAV哈尔滨分离株的变异程度不很高。比较这27株病毒的VP2及其基因序列，发现共有31处核苷酸发生变异，这些变异将导致VP2的12个氨基酸变化，尽管他们散布于整个VP2，但在186到191号氨基酸区域存在一个没有报道过的变异程度相对较高的区域，CAV的VP2是相对较保守的蛋白。     

鸡传染性贫血病毒诱导细胞凋亡的研究进展

鸡传染性贫血病毒是鸡传染性贫血病的病原体,能引起雏鸡贫血、淋巴组织萎缩、出血及免疫抑制,是导致许多疫苗免疫失败及雏鸡死亡的主要原因之一。该病毒在世界范围内广泛存在,是养鸡业潜在的巨大威胁。近年来的研究表明,鸡传染性贫血病毒主要是通过其编码的凋亡素诱导雏鸡胸腺和骨髓中的造血祖细胞凋亡而致病的,而凋亡素诱导细胞凋亡的能力与其在细胞中的核定位及半胱氨酸蛋白酶(caspase)等因素密切有关。文章就鸡传染性贫血病毒生物学特征、诱导细胞凋亡的现象及机制的研究进行了综述。     

马传染性贫血病毒第19、26代驴胎皮肤细胞弱毒前病毒DNA全基因序列分析

不同代次马传染性贫血驴胎皮肤细胞弱毒(Fetal donkey dermal virus,FDDV)的免疫保护效果各不相同,只有第10～15代驴胎皮肤细胞弱毒具有良好的免疫保护效果,可作为疫苗使用,继续传代则疫苗的保护率下降。为确定有、无免疫保护效果的FDDV在基因水平上的差异,本实验对无免疫保护效果的第19、26代驴胎皮肤细胞弱毒前病毒DNA进行了全基因序列测定,并与已测序的疫苗毒株进行序列比较。第19代和第26代FDDV全基因核苷酸序列同源性高达99.5%,与疫苗毒株全基因核苷酸序列的同源性分别为96.9%、96.7%。LTR是EIAV在细胞传代中变异最显著的区域,第19、26代FDDV的LTR与疫苗毒的LTR同源性仅为89.6%、89.3%。马传贫病毒的gag基因高度保守,第19、26代FDDV与疫苗毒株的gag基因推导氨基酸序列仅有2个氨基酸不同。第19、26代FDDV与疫苗毒株的pol基因、env基因的推导氨基酸序列的同源性分别为98.9%、98.8%、93.7%、93.6%。由序列比较结果可以推断,第19代、第26代FDDV不具有免疫保护效果的主要原因可能是由于LTR和env基因的变异,导致病毒复制能力下降或免疫原性丧失,不能诱导机体产生良好的免疫反应。     

鸡传染性贫血病毒vp3基因的原核表达及其免疫学活性分析

将鸡传染性贫血病毒(CIAV)Vp3基因克隆入表达载体pET-28a中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,vp3基因以融合蛋白的形式高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白分子量约为18Ku。Westernblot分析表明,该蛋白可与CIAV阳性血清特异性反应。     

鸡传染性贫血病毒VP1基因的克隆表达及抗原性分析

参考已发表的鸡传染性贫血病毒（CIAV）VP1基因序列，设计并合成了2对引物，经PCR扩增获得了2个基因片段。将PCR产物克隆至pGEM—T Easy载体中，成功构建了克隆载体pGEM—CIAVVP1A和pGEM—CIAVVP1B。将上述重组质粒和原核表达载体pMXB10分别用NdPⅠ＋EcoRⅠ、NdeⅠ十X^0I双酶切，并将纯化的2个基因亚克隆至pMXB10中，构建出原核表达载体pMXB10-VP1A和pMXB10-VPIB。在0．3mmol／L IPTG诱导下，目的基因在大肠杆菌ER2566中以分泌型得到了大量表达。Western—blot分析发现，表达蛋白具有CIAV抗原性。表达蛋白经纯化后作为包被抗原，用间接ELISA鉴定，与CIAV阳性血清均能发生特异性反应。2组蛋白免疫SPF鸡后，用全病毒ELISA试剂盒检测血清呈阳性，表明2组蛋白均可诱发机体产生抗CIAV的抗体。     

传染性法氏囊病病毒Gt株基因组A节段的克隆和序列分析

利用SPF鸡胚对鸡传染性法氏囊病超强毒vvIBDV-Gx株进行培育,通过鸡胚成纤维细胞对病毒进行传代致弱,使其成为弱毒株IBDV-Gt.从细胞适应毒中提取病毒dsRNA,通过反转录,使用Long-accurate PCR(LA-PCR)用一对引物一步直接扩增IBDV-Gt基因组A节段全长cDNA的方法,得到一约3.30kb的片段.测序结果证明已获得3255bp的A节段全长,对vvIBDV-Gx株和IBDV-Gt株的全部核苷酸及推导的氨基酸序列进行分析,结果表明IBDV-Gt株与国内外数株IBDV弱毒株的同源性在99%以上.     

鸡传染性贫血病毒的分子生物学及其核酸检测技术

鸡传染性贫血 (CIA)是鸡的重要的免疫抑制性疾病之一 ,以引起雏鸡再生障碍性贫血和全身淋巴组织萎缩为主要特征。鸡传染性贫血病毒 (CIAV)主要引起鸡骨髓成红细胞和胸腺皮质的成淋巴细胞溶细胞感染 ,继而导致贫血和免疫抑制。该病毒在世界范围内广泛存在 ,是养鸡业潜藏的巨大威胁。文章从 CIA的危害、基本控制方法、病原的基因组及其所编码的蛋白质的功能、疾病的诊断等方面的最新进展进行了综述 ,重点介绍了病原的分子生物学研究进展及其核酸检测技术 ,并对 CIAV的研究前景进行了展望     

鸡传染性贫血病毒VP2基因在真核细胞中的表达以及对宿主细胞增殖的影响

鸡传染性贫血是危害养禽业的重要疫病之一,其病原体是鸡传染性贫血病毒(CIAV)。该病原广泛存在于世界各地,是危害养禽业的主要病原。VP2是该病毒的重要非结构蛋白,其对宿主细胞的确切作用还不十分清楚。本文通过PCR从病毒DNA中扩增出VP2基因并将VP2基因亚克隆到真核表达载体pcDNA4.0。将重组质粒转染至BHK细胞,经Western-blotting证实,转染的真核细胞能表达VP2蛋白并具有良好的抗原性。pcDNA4.0-VP2转染293T或BHK细胞后,与对照组(空载体转染细胞以及未转染的细胞)相比,VP2超表达对这两种细胞的增殖没有影响。该结果表明鸡传染性贫血病毒的VP2基因不影响宿主细胞的增殖。     

1株鸡传染性贫血病毒野毒株对不同日龄SPF鸡的致病性

从山东省某商品代肉鸡场表现生长迟缓的20日龄病鸡群分离到1株鸡传染性贫血病毒(CAV)SDLY08株,通过口服和肌肉注射2种途径分别感染1,7,21日龄SPF鸡,12d后检测CAV对SPF鸡体质量、免疫器官和血液指标的影响。结果表明,于3个不同日龄感染后12d,SDLY08株均可导致增重减缓,胸腺显著萎缩,脾脏肿大,同时还可引起白细胞、红细胞数及红细胞压积的显著减少。且1日龄和7日龄鸡易感性大于21日龄鸡,肌肉注射比口服感染组的致病性更强。