CclSAUR49基因的表达特征及对类柠檬苦素生物合成的影响

【目的】探究CclSAUR49基因对柑橘类柠檬苦素生物合成的影响。【方法】通过高效液相色谱(HPLC)检测叶片中的诺米林和柠檬苦素含量;利用实时荧光定量PCR分析基因的表达量。分别从柚和湖北早实枳中克隆CclSAUR49基因编码序列(coding sequence,CDS)及启动子,利用瞬时转化烟草对CclSAUR49蛋白进行表达定位;通过遗传转化湖北早实枳分析该基因的组织表达特性及其对类柠檬苦素生物合成的影响。【结果】类柠檬苦素含量和CclSAUR49表达水平在2个沙田柚品种间以及叶片的生长发育中均呈显著负相关。CclSUAR49蛋白定位于质膜和细胞核。从湖北早实枳中克隆得到的CclSAUR49基因的启动子序列中不含吲哚乙酸(IAA)响应元件。启动子活性分析发现,CclSAUR49基因主要在茎、根和老叶中表达,在嫩叶中没有表达。超量表达CclSAUR49导致类柠檬苦素含量显著降低,植株的叶片和节间显著伸长,茎增粗。【结论】柑橘CclSAUR49基因的表达有明显的组织特异性,对类柠檬苦素的合成或积累有抑制作用。     

柑橘及其近缘属植物LFY同源基因的比较

LFY基因处于成花调控网络的关键位置,不仅调控开花时间和花转变,而且在花序和花的发育中也起重要作用。为了进一步探讨柑橘及其近缘属植物开花的分子机理,利用PCR技术分别从兴津温州蜜柑(Citrus unshiuMarcovitch)、无核椪柑(Citrus reticulata Blanco)、沙田柚[Citrus grandis(L.)Osbeck]、融安金柑(Fortunella crassifoliaSwing)和无核黄皮[Clausena lansium(Lour.)Skeels]叶片中分离克隆了LFY全长同源基因。结果表明兴津温州蜜柑、无核椪柑、沙田柚、融安金柑和无核黄皮中的LFY全长同源基因的核苷酸长度分别为2090、2086、2092、2081、2089bp,分别编码398、398、398、398和397个氨基酸,这些同源基因均由3个外显子和2个内含子组成。同源性分析发现,这些LFY全长同源基因的核苷酸序列和氨基酸序列同源性高,分别为92%～99%和95%～100%。亲缘关系分析结果与当前的植物学分类结果一致。     

柑橘衰退病晚期抑制差减cDNA文库的构建及初步分析

为了研究柑橘衰退病晚期应答的分子机理,利用经典的抑制差减杂交技术,以感染柑橘衰退病3年后的‘不知火’杂柑实生苗叶片组织的c DNA为测试方,以脱毒的‘不知火’实生苗叶片组织的c DNA为驱动方进行差减杂交,构建了柑橘衰退病诱导的正向抑制差减c DNA文库。随机挑取此文库中210个阳性克隆进行测序,获得了192条有效序列。将这些EST序列聚类拼接后,共获得77条非重复序列。对这些EST进行GO和KEGG分析,发现这些EST的功能主要与胁迫及防御、代谢、转录、转运、蛋白命运等途径相关。用实时定量RT-PCR验证了其中4个基因:几丁质酶基因、茉莉酸响应基因的转录抑制因子1基因(JAZ1)、钙调素结合蛋白基因、咖啡酸—氧甲基转移酶基因,结果表明在衰退病的诱导下,‘不知火’杂柑叶片中这4个基因的表达量均有明显提高,说明这些基因可能参与了‘不知火’杂柑叶片晚期衰退病应答。JAZ1基因的上调表达表明可能宿主衰退病晚期应答过程中的诱导系统抗性受到了抑制。     

