凝胶层析分离提纯芦荟多糖的方法

凝胶是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状结构、呈珠状颗粒的物质，每个颗粒的细微结构及筛孔的直径均匀一致，像筛子，直径大于孔径的分子将不能进入凝胶内部，便直接沿凝胶颗粒的间隙流出，称为全排出。较小的分子在容纳它的空隙内，自由出入，造成在柱内保留时间长。由此过程，较大的芦荟多糖分子先被洗脱下来，而较小的分子后被洗脱下来，从而达到相互分离提纯。     

凝胶过滤层析参数对EV71病毒粗提液分离效果的影响

通过凝胶过滤层析达到分离纯化EV71肠道病毒粗提液,以提高EV71的纯度.选用不同的洗脱流速、不同样品上样量、不同的缓冲溶液的pH值和不同盐浓度对EV71肠道病毒粗提液进行连续洗脱.结果表明,凝胶过滤层析的洗脱流速、样品上样量、缓冲溶液的pH值和盐浓度对EV71病毒均能不同程度地影响EV71病毒粗提液的分离效果.在试验...     

凝胶层析分离提纯芦荟多糖的方法

目的:通过凝胶层析法提高芦荟多糖的含量基本原理:凝胶是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状结构、呈珠状颗粒的物质,每个颗粒的细微结构及筛孔的直径均匀一致,像筛子,     

披针叶黄华的化学成分研究

披针叶黄华(Thermopsis lanceolata)化学成分的研究是对披针叶黄华各类化学成分进行定性分析,目的是对披针叶黄华的化学成分选用适当的分离纯化方法.通过试管法和纸色谱法确定化学成分后可对披针叶黄华进行活性部位筛选,即比较不同溶剂提取物的活性特点,可以明确活性物质的最佳提取溶剂.     

聚酰胺树脂层析纯化甘草黄酮的研究

比较不同条件下聚酰胺树脂对甘草黄酮的静态吸附和动态吸附的效果,确定甘草黄酮分离纯化的最佳条件.结果表明,聚酰胺树脂层析纯化甘草黄酮的最佳条件是:上样液浓度为3.51 mg/mL,pH 10.0,用70％乙醇以1.00 mL/min流速洗脱.对从1 g甘草中提取得到的甘草黄酮采用层析柱层析,发现回收率和纯度都较高.在最佳条件下,经两次层析可使甘草黄酮纯度达到49.75％.     

从大体积的PAGE凝胶中纯化长链寡核苷酸的新方法

通过比较从大体积的PAGE凝胶中回收寡核苷酸的不同方法,提出回收未银染的长链寡核苷酸的最佳方案:用12 cm×1.5 cm的PAGE凝胶柱分离DNA,然后将凝胶切成长约0.5 cm的胶条,通过PCR反应挑选含有寡核苷酸的胶条。用2 mL的寡核苷酸洗脱缓冲液回收寡核苷酸,反复提取3次。用装填30 mg硅胶的C18 Sep-Pak反相层析柱进行纯化,最后经过离心冻干后即得到纯化的寡核苷酸,该方法的回收率可达(28.7±2.0)%。     

儿茶素低聚合物的MCI GEL分离及结构鉴定

[目的]分离儿茶素低聚合物,并对其结构进行鉴定。[方法]利用MCI层析柱和甲醇水溶液洗脱体系,对茶多酚的氧化产物进行分离,并对分离后的各组分进行HPLC检测。[结果]分离得到2种纯度相对较高的儿茶素低聚合物,经HPLC制备及结构鉴定,确定其中1种物质是黄酮苷类化合物。[结论]该洗脱体系不仅可将氧化产物和简单儿茶素分离,也可使极性相近的氧化产物基本分离。     

