拮抗灰霉病菌的芽孢杆菌筛选、鉴定及其代谢产物抑菌效果研究

筛选获得对灰霉病菌具有抑制活性的芽孢杆菌菌株,明确其胞外抑菌物质的活性及稳定性,为灰霉病提供安全、高效、易行的生物防治方式,并为其后续生防制剂的研发提供科学依据。采集我国云南、黑龙江、新疆、河北等地蔬菜种植土壤样品129个,采用稀释涂平板法分离获得芽孢杆菌4 200株,采用平板对峙法获得191株具有灰葡萄孢菌拮抗性能的菌株,其中菌株KA4的抑菌能力最强,对灰霉病菌的抑菌率为65.34%。采用形态学、生理生化特征以及16S rDNA和gyrB基因序列分析相结合的鉴定方法进行了KA4菌株的鉴定,将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌,命名为BA-KA4。BA-KA4的无菌发酵液具有较强的抑菌活性,稀释10,20,40倍的无菌发酵液对灰葡萄孢菌的抑菌率分别为78.83%,65.19%,45.38%。通过单因素法测定了不同处理温度、pH值和紫外照射时间对BA-KA4无菌发酵液抑菌活性的影响,该菌株的无菌发酵液具有良好的温度、pH和紫外线稳定性。综上,解淀粉芽孢杆菌BA-KA4能够抑制灰霉病菌生长、胞外抑菌物质活性稳定,可作为灰霉病生物防治的优良微生物资源,具有良好的开发前景。     

不同授粉品种对库车白杏坐果及果实生长发育的影响

本试验以7个新疆优良杏树品种为试验材料,通过6个不同授粉品种对库车白杏授粉后的坐果率进行调查和观测果实生长发育情况,结果显示:6个不同授粉品种对库车白杏授粉后杂交当代的坐果率影响明显,与库车白杏杂交的当代坐果率由高到低的授粉品种依次为:克孜朗、毛拉肖、旦杏、库尔勒托拥、轮台白杏、乔尔胖;杂交当代果实的生长呈"双S"成长...     

提高大樱桃坐果率的技术措施

1．合理配置授粉树建园时,品种的选择非常重要,应根据主栽品种合理配置授粉树,要求品种间花期相遇能互相传粉。一般主栽品种与授粉品种的比例为3：2,授粉品种最好有3～4个,株行距以3米×4米较好。目前,适宜栽培的大樱桃品种有红灯、岱红、美早、先锋、拉宾斯、黑珍珠、布鲁克斯、雷尼尔等。     

人工授粉对提高红富士苹果坐果率效果的调查

陕西省自水县是国内外专家公认的苹果最佳优生区之一,目前苹果种植面积已达50余万亩。然而,近年来苹果花期遭遇低温的现象时有发生,加之60％～70％的果园缺乏授粉品种或授粉品种比例不足,对苹果坐果及产量、质量都产生了极为不利的影响。为了解决苹果的授粉问题,2009年我们开展了不同人工授粉措施对提高坐果率效果的调查,现将结果总结如下：     

辣椒内生菌的分离及拮抗菌的筛选与鉴定

用稀释分离法从健康辣椒植株的茎、叶、果肉中共分离得到植物内生菌88株,其中细菌有65株,真菌有21株,放线菌2株。用平板对峙法从中筛选出内生菌003和X两株对辣椒疫霉病菌、辣椒绿霉病菌、辣椒炭疽病菌3种病原菌具有明显拮抗作用的菌株,得出抑制率为34.80%～48.0%。根据菌株形态、生理生化特性对菌株003和菌株X进行了初步鉴定,结果显示菌株003和菌株X都为芽孢杆菌属(Bacillus)。     