晚熟杂柑新品种果实品质综合评价

【目的】建立柑橘果实品质综合评价方法,为筛选适合栽培的优新杂柑品种提供理论依据。【方法】对重庆市4个区县5个引进的杂柑新品种及当地1个主栽杂柑品种的外在品质和内在品质主要指标进行测定,采用因子分析法及聚类分析进行综合评价分析。【结果】‘金块’‘沙斯塔金’和‘尤斯迈特金’在开州的果实综合品质评分高于‘W.默科特’,具有在开州推广的潜力。‘金块’‘沙斯塔金’‘探戈’‘塔荷金’‘尤斯迈特’在江津的果实综合品质评分皆高于‘W.默科特’,皆有在江津推广的潜力。‘金块’‘沙斯塔金’‘探戈’‘尤斯迈特’在奉节的果实综合品质评分高于‘W.默科特’,具有在奉节推广的潜力。总体上,‘金块’的果实综合品质最佳,‘沙斯塔金’‘塔荷金’和‘尤斯迈特金’的果实综合品质表现居中,而‘探戈’和‘W.默科特’的果实综合品质表现劣于其他4个品种。【结论】因子分析结合聚类分析可实现柑橘品质的综合评价,为筛选优新柑橘品种提供理论依据。     

柑橘磷酸蔗糖合酶基因CsSPS的鉴定和表达

为探索柑橘磷酸蔗糖合酶(sucrose-phosphate synthase,SPS)基因特性及其在果实发育和成熟过程中的表达,从甜橙基因组中鉴定了4个SPS基因(CsSPS1～CsSPS4)。它们分布在不同染色体上,属于3个不同的亚家族,均含有SPS家族的特征功能域。定量PCR分析表明,4个CsSPS在所检测的组织中均有表达,其中CsSPS4具有明显的果实特异表达特点。进一步研究发现,CsSPS3和CsCSPS4在‘融安金柑’和‘滑皮金柑’果实发育过程中的表达量高于CsSPS1和CsCSPS2。此外CsSPS4在果皮和果肉中的表达量均随着果实发育迅速升高,推测其在金柑果实蔗糖的合成和积累中起关键作用。     

叶面铁肥对浙江海涂地缺铁‘瓯柑’叶片及果实的影响

【目的】针对浙江海涂地种植柑橘易出现缺铁的症状,筛选出适合海涂地条件下矫正‘瓯柑’缺铁失绿症的铁肥。【方法】采用叶面喷施法,对8 a(年)生‘瓯柑’树分别施用相同浓度的Fe SO4和3种自配铁肥EDTA-Fe、Vc-Fe、有机液-Fe,研究不同叶面铁肥对‘瓯柑’叶片和果实铁含量、叶片叶绿素含量及果实品质的影响。【结果】浙江海涂地种植条件下,叶面喷施铁肥可显著增加‘瓯柑’叶片和果实中有效铁含量,提高幅度分别为53.9%~91.6%和28.7%~83.2%,其中以Vc-Fe肥效果最明显,叶片和果实分别比对照提高91.6%和83.2%,达到113.91 mg·kg~(-1)和11.38 mg·kg~(-1),叶片含量位列柑橘叶片诊断标准的适量水平。喷施铁肥可增加‘瓯柑’叶片叶绿素含量,叶绿素a、b及总量增加幅度分别为4.1%~24.7%、6.8%~32.2%、4.7%~26.5%,其中Vc-Fe肥处理分别比对照提高24.7%、32.2%、26.5%。叶面喷施铁肥还可提高‘瓯柑’果实品质,果实可溶性固形物含量和可溶性糖含量比对照分别增加4.6%~11.6%和6.2%~13.4%,其中以有机液-Fe肥处理效果最佳,可溶性固形物含量和可溶性糖含量分别比对照提高1.10和0.93个百分点。【结论】本研究中Vc-Fe肥提高‘瓯柑’叶片和果实铁含量幅度最大,这与维生素C抑制铁离子氧化、延长二价铁的有效时间有关,有机液-Fe肥处理对于提高‘瓯柑’果实可溶性固形物含量和可溶性糖含量及叶片复绿具有明显作用,其原因除了有机液-Fe肥中的铁元素外,还可能与含有大量的有机质可促进叶片生长和吸收有关。此研究结果可为研发适合浙江海涂地条件的柑橘专用铁肥提供参考。     