大孔树脂纯化桑葚渣中α-淀粉酶抑制剂的工艺优化及其活性成分研究

以桑葚渣为原料,研究了桑葚渣水提液中α-淀粉酶抑制剂的分离纯化方法及其成分。以α-淀粉酶抑制率为指标,对比了5种树脂(AB-8、S-8、D101、NKA-9和HZ-806)对桑葚渣水提液中α-淀粉酶抑制剂静态吸附和解吸的影响,从而筛选出适于分离α-淀粉酶抑制剂的大孔树脂;以此为基础,对桑葚渣水提液中α-淀粉酶抑制剂的分离、纯化参数,如上样流速、洗脱剂体积分数、洗脱剂流速进行优化;利用高相液相色谱分析不同体积分数(10%、30%、50%、70%、90%)乙醇洗脱液中的成分,以期探明桑葚渣中具有α-淀粉酶抑制活性的成分。结果表明:AB-8大孔树脂适于分离桑葚渣水提液中α-淀粉酶抑制剂,分离纯化最佳工艺为上样流速12 mL·min~(-1),70%体积分数乙醇溶液作为洗脱剂,洗脱剂流速24 mL·min~(-1)。通过分析不同体积分数乙醇洗脱液中的物质组成及其对α-淀粉酶的抑制活性发现,槲皮苷的质量浓度变化与洗脱液对α-淀粉酶的抑制率呈相似趋势,推测其可能是桑葚渣水提物中α-淀粉酶抑制活性的主要贡献因子。     

聚酰胺树脂分离纯化芹菜黄酮的工艺研究

对芹菜黄酮的分离工艺条件研究,以确定聚酰胺分离芹菜黄酮的最佳工艺.聚酰胺树脂分离芹菜总黄酮,通过树脂吸附与解析条件的优化以及洗脱剂浓度、洗脱流速对洗脱率的影响,采用紫外分光光度法测定其黄酮含量.结果发现浓度0.3828mg/ml的芹菜总黄酮,以0.5 ml/min流速上样,40%乙醇以1 ml/min流速洗脱3体积,芹菜的洗脱物中黄酮纯度达到80%.     

放线菌菌株WS-13182产生的活性物质的分离纯化

微生物天然产物分离纯化是获得天然产物活性化合物的重要环节.以分离放线菌菌株WS-13182发酵提取物中活性物质为研究对象,采用制备液相色谱-梯度洗脱法,考察了不同色谱柱和流动相配比对样品分离度的影响,建立了适宜的分析、制备分离条件:采用美国Sunfire C18柱(150*2.1 mm(i.d)),粒径3.5 μm,流速为0.3 mL/min,流动相为乙腈和水,加入0.2%乙酸(体积比),梯度洗脱,乙腈的浓度在25 min内由40%变至100%(体积比).将该分析条件放大到制备液相色谱上,从放线菌菌株WS-13182的发酵提取物中制备得到8个化合物,其中6个化合物纯度达90%以上,经LC-MS鉴定为同系物.     

聚酰胺精制紫果西番莲总黄酮的工艺研究

[目的]研究聚酰胺颗粒分离纯化紫果西番莲总黄酮的工艺条件。[方法]采用紫外分光光度法测定紫果西番莲总黄酮的含量,通过考察静态、动态吸附试验及洗脱条件,得到聚酰胺颗粒分离纯化西番莲总黄酮科学合理的工艺条件。[结果]聚酰胺对紫果西番莲叶总黄酮有良好的吸附作用,静态吸附的饱和吸附量为23.14 mg/g。其动态吸附分离工艺条件：上样量30 ml,先用8 BV的水洗脱至无Molish反应,然后用12 BV的50%乙醇以 2BV/h的流速进行洗脱。[结论]聚酰胺颗粒对紫果西番莲叶总黄酮吸附选择性高,操作简单,可用于紫果西番莲的富集纯化。     

大孔吸附树脂分离龙眼核中抗氧化活性物质方法的研究

应用大孔吸附树脂对龙眼核提取液中的抗氧化活性物质进行了分离提取研究.结果表明,对龙眼核提取液中抗氧化活性物质吸附性能较好的大孔吸附树脂为H1020,分离的优化条件为通过树脂柱的流速2BV·h-1、pH值4.5和原始液中总抗氧化能力为130u·g-1,最佳洗脱剂为40%的乙醇溶液.     

纯化半边旗抗肿瘤有效成分5F的新方法

目的：寻找分离纯化半边旗抗肿瘤有效成分5F的新方法。方法：提取分离出5F精提物后,以H40型硅胶为填料,采用不同的溶剂系统石油醚和丙酮的混合液,氯仿和甲醇的混合液洗脱,分离纯化5F。结果：经薄层色谱鉴定,可以得到纯的5F。结论：分别采用两种不同的溶剂系统洗脱硅胶柱,可以有效地纯化半边旗抗肿瘤有效成分5F。     

