五类马铃薯病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

为提高马铃薯病毒检测效率和检测通量,采用酶联免疫吸附法(ELISA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测技术对马铃薯苗中X病毒、Y病毒、S病毒、卷叶病毒及纺锤状块茎类病毒进行检测,以期构建五种马铃薯病毒的检测方法。结果表明,qRT-PCR法阳性检测率为6%,灵敏度比DAS-ELISA法高。qRT-PCR检测方法特异性强,重复性好,灵敏度高,可有效检测马铃薯的五种病毒。     

以实时荧光定量PCR技术检测转基因玉米MON88017

根据转基因玉米MON88017的左侧侧翼序列和玉米内标基因(zSSIIb)分别设计特异性引物及Taqman探针,通过实时荧光PCR技术建立MON88017的定量特异性检测方法。利用含有内标基因和侧翼序列的标准质粒分子,建立了玉米内标基因和侧翼序列的标准曲线。检测了5个已知MON88017含量(0.01%、0.05%、0.10%、0.50%、1.00%)的混合样品中的转基因含量,结果表明检测底限可以达到19~30个阳性拷贝。该研究建立的实时荧光定量PCR技术灵敏度高、特异性强。     

实时荧光PCR技术定量检测转基因大豆方法的研究

以转基因大豆Roundup Ready为材料，通过特异性引物和探针，对转基因大豆中外源基因cp4-epsps进行了定量检测。研究发现Taqman荧光探针法和SYBR荧光染料法均可作为转基因大豆定量检测的方法，但前者比后者具更高的检测灵敏度和精确度，其检测阈值可降到0.05%，变异系数为0.09%~0.53%。在此基础上，建立和优化了Taqman探针实时荧光定量PCR检测技术体系，有助于提高转基因作物及产品的生物安全性定量检测的准确度和可靠性。     

镰孢菌属实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为了建立一种快速检测镰孢菌属的方法。根据Fusarium翻译延伸因子(TEF-1α)基因序列,设计并筛选其特异性引物F8-1/F8-2,能从靶标基因组DNA中特异性扩增出大小为187 bp的目的片段,建立Fusarium荧光定量PCR(RT-PCR)检测体系的灵敏度比常规PCR高104倍,且特异性良好。利用该反应体系检测不同湿度环境下病残体和土壤病残体DNA含量的动态变化。结果表明:病残体及土壤病残体DNA初始拷贝数分别为6. 90×10~(11),1. 06×10~(12)拷贝数/g,经过温度27℃、80%湿度下处理30 d病残体DNA含量下降至5. 55×10~8和0拷贝数/g,而在温度27℃、20%湿度下含量分别为8. 04×10~9,1. 30×10~9拷贝数/g。因此,建立的Fusarium实时荧光定量PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速准确地定量检测病残体DNA的含量,为瓜类根腐病的早期预防和流行监测提供了有效的技术手段。     

基于实时荧光定量PCR对转基因樱桃番茄外源基因拷贝数的检测

转基因植物中外源基因的整合拷贝数是影响外源基因表达水平及遗传稳定性的重要因素之一。本研究利用实时荧光定量PCR技术并以番茄抗坏血酸过氧化物酶apx(ascorbate peroxidase)基因和光诱导的早期蛋白elip(early light inducible protein)基因为内参开展对12株转基因樱桃番茄外源基因拷贝数的检测。研究结果表明:常规番茄使用的内参基因apx在樱桃番茄中可能以多拷贝形式存在;以elip基因为内参检测到转基因植株内整合的拷贝数为0~20不等,其中4株在普通PCR检测中存在假阳性,且80%的转基因植株发生了基因重排现象。     

梨小食心虫实时荧光PCR检测技术的建立与验证

梨小食心虫（Grapholitha molesta）为我国常见蛀果性害虫,与其他梨果害虫的组织形态非常相似,仅凭形态学特征难以区分,需建立实时荧光PCR检测方法在基因水平上进行鉴定。通过样品核酸提取与质控,设计并验证荧光探针特异性,进一步通过优化反应条件和反应体系,结合特异性分析、灵敏性比对和盲样测试开发了梨小食心虫实时荧光定量PCR检测方法。结果表明：方法特异性强,重复性好（重复间变异系数为0.055~0.359）,可靠性高（标准曲线中的R2值为0.991）,检出限低（最低检出限3 pg/μL）,盲样测试结果与形态学鉴定结果一致,能满足日常检验检疫需求。该操作方法简单易行,检测时限短（约3 h）,通量高,特别适合于大批量的抽样检查,可应用于梨小食心虫的检疫工作。     