融安滑皮金橘与阳朔金柑落花落果规律观察研究

对融安滑皮金橘和阳朔金柑2个金柑品种的落花落果规律进行了观察研究.结果表明：融安滑皮金橘和阳朔金柑落蕾落花时间均从6月上旬开始,融安滑皮金橘和阳朔金柑整个落蕾落花曲线均呈多峰型曲线,高峰期集中在6月下旬至7月上旬,融安滑皮金橘在8月上、中旬还有一次明显的高峰,而阳朔金柑却没有这次高峰,且融安滑皮金橘落蕾落花总量多于阳朔金柑.融安滑皮金橘和阳朔金柑第1、2批果均有1个落果高峰,融安滑皮金橘第1、2批果落果高峰在6月下旬,阳朔金柑第1、2批果落果高峰在6月下旬至7月上旬,融安滑皮金橘第1、2批果落果均比阳朔金柑少;融安滑皮金橘第3、4批果有明显的落果高峰,不同年份落果高峰时间有所不同,阳朔金柑第3、4批果落果量较融安滑皮金橘少,落果高峰不明显.     

优质金柑品种——融安滑皮金桔

融安金柑栽培历史悠久 ,久负盛誉。 1981年 ,科技人员在大将镇发现并选育成功融安滑皮金桔 ;1984年经县经济作物站及柳州地区农科所鉴定 ,全县开始推广栽培。经过十多年的栽培观察 ,本品种性状稳定 ,丰产性好 ,品质极佳。由于栽培容易 ,果大质优 ,商品性好 ,售价高于普通金柑 2～ 3倍 ,附近金柑产区纷纷引进融安滑皮金桔进行栽培。1　植株性状1 1　叶　单叶互生 ,微有叶翼。叶片椭圆形 ,长 6 8～ 7 5ｃｍ ,宽 2 9～ 3 4ｃｍ ,厚 0 0 35～ 0 0 4 0ｃｍ。叶片比普通金弹略小 ,稍厚 ,向内微卷 ;叶脉不明显 ,挥发性芳香油含量极低 ,咀嚼有甜…     

江西省6种宽皮柑橘类黄酮及挥发油成分的研究

【目的】对江西省6种主要宽皮柑橘‘南丰蜜橘’大果系、‘南丰蜜橘’小果系、‘南丰蜜橘’早熟系、‘新余蜜橘’、‘三湖红橘’、‘樟头红’中的类黄酮及挥发油成分进行测定分析,为江西省宽皮柑橘资源的充分利用提供依据。【方法】通过高效液相色谱法(HPLC),以新橙皮苷、橙皮苷、柚皮苷为标准品测定江西省6种宽皮柑橘果皮、果肉中类黄酮成分,采用水蒸气蒸馏法提取6种果皮挥发油,利用气相色谱-质谱联用技术(GC-MC)分离鉴定挥发油组分。【结果】6种宽皮柑橘果皮、果肉中类黄酮均只检测到橙皮苷,且果肉中含量均显著低于果皮中橙皮苷含量,果皮中橙皮苷含量顺序为‘南丰蜜橘’大果系‘南丰蜜橘’早熟系‘樟头红’‘南丰蜜橘’小果系‘三湖红橘’‘新余蜜橘’,果肉中橙皮苷含量顺序为‘南丰蜜橘’早熟系‘三湖红橘’‘南丰蜜橘’小果系‘新余蜜橘’‘樟头红’‘南丰蜜橘’大果系;6种宽皮柑橘果皮中挥发油鉴定出主要风味物质的数量依次为‘南丰蜜橘’大果系20种、‘南丰蜜橘’小果系19种、‘南丰蜜橘’早熟系11种、‘新余蜜橘’19种、‘三湖红橘’13种、‘樟头红’13种,且挥发油中均以萜烯烃类化合物为主要风味物质,除‘南丰蜜橘’大果系以萜品烯含量最多,为38.258%,其余均以D-柠檬烯含量最多,超过80%。【结论】江西省宽皮柑橘中主要类黄酮为橙皮苷,不同品种、部位的橙皮苷含量及果皮中挥发油成分存在显著差异。     

广西柑桔生产概况、分布及特点

一、生产概况及分布 广西是全国柑桔主要产区之一,裁培历史悠久,品种资源丰富。据调查有柑桔、金柑、枳三个属,一百多个品种、品系。在桂北、桂中有野生柑桔资源,如龙胜及猫儿山海拔1100～1700米的原始森林中有野生宜昌橙,贺县姑婆山海拔600～800米的深山密林中有野生皱皮柑、元桔等。主要裁培品种有新会橙、暗柳橙、雪柑、化州橙、夏橙、温州蜜柑、栟柑、大红柑、南丰蜜桔等;地方品种有上龙橙、灌阳橙、隆林橙、南丹黄果等,各有其独特的优良性状;宽皮柑桔类地方品种有沙柑、扁柑;柚类中的沙田柚是广西名产,在全国果品鉴定会上名列前茅,在国内外享有很高声誉。融安金柑也是闻名全国的优良品种之一。     