β－乳球蛋白加压凝胶的生成及其物化特性研究

 研究了在30℃ 、800 MPa压力的作用下, 不同加压时间（5～120 min）和不同浓度N-乙基马来酰亚胺 (NEM,1～10 mmol·L-1)对14%（w/v）的β-乳球蛋白（β-Lg）溶液在pH 7.20条件下形成凝胶物理化学特性的影响。结果表明，延长加压时间未对凝胶的硬度和破断应力造成影响。凝胶呈现出类似蜂窝状的多孔网状结构。随加压时间延长，蜂窝状多孔的孔径变大，但其网状结构未受到破坏。在加压时间延长的条件下凝胶保持着高持水力，说明在加压过程中，凝胶内部蛋白质和水的相互作用未产生明显变化。随加压时间延长，用Tris-glycine-EDTA缓冲溶液或含有0.5% SDS和8 mol·L-1尿素的缓冲液溶解凝胶，发现凝胶中蛋白溶解度降低。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示，在2-巯基乙醇不存在的条件下，除了β-Lg单体以外，还检出二聚物、三聚物、四聚物以及高分子聚合体的染色带。相反，在2-巯基乙醇存在的条件下，只检出了单体。此外，在800 MPa条件下添加10 mmol·L-1的N-乙基马来酰亚胺未导致凝胶的生成。表明在pH中性范围内，加压 β-Lg凝胶，主要是通过SH基的氧化和SH/S-S内部交换反应形成的内部分子间架桥而形成。     

用柱层析法检测中国龙虾主要变应原的研究

为分离、纯化和鉴定中国龙虾的主要变应原,采用硫酸铵沉淀法和等电点沉淀法对变应原粗浸液进行初分,在蛋白核酸检测仪检测控制下,用DEAE-52离子交换层析柱进行阶段洗脱和葡聚糖凝胶G-100柱层析,斑点ELISA确定其免疫活性.结果表明:中国龙虾变应原蛋白的硫酸铵沉淀范围在35％～60％之间,pH等于4.7、4.5时的等电点沉淀蛋白质有明显的变应原活性;离子交换层析中具变应原活性蛋白质峰含分子质量为15000、20 700、34 000、60 000、83 200 u的蛋白质;葡聚糖凝胶G-100层析后具变应原活性蛋白峰SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示只有34000 u相对分子质量的蛋白条带,纯度为91.5％.本试验分离、纯化鉴定出中国龙虾相对分子质量为34000 u的主要变应原,对于变应原的标准化、提高食物变态反应性疾病诊断和治疗水平具重要意义.     

大果紫檀心材色素纯化及成分研究

  目的  研究大果紫檀心材色素的纯化工艺及成分,为其心材形成机理提供理论基础。  方法  以大果紫檀心材为原料,使用7种溶剂抽提大果紫檀心材色素,测定波长并建立心材色素质量浓度的标准曲线。选用10种大孔树脂纯化心材色素, 分别测定吸附率、吸附量、解吸率和解吸量,确定吸附效果最佳的树脂。在DA-201树脂的动态吸附过程中,以色素质量浓度为指标探究不同因素的影响大小,确定最佳吸附条件。使用超高效液相色谱串联四极杆–静电场轨道阱高分辨质谱仪联用技术（UPLC-Q-EXCTIVE-MS）对纯化后的心材色素分离与鉴定。  结果  选用乙醇作为提取溶剂,提取液的色差值为55.15。将486 nm作为测定波长,建立了标准曲线。大孔树脂DA-201的吸附–解吸值最佳,其吸附量和吸附率分别是10.07 g/L和80.19%,解吸量和解吸率分别是7.06 g/L和70.07%。在DA-201大孔树脂的静态吸附过程中,最佳条件为pH值4和洗脱剂乙醇浓度100%。在动态吸附过程中,最佳吸附条件分别为吸附流速2.0 mL/min,上样液质量浓度2 g/L;最佳解吸条件分别为洗脱流速1 mL/min,洗脱剂用量100 mL。对纯化后的心材色素分析,从中分离鉴定出10种黄酮类和醇类化合物,分别为荭草苷、牡荆素、金雀异黄素、白藜芦醇、白杨素、黄豆黄素、异甘草素、诺卡酮、芒柄花黄素和酮洛芬。  结论  用DA-201型大孔吸附树脂纯化大果紫檀心材色素工艺稳定,获得了最佳吸附和解吸条件,同时确定了心材色素成分。      

