鸡球虫弱毒疫苗研制成功

中国一年所产的70亿只商品鸡，如今只要注射鸡球虫弱毒疫苗，即可防病，还能生产出高质量、无药残的禽蛋产品。北京农学院动物科学技术系段嘉树教授为首席专家的课题组，历经15年艰苦探索，率先在国内研制成功鸡球虫弱毒疫苗。专家称，这项技术填补了国内空白，并达到世界先进水平，也为打破国际禽蛋贸易技术壁垒创造了条件。     

我国研制成功“鸡球虫弱毒疫苗”

北京农学院院长王有年近日与中国农科院科技产业发展局局长张逐陈签订了鸡球虫弱毒疫苗转让协议，将该疫苗正式转让给中国农科院兰州兽医研究所。     

L-NMMA对鸡球虫早熟弱毒疫苗免疫鸡增重的影响

为了研究鸡球虫早熟弱毒疫苗对免疫鸡增重的影响及一氧化氮合成酶抑制剂(L-NMMA)对免疫鸡增重和免疫效果的影响。取40只SPF雏鸡,分为空白对照组(C1、C2)和单剂量重复接种组(T1、T2),T1、T2组按推荐免疫剂量单剂量重复接种鸡球虫早熟弱毒疫苗,C1和T1、C2和T2分别于二次接种后第7、14天逐只空腹称重,剖检记录十二指肠、空肠和盲肠病变记分,取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腺胃、肌胃、十二指肠、空肠和盲肠进行病理组织学检查。另选取40只SPF雏鸡,分为空白对照组C20、攻毒对照组T21、免疫对照组T22和免疫加药组T23,T22和T23按推荐免疫剂量两次免疫鸡球虫早熟弱毒疫苗,T23在免疫的同时腹腔注射L-NMMA,二免后第14天T21、T22和T23均接种鸡球虫混合强毒,测定SPF雏鸡平均增重、相对增重、肠道(十二指肠、空肠和盲肠)病变记分、病变记分减少率(RLS)、血便记分、死亡率及卵囊产量等指标。结果显示,接种组的平均增重显著低于未接种组(P<0.05),接种组的十二指肠、空肠和盲肠有轻微病变且黏膜上皮细胞均有不同程度损伤和脱落;免疫加L-NMMA组一免、二免后及攻毒后试验鸡的平均增重均极显著高于免疫攻毒对照组(P<0.01),且与空白对照组鸡的平均增重无显著差异(P>0.05),且免疫对照组和免疫加药组肠道病变记分和卵囊产量无显著差异(P>0.05)。说明鸡球虫早熟弱毒疫苗对雏鸡肠道有轻微损伤,且对鸡增重有一定影响;L-NMMA可降低鸡球虫早熟弱毒疫苗对试验鸡增重的影响,且不影响疫苗的免疫效果。     

我国研制成功鸡球虫弱毒疫苗

中国一年所产的70亿只商品鸡，如今只要注射鸡球虫弱毒疫苗即可防病，还能生产出高质量、无药残的禽蛋产品。科学家今天在此间宣布，以北京农学院动物科学技术系段嘉树教授为首席专家的课题组，历经15年艰苦探索，率先在国内研制成功鸡球虫弱毒疫苗。专家称，这项技术填补了国内空白，并达世界先进水平，也为打破国际禽蛋贸易技术壁垒创造了条件。     

我国研制成功鸡球虫弱毒疫苗

中国一年所产的70亿只商品鸡，如今只要注射鸡球虫弱毒疫苗，即能防病，还能生产出高质量、无药残的禽蛋产品。科学家日前宣布，北京农学院动物科学技术系段嘉树教授为首席专家的课题组，历经15年艰苦探索．率先在国内研制成功鸡球虫弱毒疫苗。专家称，这项技术填补了国内空白．并达世界先进水平，也为打破国际禽蛋贸易技术壁垒创造了条件。     

我国鸡球虫弱毒疫苗研制成功

以北京农学院动物科学技术系段嘉树教授为首席专家的课题组，历经15年艰苦探索，率先在国内研制成功鸡球虫弱毒疫苗。专家称，这项技术填补了国内空白，并达世界先进水平，也为打破国际禽蛋贸易技术壁垒创造了条件。     