荧光定量PCR技术研究进展及其在植物遗传育种中的应用

荧光定量PCR（Fluorescence in Quantitatire PCR，FQPCR）技术是20世纪90年代发展起来的一种新的核酸定量技术，具有高准确性、高特异性等特点，在生物科学和医学研究中发挥着极大的作用。本文综述了荧光定量PCR技术的原理、荧光探针类型及其在植物遗传育种中应用。     

定量PCR技术检测转基因玉米的研究

以Bt176转基因玉米为材料,通过使用特异性引物和染料,对转基因玉米中外源基因cry1Ab进行了定量检测。研究发现,在优化检测体系的基础上,SYBR荧光染料法定量检测转基因玉米,具有更高的检测灵敏度和精确度,其检测阈值可降到0.05%,变异系数为0.09%~0.53%。     

实时荧光定量PCR技术及其在水产上的应用

摘要：实时荧光定量PCR技术是在PCR技术基础上结合荧光染料发展起来的一种核酸定量技术,能快速、灵敏,并有效地对核酸进行定量检测,已被广泛应用于生命科学的各领域。本文就实时荧光定量PCR的检测原理、荧光染料,管家基因以及其在水产上的应用作一阐述。     

激光显微切割技术在植物生物学研究中的应用

植物组织的发生、分化和生理响应是复杂多因素调控的结果,要在分子水平认识其机理,就必须分析相应细胞的代谢物和基因表达情况,该步骤的前提是精确地获得这些细胞。应用激光显微切割技术(Laser Microdissection,LMD)可以在显微镜下快速准确地分离、获取单一的细胞类群,甚至单个细胞,成功地解决了组织中细胞的异质性问题。文章归纳了LMD技术的一般操作流程,对比分析了不同操作步骤的优缺点,对其在植物分子生物学、蛋白质组学、代谢物组学研究中的应用情况作了综述,指出存在问题并展望未来。     

反转录实时定量PCR在植物基因表达分析上的研究进展

近年来,反转录实时定量PCR作为一项新的核酸序列定量分析技术以其定量准确、高灵敏度和高通量等特点,已被广泛的应用于分子诊断、病理分析以及食品安全检测等方面。然而其在植物基因表达水平研究上的报道较为少见。本研究在前人研究基础上,总结了反转录实时定量PCR在植物基因综合表达分析、基因家族表达分析、基因差异表达分析、转基因表达分析等方面的应用;分析了反转录、看家基因选择等影响检测基因表达的因素;指出该技术在重复性、灵敏度、标准化上所存在的问题。随着分子生物技术的发展,反转录实时定量PCR将会在植物遗传育种、植物病理检疫以及分子进化等方面发挥更为广泛的作用。     

乳链菌肽的发酵及分离纯化工艺研究进展

乳链菌肽(Nisin)是由乳酸乳球菌代谢产生的细菌素,是一种天然、安全的生物防腐剂,被广泛应用于食品工业中。本文论述了近年来国内外乳链菌肽发酵及分离纯化工艺的技术概况,并对生产过程中存在的问题进行了分析。     

樱桃冷链物流保鲜技术研究进展

从采后商品化处理、预冷、贮藏、运输、销售及家庭保鲜各环节介绍了国内外樱桃冷链物流研究和应用现状,针对樱桃冷链物流中的突出问题,提出相应的建议,为樱桃冷链物流的研究和应用提供参考。     

核磁共振技术在食品品质分析中的研究进展

核磁共振检测技术是一种新型的食品无损检测技术。介绍了核磁共振技术的基本原理及在食品加工品质分析中的研究应用,并展望了该技术在未来食品加工业中的应用前景。     

何首乌栽培技术研究进展

近年来,随着何首乌需求量的日益增长与何首乌野生资源的日益匮乏,何首乌人工繁殖和栽培显得尤为重要.结合近年来对何首乌的研究情况,总结了何首乌生物学特性、成分与药理以及人工繁殖和栽培技术方面的研究现状,并对今后的研究工作进行了探讨.     

杨梅采后保鲜技术研究进展

分析了杨梅采后变质的主要内外因,综述了低温保鲜、气调保鲜、保鲜剂保鲜以及涂膜保鲜等国内外杨梅保鲜技术研究的最新进展,并提出了目前杨梅保鲜存在的主要问题及发展方向,为今后进一步开展杨梅采后保鲜技术的研究提供参考。     

荔枝果实采后生理及保鲜研究进展

综述了荔枝果实采后生理与保鲜技术的研究现状,并提出了荔枝保鲜技术的发展方向。