D-101大孔吸附树脂分离放线菌Streptomyces lavendulae gCLA4活性成分条件的研究

为了优化大孔吸附树脂分离放线菌Streptomyces lavendulae gCLA4发酵液中活性成分的条件,以洗脱液对猕猴桃溃疡菌(Pseudomonas syringae pv.actinidiae)抑菌活性的强弱为评价指标,采用D-101大孔吸附树脂对放线菌Streptomyces lavendulae gCLA4的发酵液进行吸附和洗脱试验。结果表明:当发酵液上样量为100mL,pH为6,洗脱流速为150mL/h,解析溶剂为φ=80%的丙酮水溶液,洗脱体积为40mL时,洗脱液的抑菌圈直径最大,吸附解析效果最好。说明,D-101大孔吸附树脂可用于分离放线菌Streptomyces lavendulae gCLA4发酵液中的活性成分。     

太白贝母多糖分离及结构表征

利用水提醇沉得到太白贝母粗多糖之后,依次采用AB-8型大孔吸附树脂吸附、透析袋透析、二乙基氨基乙基(diethylaminoethyl, DEAE)弱碱性阴离子交换纤维柱层析对太白贝母多糖进行纯化,之后利用葡聚糖凝胶G-100柱层析法测定太白贝母多糖的相对分子质量,利用硅胶薄层层析法,气相-质谱联用法以及傅里叶红外光谱法分析研究太白贝母多糖中单糖的组成类型以及结构特点.结果表明太白贝母多糖经过DEAE纤维素柱纯化洗脱后,至少得到3个分离的洗脱峰,其中NaCl洗脱液洗脱多糖葡聚糖凝胶G-100层析柱洗脱V_e/V_o的比值为1.07;薄层层析结果显示太白贝母多糖水解物的Rf值为0.39,与D(+)-半乳糖的Rf值(0.38)迁移率接近,并且显色接近一致(均为蓝色);太白贝母多糖水解物GC-MS出峰时间(1.522 min)与D(+)-半乳糖出峰时间接近(1.520 min),并且主要m/z碎片信息接近为147.1和75.0.红外光谱特性分析研究,显示其在1 100～1 010 cm~(-1)之间有3个强吸收峰(1 050 cm~(-1 ), 1 027 cm~(-1 ), 1 003 cm~(-1 )),此为吡喃糖苷的特征吸收峰;在827 cm~(-1 )处有吸收峰,而在890 cm~(-1 )处无吸收峰,此为α-型糖苷键链接特征.可见太白贝母NaCl洗脱液洗脱的多糖相对分子质量约为2×10~6,多糖的主要组成单糖类型是D(+)-半乳糖,属于α-型吡喃糖.     

界面组成对乳状液填充大豆蛋白凝胶强度及持水性的影响

以凝胶持水性和强度为指标,考察不同p H值(4、5、6)、不同Na Cl浓度(50、200 mmol/L)、不同乳化剂(大豆蛋白、酪蛋白、吐温20)对以超声法制备乳状液为溶剂制备的乳状液填充大豆蛋白热诱导(95℃、30 min)凝胶性质的影响。结果表明,在p H值为6条件下的凝胶强度和持水性高于p H值为4、5条件下的值。高浓度(50~200 mmol/L)Na Cl不利于提高凝胶强度和持水性。以大豆蛋白和酪蛋白为乳化剂的乳状液填充凝胶强度比以水为溶剂制备的无填充凝胶(p H值为6、Na Cl浓度为50 mmol/L)分别高0.47、1.76倍,而以吐温20为乳化剂的乳化颗粒并不能提高填充凝胶强度和持水性。可见,环境因素(p H值和Na Cl浓度)和乳化剂对乳状液填充凝胶持水性和强度都有影响。活性乳化颗粒填充可以提高大豆蛋白凝胶的强度,这可能和乳化颗粒界面膜组成与凝胶网络的分子相互作用有关。     

普洱茶及其提取物中茶多糖含量测定的研究

研究了一种快速测定普洱茶叶及其提取物中茶多糖含量的方法:先对普洱茶叶进行水提(或将普洱茶粉直接溶于水),再进行80%醇沉,然后用0.5 mol/L的盐酸溶液在40℃下水解30 min,用聚酰胺层析柱分离洗脱,最后用苯酚-硫酸法测定茶多糖的含量。该方法可有效去除普洱茶中茶色素等物质的干扰,准确测定出水溶性茶多糖的含量。