小麦白粉菌拮抗真菌的筛选、鉴定及生防效果

从小麦茎叶组织中分离内生真菌,为小麦白粉病的生物防治提供新途径。通过小麦白粉菌的孢子萌发抑制实验,共得到4株对小麦白粉菌孢子萌发抑制效果较好的菌株,抑制率分别达到86.07%、83.11%、91.14%和96.23%。利用小麦离体叶段白粉病害防治试验测定不同拮抗菌株的发酵液防治效果,根据白粉病病情鉴定的6级分类标准鉴定小麦病级,并计算病情指数和防治效果。其中拮抗菌株BF11和BF19处理后,小麦白粉病病情有所减轻,防治效果分别为:82.14%和88.49%。形态学初步鉴定结果表明,BF11为镰孢霉属(Fusarium sp.)真菌,BF19为曲霉属(Aspergillus sp.)真菌。研究得到的内生真菌BF11和BF19可为生防菌剂的开发提供有益资源。     

辣椒内生菌的分离及拮抗菌的筛选与鉴定

用稀释分离法从健康辣椒植株的茎、叶、果肉中共分离得到植物内生菌88株,其中细菌有65株,真菌有21株,放线菌2株.用平板对峙法从中筛选出内生菌003和X两株对辣椒疫霉病菌、辣椒绿霉病菌、辣椒炭疽病菌3种病原菌具有明显拮抗作用的菌株,得出抑制率为34.80％～48.0％.根据菌株形态、生理生化特性对菌株003和菌株X进行了初步鉴定,结果显示菌株003和菌株X都为芽孢杆菌属(Bacillus).     

苹果采后病害拮抗菌的筛选及鉴定

从陕西各主要苹果产区的苹果植株、果实表面及果园土壤中分离得到211株酵母菌和235株细菌,采用in vivo筛选与in vitro筛选相结合的方法发现,菌株A33对于干腐病（Fusarium oxysporum）、早疫病（Alternaria solani）及拓展青霉（Penicillium expartsum）多种苹果采后真菌病害具有显著拮抗效果。根据其形态特征和生理生化特性以及16SrRNA序列的同源性分析,确认该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis）。试验证明,该菌株能够在宿主表面实现有效定殖,具有良好的应用开发潜力。     

苹果腐烂病病原菌的鉴定及拮抗菌筛选

苹果腐烂病是造成华北地区苹果树主要病害之一,爆发时造成苹果树大面积死亡。为开展苹果腐烂病生物防治,本研究从山西阳泉市盂县苹果种植基地的感病植株采集组织样品,利用组织分离的手段获得目标菌株1个,编号为SX1408。采用分子生物学手段,以真菌ITS1和ITS4区通用引物扩增得到ITS区部分序列(Gen Bank登录号KR007599),经Blast和MEGA 5.0聚类分析后,将该菌株鉴定为苹果黑腐皮壳菌(Valsa mali Miyabe et Yamada)。进一步采用平板对峙培养法,从实验室保存的19株供试的生防放线菌中筛选出4株对SX1408有抑菌活性的拮抗菌,其中以BUAS13-3菌株的拮抗效果最佳,抑菌圈直径为2.80 cm,抑制率78%。研究结果将为苹果腐烂病菌的生物防治提供新的生防资源。     

小麦白粉菌拮抗真菌的筛选、鉴定及生防效果研究

从小麦茎叶组织中分离内生真菌,通过小麦白粉菌的孢子萌发抑制实验,共得到4株对小麦白粉菌孢子萌发抑制效果较好的菌株,抑制率分别达到86.08%、83.12%、91.14%和96.23%。利用小麦离体叶段白粉病害防治试验测定不同拮抗菌株的发酵液防治效果,根据白粉病病情鉴定的6级分类标准鉴定小麦病级,并计算病情指数和防治效果。其中拮抗菌株BF11和BF19处理后,小麦白粉病病情有所减轻,防治效果分别为：82.14%和88.49%。形态学初步鉴定结果表明,BF11为镰孢霉属（Fusarium sp.）真菌,BF19为曲霉属（Aspergillus sp.）真菌。     

柑橘绿霉病菌拮抗放线菌MY-5的筛选与鉴定

从广东省各地区水果园和蔬菜地采集土壤23份,采用稀释平板法分离获得放线菌212株。以柑橘绿霉病菌为目标菌,采用抑菌带测定法,筛选获得9株具有拮抗活性的菌株,其中菌株MY-5拮抗活性最强,抑菌带宽达18.67mm,同时对其它13种果蔬采后病害也有较强的拮抗作用。通过对菌株MY-5形态观察、培养特征、生理生化反应和16SrDNA鉴定,该菌株为链霉菌属吸水类群（Streptomyces hygroscopicus）。     