宽皮柑橘果实的剥皮性及与细胞壁多糖的关系

以‘向山’(Citrus reticulata Blanco‘Mukaiyama’)、‘克里曼丁’(C. clementina hort.ex. Tanaka)、‘弗莱蒙特’(C. reticulata Blanco‘Fremont’)和‘药香柑’(C. reticulata Blanco‘Yaoxianggan’)4种宽皮柑橘为试材,比较分析了果实成熟过程不同时期的剥皮性、果皮形态、细胞壁多糖含量、细胞壁多糖降解相关酶活性及部分基因表达的变化。在果实成熟过程中,反映剥皮性的两个力学指标(果皮粘力和硬度)均显著下降。不同材料的剥皮性有所差异,‘药香柑’与‘弗莱蒙特’的果皮粘力较高,‘克里曼丁’和‘向山’较低;‘药香柑’的果皮硬度最高,‘弗莱蒙特’次之,‘克里曼丁’和‘向山’最低。相关性分析表明果皮粘力和硬度呈显著正相关,且易剥皮性状与低水平的细胞壁多糖物质和高水平的细胞壁多糖降解相关酶活性密切相关。在果实成熟过程中,4种柑橘果皮中的多种细胞壁多糖组分的含量均有不同程度的下降,参与细胞壁降解的酶活性及部分编码基因表达水平随之上升,另有部分编码木聚糖酶抑制蛋白和果胶甲酯酶抑制蛋白的基因下调...     

柑橘CsNCED3-2的克隆及其响应溃疡病菌侵染的表达分析

柑橘溃疡病是世界柑橘的一种重要病害,对柑橘产业造成严重的经济损失。对柑橘中9–顺式–环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)基因家族进行注释,并克隆出受柑橘溃疡病菌诱导表达的CsNCED3-2,确定了其表达模式。从柑橘全基因组公共数据库共注释出14个NCED基因家族成员,根据系统发育树和功能结构域将其分为4个亚类;CsNCED3-2其序列全长2 377 bp,开放阅读框1 830 bp,编码609个氨基酸,属于RPE65超家族成员和类胡萝卜素双加氧酶家族成员,是非分泌性蛋白;在‘晚锦橙’和‘金弹’叶片注射溃疡病菌后的各个时间点,‘晚锦橙’叶片中CsNCED3-2的相对表达量总体高于‘金弹’,并且两品种的相对表达变化呈相反趋势;与茎、叶和种子相比,CsNCED3-2在两品种果皮中表达量较高;两品种的CsN CED3-2上游启动子均含有参与植物激素和逆境应答相关的顺式作用元件ABRE(脱落酸响应)、TCA-element(水杨酸响应)、MYC/MYB(干旱响应)等,但数量和类型存在差异。     

黄龙病菌胁迫下‘锦橙’CsCalS5表达和胼胝质沉积的初步分析

胼胝质合成酶是控制胼胝质合成的关键酶,在植物生长发育和抗逆胁迫中具有重要作用。克隆并分析‘锦橙’胼胝质合成酶基因CsCalS5及其启动子序列,实时荧光定量PCR检测CsCalS5的组织表达模式以及植物生长调节剂、黄龙病菌和柑橘溃疡病菌的诱导表达模式,并通过组织切片观察感染黄龙病和柑橘溃疡病‘锦橙’叶脉胼胝质的沉积。结果显示,CsCalS5启动子序列中含有脱落酸和病原菌的响应元件;CsCalS5编码1 952个氨基酸含有保守结构域FKS1和β–1,3–葡聚糖合成酶功能域的跨膜蛋白;CsCalS5在‘锦橙’的茎中高表达,且受脱落酸的诱导;黄龙病菌侵染后叶脉韧皮部的胼胝质沉积明显,患病叶片CsCalS5的表达量是健康对照的4.02倍;柑橘溃疡病菌侵染叶片后,叶脉韧皮部胼胝质沉积无明显增加,且CsCalS5的表达量与健康对照无显著差异。综上,黄龙病菌可能通过上调‘锦橙’CsCalS5的表达促进韧皮部胼胝质的沉积,从而增强其防御能力,且这种抗性可能受到脱落酸的调控。     

