甘蓝显性春性不育基因的延长随机引物扩增DNA（ERPAD）标记

获得了一个与甘蓝显性雄性不育基因连锁的延长随机引物扩增DNA（Extended Random Primer AmplifiedDNA,ERPAD)标记EPT11900。EPT111900是在与甘蓝显性雄性不育基因连锁的RAPD标记OT11900的基础上,通过逐步筛选3’端延长的随机引物的方法转化而成的稳定性和特异性都得到增强的新标记,这种标记的稳定性和特异性接近SCAR标记,但不埯要克隆和测序,该方法首先根据OPT11的序列合成3’端添加A、T、C、G4种碱基的4个引物,组成10个引物对,以不育池为模板筛选出OT11-C OT11-G为唯一能够扩增长度与OT11900相同的一个片段的引物对,在此引物对基础上,又添加4种碱基得到8个新的引物,相互组合成16个引物对,进一步以不育池为模板筛选出OT11-CT OT11-GA,在严格条件下,它可特异扩增长度与OT11900相同的一个片段EPT11900。通过分离群体分析证实这一片段与OT119000处于同一位点。     

一个与甘蓝显性雄性不育基因连锁的RAPD标记

报道了一个与甘蓝显性雄性不育基因连锁的ＲＡＰＤ标记ＯＴ１１９００,该标记与雄性不育基因之间的遗传距离为８．０ｃＭ。     

利用分子标记EPT11_(900)辅助甘蓝显性雄性不育基因转育

利用与甘蓝显性雄性不育基因（Ｍｓ）连锁的延长随机引物扩增ＤＮＡ（ＥＲＰＡＤ）标记ＥＰＴ１１９００对３３个甘蓝自交系的多态性进行了分析。ＥＰＴ１１９００主要分布在各种早熟甘蓝中,很少存在于鸡心类型或晚熟扁圆类型甘蓝中。该结果表明：它可用于辅助大多数鸡心型或晚熟扁圆类型甘蓝的Ｍｓ基因转育;ＥＰＴ１１９００在辅助两个甘蓝自交系回交三代及两个青花菜自交系回交一代的Ｍｓ基因转育中,预测的准确性超过９０％。     

一个用于甘蓝显性雄性不育基因转育辅助选择的SCAR标记

一个与甘蓝显性雄性不育基因连锁的ＲＡＰＤ标记ＯＴＩＩ９００被转化为显性的ＳＣＡＲ（Ｓequence Characterized Amplified Region) 标记STII900,它可用于甘薯显性雄性不育基因转育辅助选择。     

桃果实ACC合酶cDNA的克隆

根据其它植物ＡＣＣ合酶氨基酸保守区设计两组简并引物,用套式ＰＣＲ技术从桃成熟果实ｃＤＮＡ中扩增出１．１ｋｂ大小特异性片段,将其克隆至ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,对重组克隆ｐＰＡＣＳＩ进行全序列测定表明,插入片段全长１１００个碱基,编码３６６个氨基酸,该基因与番茄、笋瓜、小西葫芦、康乃馨、苹果ＡＣＣ合酶ｃＤＮＡ氨基酸序列同源性分别为７２．７％,７１．３％,７１．１％,６９．１％,６５．４％。ＲＮＡ点杂交表明ｐＰＡＣＳＩ基因随着桃果实成熟表达活性增强,乙烯处理能诱导桃果实该基因的表达。     

猕猴桃ACC氧化酶cDNA克隆及全序列测定

从‘秦美’猕猴桃（ＡｃｔｉｎｉｄｉａｄｅｌｉｃｉｏｓａＣ．Ｆ．ＬｉａｎｇｅｔＡ．Ｒ．Ｆｅｒｇｕｓｏｎ．ｃｖ．Ｑｉｎｍｅｉ）呼吸高峰跃变初期的果实中提取总ＲＮＡ，然后纯化得ｍＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）作为引物反转录合成ｃＤＮＡ第一链，以此为模板，用人工合成的寡聚核苷酸作为引物进行扩增，得到大小约０．９５Ｋｂ基因片段，并将其克隆到ｐＧＥＭ－５ｚｆ（＋）载体上。经限制性内切酶图谱分析，组建亚克隆并进行了全序列测定，在其开放读码框架内，由９５７个ｂｐ编码３１９个氨基酸组成，该ｃＤＮＡ与海沃德ＡＣＣ氧化酶ｃＤＮＡ的核苷酸和氨基酸残基同源率分别达９５．０１％和９５．６１％，证明己克隆到完整的秦美猕猴桃ＡＣＣ氧化酶基因编码区。     