展青霉孢子数与棒曲霉毒素含量关系的研究

重点研究展青霉在苹果汁培养基中、在静置培养和振荡培养2种培养方式下,生成的孢子数目与其棒曲霉素含量之间的关系。根据实验数据绘制出了二者之间的关系曲线,利用回归方法建立了二者的关系曲线方程。研究结果证实,展青霉在培养过程中产生的孢子数目与其棒曲霉素含量之间存在着一定的数量关系。     

Effect of chitin on the antagonistic activity of Rhodosporidium paludigenum against Penicillium expansum in apple fruit

This study aimed to investigate the effect of chitin on the antagonistic activity of Rhodosporidium paludigenum against Penicillium expansum, the cause of blue mold in apple fruit, and the possible mechanisms involved. Our results showed that biocontrol efficacy and population growth of R. paludigenum were greatly enhanced when it was harvested from nutrient yeast dextrose with added chitin (NYCB) medium compared with that harvested from nutrient yeast dextrose (NYDB) medium. The ability of R. paludigenum produced in NYCB to induce resistance to blue mold in apple fruit was significantly enhanced. The enhanced disease control efficacy was correlated with higher levels of polyphenoloxidase (PPO) and superoxide dismutase (SOD) activities in apple fruit treated with R. paludigenum. Moreover, the SOD and catalase (CAT) activities of R. paludigenum were stimulated by cultivating in NYCB, while malondialdehyde (MDA) accumulation in the yeast cells was suppressed. These results indicated that adding chitin to normal media might be an effective method to improve the antagonistic activity of R. paludigenum and the active oxygen metabolism of R. paludigenum might be closely related to the biocontrol activity of the yeast.     

棉花黄萎病拮抗细菌12-47发酵条件的优化

本实验采用单因素实验的方法在摇床培养的基础上对影响棉花黄萎病拮抗细菌12-47菌株产生拮抗物质的营养因素进行了考察,其中包括发酵培养基的C源、N源、无机盐等。在此基础上通过正交试验对各因素的浓度和组合进行了优化;通过L16（43）正交实验对培养最佳培养基起始pH值、摇瓶装液量、接种量、发酵时间等条件进行了摸索。最终确定优化后的培养基为：玉米粉3%、大豆蛋白胨5%、Mn2+ 0.1%、K+ 0.05%、起始pH8.0、装液量100mL/250mL三角瓶、接种量8%、发酵时间48h。用优化后的培养基进行发酵,发酵液抑菌活性比优化前提高了269%。     

土壤拮抗细菌对油菜菌核病菌的抑制作用研究

采用平板对峙培养法测定细菌CHB101对油菜菌核病菌的抑菌效果，结果表明，CHB101对菌核菌的生长具有明显抑制作用，抑菌带宽为1.12cm。显微观察发现，被抑制菌核菌菌丝壁溃解、细胞质浓缩和外渗的现象，菌丝侧面形成小型分生孢子。在WA平板上，可抑制病菌菌核萌发，随CHB101菌量提高对病菌菌核萌发的抑制作用递增，但培养滤液对菌核菌菌丝生长无明显抑制作用。     

大丽轮枝菌拮抗细菌菌株12-51的筛选鉴定与抗菌物性质分析

由大丽轮枝菌（Verticillium dahliae Kleb）引起的棉花黄萎病,是一种危害严重的世界性病害。通过初筛和复筛得到了对棉花黄萎病具有较高拮抗活性的细菌菌株12-51,通过对其进行形态鉴定、生理生化特征鉴定和16S rDNA全序列分析,最终鉴定此菌株为Bacillus velezensis,16S rDNA序列相似度达99.74%。采用有机溶剂萃取和盐析法对发酵产物进行了提取,初步断定拮抗物质为蛋白类。通过对粗蛋白进行进一步研究发现,60%组分活性较高,并且对热以及酸碱敏感性较小。试验结果为棉花黄萎病的生物防治奠定了基础。     