浙江柑橘产区柑橘黄脉病毒的发生、分布与分子特性研究

运用RT-PCR技术对采自浙江12个柑橘产地的181份柑橘样品进行检测,首次从浙江的‘佛手’柑(Citrus bergamia)和‘红美人’橘(C.reticulata)上检测出柑橘黄脉病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV),其检出率分别为68.0%和47.2%。选取4个CYVCV毒株与11个已知CYVCV毒株进行全序列分析,结果显示CYVCV序列保守性较高,所有15个CYVCV毒株的核苷酸和氨基酸序列相似性分别为96.9%~99.8%和97.9%~99.4%。虽然采自浙江的4个CYVCV毒株在进化树中聚成单独的簇,但CYVCV毒株间的亲缘关系可能不与其采样地的存在相关性。     

6种宽皮柑橘果皮精油GC-MS鉴定与组分差异分析

【目的】研究宽皮柑橘果皮精油组分及含量的差异性,为宽皮柑橘亲缘关系鉴定提供更多依据。【方法】以相同生境下不同宽皮柑橘原种成熟果实果皮为材料,利用水蒸气蒸馏法进行‘南丰蜜橘’(Citrus reticulata)、温州蜜柑(C.unshiu)、‘新生系3号椪柑’(C.reticulata)、‘莽山野柑’(C.mangshanensis)、蕉柑(C.tankan)和红橘(C.tangerina)果皮精油提取,运用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)分析和鉴定其挥发性成分,采用SPSS 19.0对不同物种果皮精油挥发性成分组成规律进行主成分分析和聚类分析。【结果】不同宽皮柑橘果皮精油含量存在显著差异,蕉柑最高(1.56%),‘新生系3号椪柑’最低(0.77%)。在6种宽皮柑橘原种果皮精油中共鉴定出55种挥发性成分,其中烯烃类29种、醇类11种、醛类8种、酯类3种、酮类1种、醚类1种、酚类2种。主成分分析和聚类分析结果表明,6种柑橘品种可分为3类,第1类为温州蜜柑、蕉柑和‘南丰蜜橘’,属于柠檬烯型;第2类为‘新生系3号椪柑’和红橘,属于柠檬烯/γ-萜品烯型;第3类为‘莽山野柑’,为柠檬烯/β-月桂烯型。【结论】从6种宽皮柑橘原种果皮精油挥发性成分组成规律可知,温州蜜柑和‘南丰蜜橘’亲缘关系较近,蕉柑次之,3者聚为一类;‘新生系3号椪柑’和红橘作为古老栽培品种资源亲缘关系较近;‘莽山野柑’作为野生宽皮柑橘资源,单独聚为一类。     

荔枝多酚氧化酶基因启动子克隆与功能分析

【目的】获得多酚氧化酶(PPO)基因启动子序列并初步分析其功能,为进一步研究PPO基因表达规律及应用PPO基因启动子提供基础。【方法】通过TAIL-PCR和接头PCR方法相结合获得荔枝PPO基因启动子序列并进行生物信息学分析,序列缺失结合瞬时表达法分析核心启动子调控元件。【结果】从‘妃子笑’荔枝基因组中克隆获得了1048bp的荔枝PPO基因启动子序列,含有多种顺式作用元件。不同长度的启动子序列均能驱动GUS基因在‘妃子笑’、‘无核’和‘紫娘喜’荔枝叶片和果皮中表达,但都不能驱动GUS基因在‘妃子笑’和‘紫娘喜’荔枝种子中表达。【结论】获得了荔枝PPO基因启动子序列并获得了其调控基因表达的部分规律。     