一个与甘蓝显性雄性不育基因连锁的RFLP 标记

 运用RFLP 技术, 采用集群分析(BSA) 法进行了甘蓝显性雄性不育基因连锁的分子标记研究, 结果表明, 该显性不育基因与RFLP 标记pBN11 连锁, 经两个回交群体检测, 其遗传距离分别为5.189和1.787 cM, 首次将该不育基因被定位于第1 和第8 条染色体上。     

PEG渗调引发处理对菜薹老化种子DNA损伤的修复作用

利用ＲＡＰＤ技术对菜薹人工老化种子ＤＮＡ的损伤及ＰＥＧ渗调引发处理的修复作用进行了研究。在６１种引物中，有６种在菜薹人工老化的种子上获得了基因组ＤＮＡ指纹图谱，平均每种引物扩增的总ＤＮＡ带数为２．１６，多态性ＤＮＡ带数为１．１７，有１１种引物在ＰＥＧ渗调引发的菜薹老化种子上获得了基因组ＤＮＡ指纹图谱，平均每种引物扩增的总ＤＮＡ带数为３．９１，多态性ＤＮＡ带数也是３．９１。人工老化对菜薹种子基因组Ｄ     

宁夏羊角椒雄性不育基因ISSR的分子标记

以宁夏羊角椒雄性不育系为试材,应用ISSR技术,对其不育系及其相应的可育系基因组DNA进行了比较分析,从50条随机引物中筛选了35条引物在两系之中都获得了ISSR-PCR扩增产物。结果表明:在不育系中获得4条稳定扩增的特异片段ISSR-10850、ISSR-13850、ISSR-14800和ISSR-15180,初步认定这可能是导致宁夏羊角椒雄性不育系花粉败育的不育基因相关的分子标记。     

甘蓝细胞质雄性不育材料的分子鉴定

根据Genebank中orf224和orf138基因序列的保守区设计特异引物,对2个甘蓝不育材料PM、QM的mt DNA进行PCR扩增。试验结果表明,orf138特异引物对2个不育材料的mt DNA扩增出350 bp大小的清晰条带;不育材料的特异片段与萝卜Ogu CMS所具有的Ogu orf138基因同源度达92.55%,长度均为297 bp,因此,初步推断2个不育材料是Ogura胞质雄性不育类型。     

与枣核性状相关联的RAPD标记的筛选

用 ３４０个随机引物，对枣有核池和无核池进行了扩增，共扩增出 ３ ３４８条 ＤＮＡ带，选出 １１个多态性引物，进一步用这１１个引物进行个体验证，发现只有引物 Ｓ１５４在金丝小枣的 １６个类型中（占供试有核类型 ８８．２１％）扩增出一条８２０ ｂｐ的特异带，而无核小枣的６个类型中（占供试无核类型８５．７１％）无此特异带。综合分析初步认为，Ｓ１５４８２０是与枣有核性状相关的分子标记，该标记需进一步验证。     

甜瓜分子标记纯度鉴定研究

以2个甜瓜品种西域雪1号、西域雪2号及其亲本为试材,建立并优化了单粒种子DNA快速提取法和适合甜瓜的RAPD、SSR分子标记杂交种纯度鉴定体系。从100条随机引物中筛选出G17用于西域雪2号纯度鉴定,可有效区分母本和杂交种。从19对SSR引物中筛选出9对稳定扩增、多态性丰富的引物构建西域雪1号、西域雪2号的SSR指纹图谱。SSR分子标记用较少引物即可扩增出品种特异性条带,且多数F1代带型呈双亲互补,非常适合种子纯度鉴定。同时,使用高浓度、非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,条带更清晰,可区分只相差1个碱基的扩增片段,同RAPD相比,SSR分子标记更适合甜瓜杂交种纯度快速鉴定。     

与辣椒抗蚜虫基因相关的RAPD标记筛选及其SCAR转化

以辣椒抗蚜虫野生种质03-C79′与感蚜品种A0003杂交并自交得到F2为试材,应用RAPD分子标记技术和BSA混合群体分组分析法寻找与辣椒抗蚜虫基因相关的分子标记。从200条RAPD引物中筛选到1个辣椒抗蚜虫性状特异的多态性引物RA750。经F2单株验证,RA750的扩增片段在抗蚜虫植株中稳定出现,而在感蚜植株中没有。利用JoinmapV3.0软件计算标记与基因间的遗传距离为6.03 cM。根据对该片段的序列分析结果重新设计了1对引物,将RAPD标记转化成了SCAR标记,并命名为RA750-S。     