柑橘皮内生细菌分离及柑橘青霉病菌拮抗菌筛选研究

柑橘青霉病是柑橘贮藏期的主要病害,为利用拮抗内生菌进行生物防治,本研究选取3个品种柑橘的橘皮,采用研磨液培养法分离纯化得到26株内生细菌。通过对峙培养法,发现5株内生细菌对柑橘青霉病菌有明显拮抗作用,占菌株总数的19.2%。对这5株细菌进行初步鉴定,分属于气芽孢杆菌属（Aerobacillus sp.）、芽孢杆菌属（Bacillus sp.）、气单胞菌属（Aeromonas spp.）、假单胞杆菌属（Pseudomonas spp.）和黄单胞杆菌属（Xanthomonas spp.）5个属。不同的柑橘品种橘皮内的内生拮抗细菌的出现频次不同。抑菌结果表明,培养3天时,H-3抑菌圈直径最大,达到了15.3 mm,H-18抑菌圈最小,只有5.6mm;4天时,各抑菌圈直径均有缩小,但缩小幅度不大;5天时H-3拮抗作用仍十分明显,抑菌圈直径为10.3 mm。根据H-3的菌体形态特征、生理生化测定及其16S rDNA序列分析,鉴定该菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,该菌的发现对柑橘青霉病的生物防治有较好的应用价值。     

棉花黄萎病菌拮抗细菌TUBP1的分离鉴定及其防病作用

为研制和开发新疆棉花黄萎病优良生防菌剂,采用琼脂平板扩散法,通过初筛和复筛,分离得到一株对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)具有较强抑菌活性的拮抗菌株TUBP1。通过对形态观察、生理生化实验、16S rDNA和gyrB的基因序列分析,确定该菌株为Bacillus axarquiensis;利用生长速率法和牛津杯法分别测定了发酵液对棉花黄萎病菌抑菌活性,对棉花黄萎病菌菌丝生长抑制率为78.62%±3.48%,抑菌圈直径为21.00±3.86 mm。温室盆栽试验中,TUBP1最大生防效果为43.67%,小区试验中,TUBP1最大生防效果为43.07%。     

6株拮抗酵母对梨毛霉菌(Mucor sp.)和青霉菌(Penicillium sp.)防效测定

采用稀释涂布平板法从拉萨市城关区的12种市售水果中分离酵母菌,并采用平板划线法对酵母菌菌株进行纯化;采用病斑法对皿内抑菌效果较强的6株拮抗酵母进行活体防效测定,并采用26S r DNA D1/D2区域序列测定法对酵母菌进行了分子鉴定。结果表明,193和233号两株酵母对梨毛霉菌(Mucor sp.)有明显的抑菌作用,其发酵液防效强于菌悬液;193号菌株对梨青霉菌(Penicillium sp.)有明显防效,其菌悬液抑菌作用大于发酵液。分子鉴定结果显示,6株酵母菌归为5个种,48号菌株为隐球酵母(Cryptococcus adeliensis),77号为葡萄有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum),193号为汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii),230和235号为禾本红酵母(Rhodotorula graminis),233号为胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)。     

植物根组织内生细菌多样性及其促生作用

随着植物微生态系统研究的不断深入,内生细菌的存在和作用已得到广泛共识。内生细菌在植物不同器官分布数量存在显著差异。根内生细菌数量远远超过其他植物器官,具有寄主植物多样性和种属多样性特征,是多种生物因素和非生物因素共同作用的结果。内生细菌可利用风、土壤颗粒、水、农业器具等多种外力条件和人类、鸟、昆虫、线虫等多种媒介从根际土壤定殖在寄主植物根内部,具有溶磷、产生植物激素、固氮、合成铁载体、诱导植物产生抗性、产生抗真菌代谢产物等多种生物功能。笔者对根内生细菌多样性、定殖过程、促生作用及应用前景几方面进行综述,目的在于深入了解植物根组织内生细菌资源,为植物内生菌资源开发利用提供参考。