检测鸡毒支原体抗体的间接ELISA方法和HI试验方法的建立及初步应用

本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法,结合HI试验,为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原,使用单一稀释法构建了关于血清抗体滴度与1∶500血清稀释度处S/P值的回归方程lg(抗体滴度)=1.257×lg(1∶500处S/P值)+3.709,R²=0.917 6,S/P临界值为0.32,临界滴度是1 200。经验证,rVlhA-ELISA方法具有良好的特异性、重复性,最低能检出1∶2 000稀释的阳性血清。选择国内MG分离株SH/2020-1作为血凝抑制抗原建立HI试验方法。使用rVlhA-ELISA方法联合HI试验进行血清样品检测,IDEXX-MG方法作为对照,借助RT-qPCR方法监测MG感染情况。结果表明rVlhA-ELISA方法和IDEXX-MG监测的血清抗体趋势与HI复核结果均一致;rVlhA-ELISA与HI联合判定结果与IDEXX-MG符合率可达91.53%。上述结果显示,本研究建立的rVlhA-E...     

应用PPA—ELISA检测鸡毒支原体血清抗体

应用ＰＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测鸡毒支原体血清抗体,其结果与血凝抑制试验和ＥＬＩＳＡ符合率为１００％,是一种特异,敏感,简单,快速的检测方法。     

鸡新城疫HI抗体对弱毒疫苗免疫的影响

按雏鸡的ＨＩ抗体水平分为低抗体组、中等抗体组和高抗体组３个组，每组又分为４个小组，分别用于Ｆ系疫苗饮水、Ｉ系疫苗肌注和Ｉ系疫苗饮水试验，另一小组不免疫作为对照，免疫后１０天，２０天分别采血清进行ＨＩ价测定，结果表明，不ＨＩ抗体水平雏鸡产生的免疫效果各异，免疫前基础抗体水平对弱毒疫苗的免疫效应具有明显影响。     

鸡球虫病弱毒疫苗的免疫机理及研究进展

鸡球虫病是由艾美耳属球虫引起的一种危害性极其严重的寄生原虫病,呈世界性分布,是最主要的鸡病之一。目前主要用抗球虫药物对其进行防制,但随着耐药虫株的产生和药物残留对肉禽品质及人体健康的影响等问题的出现,对鸡球虫活疫苗的研究成为研究热点。作者对鸡球虫弱毒疫苗的免疫机理及其鸡胚传代致弱方法、理化致弱方法和早熟选育致弱法的研究进展作一概述,并对鸡球虫弱毒疫苗的应用前景进行了展望。     

阪崎肠杆菌单克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立

试验旨在制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体,初步建立其ELISA检测方法。以灭活的阪崎肠杆菌全菌体为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备杂交瘤细胞,并用间接ELISA法选取阳性杂交瘤细胞,扩大培养后测定单克隆抗体的效价,进行特异性及抗体间的配对,使用mAb亚类检测试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型,并利用得到的抗体建立双抗体夹心ELISA检测方法。本试验得到3株具有良好特异性能稳定分泌单克隆抗体的阳性细胞株5C10、2B6和Ab02,经两两配对,据阳性D_{450 nm}值及P/N值选择1：20000稀释的5C10作为包被抗体,1：40000稀释的Ab02作为酶标二抗,建立ELISA检测法,应用建立的方法与荧光定量PCR方法检测动物实验室保存的20份进出口送检奶粉样品,结果显示试验结果一致。本试验成功制备阪崎肠杆菌的单克隆抗体并建立其ELISA检测法,为大批量快速检测阪崎杆菌奠定了基础。     

副猪嗜血杆菌抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

本试验采用121 ℃高压处理副猪嗜血杆菌4型和5型耐热蛋白,混合作为包被抗原,建立了检测副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA方法。通过对试验条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:抗原包被浓度为10 μg/mL,37 ℃包被2 h;封闭液选择含20 g/L脱脂奶粉的PBST,封闭30 min;血清的稀释度为1∶80;抗原抗体反应时间为45 min;酶标二抗稀释度为1∶12000,作用时间为30 min;底物显色时间为15 min。特异性、重复性和敏感性试验及对200份送检血清的检测结果表明,建立的间接ELISA方法特异性和重复性良好,敏感性比间接血凝试验高,对已知阴阳性血清的临床样本检测结果与国外ELISA试剂盒一致,可用于副猪嗜血杆菌的血清抗体检测和血清流行病学调查。     