柑橘轮斑病抗性鉴定方法的建立

【目的】探究柑橘轮斑病最适宜接种条件,建立一种快速鉴定柑橘轮斑病抗性的方法。【方法】以柑橘轮斑病菌为接种体,运用离体叶片接种法,在室内不同温度下对离体柠檬叶片的不同部位进行接种,探讨柑橘轮斑病的最适宜接种条件。随后采用前期确立的接种体系对27个主栽柑橘品种进行轮斑病抗性评价。【结果】针刺接种易发病,最适宜的接种温度为10℃,最适宜接种部位为叶片背部。27个柑橘品种中沙田柚为免疫品种,091无核沃柑最易感病。【结论】研究建立了叶片背面针刺、10℃条件下保湿培养28 d的抗性鉴定体系。并利用此技术体系鉴定出柚类抗病力最强,杂柑类相对最感病,而橙类、柑类与橘类抗性处于柚类与杂柑类中间。     

‘Cocktail’葡萄柚黄龙病菌检测及鉴定

采用直接组织免疫印迹(Direct tissue blot immunoassay,DTBIA)和常规PCR技术,对采自广东梅州新建‘Cocktail’葡萄柚园内表现疑似黄龙病症状的样品进行检测。DTBIA检测发现疑似样品的韧皮部存在特征性紫红色反应,与黄龙病阳性对照反应一致。PCR检测发现枝条、叶片和果实样品中均检测出了黄龙病菌特异性条带,其中果蒂、中柱和种皮内病菌含量较高。进一步测序分析发现,来自‘Cocktail’葡萄柚病样的16Sr DNA和ef Tu基因与NCBI中的柑橘黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)对应基因的序列相似性均为100%,证实‘Cocktail’葡萄柚感染了柑橘黄龙病菌亚洲菌株。     

基于主成分分析的不同品种柑橘制汁适应性研究

【目的】为了筛选出适合生产NFC果汁的柑橘品种,以浙江地区主栽的19个柑橘品种为原料,进行了各个品种的制汁适应性研究。【方法】采用常规方法分析了各个柑橘品种的出汁率、果肉率等品质特性,以及柑橘汁的维生素C、可溶性固形物、可滴定酸、可溶性糖、总酚、总黄酮等营养理化指标,对比了不同品种柑橘之间的差异,然后采用主成分分析法(PCA)建立了柑橘品质评价体系,作为评价不同品种柑橘汁综合品质的依据。【结果】不同柑橘品种的品质存在显著差异‘,红美人‘’山下红‘’宫川‘’天草‘’尾张温州蜜柑’等品种出汁率高,具有较大的果汁加工潜力,但其总黄酮、总酚、维生素C这3项指标含量略低,因此口感有所欠缺。经由主成分分析,从9项原始指标提取出3个主成分,累计方差贡献率达到86.728%。以3个主成分及单个主成分所对应的特征值占所提取主成分总的特征值之和的比例作为权重,构建了柑橘综合品质评价模型,作为筛选适合制作柑橘汁的柑橘品种的方法。【结论】根据该评价模型计算浙江地区19个柑橘品种的综合得分,可将不同品种的柑橘分为三类。分值较高的是‘冰糖橙‘’纽荷尔脐橙‘’瓯柑’,分值较合适的是‘丽椪2号‘’山下红‘’满头红‘’鸡尾葡萄柚‘’中育橙’。通过该评价体系,可以较为便捷地选取出营养价值较高且风味口感较好的柑橘品种。同时考虑果肉率、出汁率等因素,可以提供直观的柑橘品质评价,为企业选取适合柑橘汁制备原料品种提供依据。     

柑橘胼胝质合成酶基因家族的表达分析

胼胝质由胼胝质合成酶合成,胼胝质沉积是植物对入侵病原的防御反应。为了探索胼胝质合成酶(Callose synthase,CalS)基因在柑橘中对黄龙病的应答情况,从甜橙基因组中筛选并利用生物信息学分析了柑橘胼胝质合成酶(CsCalS)家族的12个基因。这些基因编码的氨基酸序列与拟南芥中的胼胝质合成酶具有较高的同源性。荧光实时定量PCR结果显示,CsCalS5和CsCalS12在柑橘健康叶片中的表达量高于其他胼胝质合成酶基因。比较黄龙病感病材料和健康对照材料,发现CsCalS5、CsCalS7和CsCalS8在感病的‘砂糖橘’和‘强德勒’柚中均上调表达,可能参与柑橘对黄龙病病原的应答反应。