桃果实有毛/无毛性状的SCAR标记

 以桃品种‘京玉’和‘美味’的正反交69株F1 群体为试材, 利用RAPD技术扩增出了与桃果实有毛/无毛性状(G/ g) 连锁的2 258 bp的多态性片段, 经克隆、测序后, 根据获得的序列重新设计了两对引物进行SCAR转化。引物对BFP94 /BFP95在有毛和无毛个体中均扩增出了2 258 bp的片段, RAPD显示的多态性消失。利用引物对BFP96 /BFP98成功将RAPD标记转化成了SCAR标记, 并命名为SCP2022258。该标记仅在果实有毛的个体中出现, 与有毛/无毛性状的连锁距离为718 cM, 且扩增稳定, 为桃果实有毛/无毛性状育种的分子标记辅助选择奠定了基础。     

番木瓜雄性性别的RAPD和SCAR标记

利用RAPD标记技术鉴定番木瓜雄性性状。在214条随机引物中,用引物Z18扩增得到1条雄性多态性片段,此片段存在于试验所用材料的所有雄株中而两性株和雌株没有,将其命名为Z18-1000。根据对该片段的序列分析结果重新设计了2对引物将RAPD标记成功转化成了SCAR标记,并命名为SD-1000。     

核桃早实性状的RAPD分析

 用BSA (Bulked Segregant Analysis) 法获得了与核桃早实性状相关的RAPD 标记OPB208₉₀₀。混合分离群体的混合样来自早实品种辽1 的自然授粉实生后代。用220 个随机引物扩增早实和晚实混合样, 只有引物OPB208 ( 5. GTCCACACGG 3. ) 在早实混合样及其个体上扩增出了约900 bp 的特异带OPB208₉₀₀, 而在晚实混合样及其个体上无此特异带。用OPB208 为引物, 以19 个品种和3 个株系的DNA 为模板进行扩增,特异带OPB208₉₀₀在17 个早实品种中的12 个个体上出现, 而5 个晚实品种( 系) 上均无此带。     

DNA fingerprinting and genetic diversity analysis of late-bolting radish cultivars with RAPD,ISSR and SRAP markers

Three molecular marker systems, RAPD (random amplified polymorphic DNA), ISSR (inter-simple sequence repeat) and SRAP (sequence-related amplified polymorphism), were employed for identification and genetic diversity analysis of 35 elite late-bolting radish cultivars. Detected by 35 RAPD primers, 22 ISSR primers and 17 SRAP primer combinations, the proportions of polymorphic bands were 85.44%, 85.2% and 85.41%, respectively, and the mean genetic similarity coefficients between pairs of genotypes were 0.781, 0.787 and 0.764, respectively. Each of the three molecular marker systems can identify all the cultivars. Five sets of three-RAPD primers, 3 sets of three-ISSR primers and 16 sets of three-SRAP primer combinations were able to distinguish all the cultivars. A linear relationship was observed between Resolving power (Rp) of a primer and its ability to distinguish genotypes. The 35 cultivars were clustered into three major groups based on the RAPD, ISSR and marker combination data with UPGMA, which are in high accordance with their own origins and main characteristics. The results demonstrated that these three marker systems could be useful for identification and genetic diversity analysis of radish cultivars.     

中国野生葡萄果实抗白腐病基因的分子标记

 以感病×抗病的葡萄种间杂交组合白玉霓×塘尾的F₁ 代17 个单株及塘尾自交一代16 个单株为试材, 采用BSA 法和RAPD 技术, 通过对155 个随机引物的筛选, 获得了一个与中国野生葡萄抗白腐病基因连锁的RAPD 标记OPP09-760 , 并在中国野生葡萄8 个种的32 个株系及欧洲葡萄16 个品种中得到验证。进一步将该DNA 片段克隆并测序, 根据两端序列, 设计了一对长26 bp 的特异引物分别扩增供试材料, 获得了与该RAPD 标记相同大小的DNA 片段, 成功地将RAPD 标记转化为SCAR 标记, 可以用作抗白腐病基因的分子辅助选择的依据。