柱状黄杆菌双抗体夹心ELISA检测方法的建立

The aim of this study was to develop a rapid method for the detection of Flavobacterium columnaris based on a double antibody sandwich ELISA （DAS-ELISA）. Purified monoclonal antibody against Flavobacterium columnaris was used as the capture antibody, while polyclonal antibody was used as the detection antibody. The optimal conditions for the ELISA were as follows: monoclonal antibody with 0.08 μg per well was added to coat overnight at 4 ℃; the plate was blocked by 30 g/L bovin serum albumin for 90 min at 37 ℃; incubation concentration of polyclonal antibody was 0.11 μg per well; the incubation time for detection antigen, polyclonal antibody and enzyme labeled antibody was 1 h at 37 ℃ for each; the value of D_{492 nm} was obtained after 15 min coloration. Judging with P/N≥2.1 and D_{492 nm}≥0.776 as positive criteria. This method had no cross reaction with Edwardsiella tarda, E. coli, Aeromonas hydrophila, Vibrio anguillarum, Vibrio alginolyticus, Vibrio parahaemolyticus and Vibrio harveyi. Its minimum detectable limit was 1×10³ CFU. Therefore, this study provided a specific and sensitive detection method for Flavobacterium columnaris for the first time.     

犬狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用

用狂犬病毒单克隆抗体预包被酶标板,将纯化的狂犬病毒作为检测用抗原,利用捕获包被法建立了间接ELISA法用于犬狂犬病病毒抗体的检测。通过优化ELISA条件,研制试剂盒并应用于犬狂犬疫苗的免疫效果检验。利用研制的试剂盒与RFFIT、商品化同类试剂盒对30份犬血清进行平行检测,总符合率分别为90%和93.33%,与其它几种常见犬病毒抗体阳性血清无交叉反应。试剂盒批内、批间变异系数分别为1.45%～5.79%和2.35%～7.21%,2～8℃保存12个月稳定。基于用单抗预包被后再包被检测抗原,本试剂盒检测样品抗体的灵敏度和稳定性得以显著提高,因此适合于不同来源狂犬疫苗人工免疫犬血清的RV抗体水平监测。     

PRRSV-VR2332减毒活疫苗不影响猪瘟疫苗和猪圆环病毒2型灭活疫苗诱导的抗体产生

本研究拟评估仔猪接种猪繁殖与呼吸综合征减毒活疫苗对猪圆环病毒病疫苗、猪瘟疫苗免疫的干扰情况,并分析不同免疫方式对仔猪生长性能的影响,以期为探究PRRSV减毒活疫苗与PCV2、CSF疫苗的联合免疫提供数据参考。本研究先以100头仔猪为研究对象,将其随机分为A、B、C、D 4组。其中A组仔猪免疫PRRSV减毒活疫苗7 d后免疫PCV2疫苗;B组仔猪同期分点注射PRRSV减毒活疫苗和PCV2疫苗;C组仔猪仅免疫PCV2疫苗;D组仔猪仅免疫PRRSV减毒活疫苗。另外再筛选100头仔猪,随机分为E、F、G、H 4组。E组仔猪于免疫PRRSV减毒活疫苗12 d后免疫CSF疫苗;F组仔猪同期分点注射PRRSV减毒活疫苗和CSF疫苗;G组仔猪仅免疫CSF疫苗;H组仔猪仅免疫PRRSV减毒活疫苗。免疫4周后,测定仔猪血清中相关抗体水平。同时,称量免疫前后各组仔猪的体重,计算不同免疫方案仔猪的平均日增重。结果表明：A~D组中, A组和B组仔猪在免疫4周后均产生了较高水平的PRRSV及PCV2抗体,且A组抗体水平略高于B组。C组仔猪仅产生了PCV2抗体,D组仔猪产生了较高水平的PRRSV抗体。E~H 4组中,E组和F组仔猪均产生了较高水平的PRRSV及CSFV抗体。G组仔猪仅产生了高水平的CSFV抗体,H组仔猪仅产生了高水平的PRRSV抗体。A、B、C、D 4组中B组仔猪的平均日增重最高;而E、F、G、H 4组中E组仔猪的平均日增重显著高于其他3组。PRRSV减毒活疫苗与PCV2疫苗或CSF疫苗同期分点免疫、免疫PRRSV减毒活疫苗一段时间后再免疫PCV2或CSF疫苗均能诱导仔猪产生高水平的抗体;在体液免疫方面,PRRSV减毒活疫苗免疫与否均未对另外二种疫苗表现出明显的干扰作用。在仔猪28日龄时同期分点免疫PRRSV减毒活疫苗与PCV2疫苗,12 d后再免疫CSF疫苗的免疫方案不仅能诱导仔猪产生高水平抗体,还可以使仔猪具备较高的平均日增重。     

用ELISA检测猪链球菌病血清抗体（初报）

以2．5％NaCl浸提猪链球菌荚膜多糖抗原,选用2％明胶作封闭液,4％PEG－PBS为血清稀释液,用ELISA检测猪链球菌病血清抗体,特异性强,比琼扩敏感25-250倍,简便快速,在本病诊断、检疫中有一定实用价值。     

牛副流感病毒3型抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用

旨在建立牛副流感病毒3型(BPIV3)抗体间接ELISA检测方法。克隆NP-HN截短串联基因并构建原核表达载体pET28a(+)-NP-HN,诱导纯化NP-HN重组蛋白作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立BPIV3抗体间接ELISA检测方法,进一步与病毒中和试验和进口ELISA试剂盒进行比较,应用本方法对270份临床血清样本进行了检测。结果表明,表达的NP-HN重组蛋白大小为44ku,具有良好的反应原性,建立的ELISA检测方法特异性强,与牛的主要呼吸道病原如牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒等均无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数小于8%,与病毒中和试验和进口商品化ELISA试剂盒的总符合率分别为96.67%和98.89%。对采自山东、辽宁和天津的270份临床血清样本检测后总的阳性率为82.59%(223/270)。建立的BPIV3抗体间接ELISA方法具有较好的特异性和敏感性,可应用于BPIV3的流行病学调查和抗体检测研究。     

鸭出血症病毒间接ELISA检测方法的建立与应用

为了建立快速检测鸭出血症病毒(DHDV)的血清学方法,本试验利用浓缩纯化的DHDV作为包被抗原,建立了检测DHDV血清抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化。试验结果表明,抗原最佳稀释浓度为7.06 μg/孔;最佳包被条件为37 ℃ 1 h后,4 ℃包被过夜;待检血清的最佳稀释倍数为1:25。在优化条件下,阴阳性临界值判定标准为0.44。建立的ELISA方法对鸭瘟病毒、鸭病毒性肝炎病毒、雏番鸭细小病毒和番鸭呼肠孤病毒阳性血清均无交叉反应,结果表明该方法具有良好的特异性。批内和批间重复性试验的最大变异系数分别为0.0221、0.0032,显示该方法具有很好的稳定性,与血清中和试验的符合率为100%。该方法快速、简单、特异性好、重复性好,可用于大批量监测鸭群DHDV血清抗体感染情况。     

猪脑心肌炎病毒抗体间接ELISA方法的建立及应用

应用纯化的EMCV VP1重组蛋白建立了检测EMCV抗体的间接ELISA方法,并确定了间接ELISA的最佳工作条件。结果表明,重组蛋白抗原的最适包被浓度为0.54μg/mL;与间接免疫荧光试验比较,结果表明该方法具有良好的特异性和敏感性。此方法中VP1抗原最佳稀释度为1:100,待检血清的最佳稀释度为1:50,酶标二抗的最佳稀释度为1:800,1%明胶为封闭液,OD450时阴阳性血清的临界值为0.35。对2006年天津7个地区66个猪场295份屠宰猪的血清样本的检测结果显示,天津各地区血清EMCV抗体阳性率在41.67%～93.33%之间,平均84.75%,猪场抗体阳性率在50%～100%,平均93.94%。