白僵菌生防菌株Bb10和4株家蚕来源白僵菌分离株的生物学特性研究

为探明用于生物防治的白僵菌菌株和家蚕来源白僵菌的关系,用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基对来自广西壮族自治区的白僵菌生防菌株Bb10和收集自广西象州、宜州、环江等蚕区的4株家蚕白僵菌分离株进行分离鉴定,并对菌株的生物学特性和毒力进行比较。菌株的鉴定结果表明:象州寺村镇的家蚕白僵菌Bb9和广西生防白僵菌Bb10均为卵孢白僵菌;象州中平镇的家蚕白僵菌Bb3和环江家蚕白僵菌Bb12为球孢白僵菌;宜州家蚕白僵菌Bb11为小球孢白僵菌。上述5株白僵菌的菌落形态、营养生长量、产孢量等生物学性状及对家蚕的毒力存在差异。生长最快的是Bb9菌株和Bb10菌株,且二者的菌落形态均呈棉絮状,但Bb10菌株的分生孢子较Bb9菌株的分生孢子要大很多;产孢量最高的是Bb10菌株和Bb11菌株;Bb3菌株对家蚕的毒力最强,Bb9菌株和Bb10菌株的毒力相对较弱。上述结果暗示广西蚕区白僵病的病原来源非常复杂,部分蚕区的家蚕白僵菌与生防用白僵菌有一定程度的相似性,可作为家蚕白僵病的溯源和防控依据。     

如何防治白僵病?

时下,由于气温高湿度大,农村养蚕发生家蚕白僵病的现象较多,并有蔓延趋势,对农民养蚕增收影响很大,白僵病如何被传染和怎样防治?是蚕农常咨询的问题。　家蚕白僵病是由真菌中的白僵菌分生孢子,借风力传播到桑叶或蚕体上。在气温24℃～28℃、相对湿度85%以上的条件下,白僵菌的分生孢子发芽并侵入蚕体寄生、繁殖、分泌毒素,从而引起蚕儿发病。蚕死后,随着体内寄生菌的增殖逐渐变硬,再过1～2天后,尸体被菌丝和白色粉末状的孢子所覆盖。孢子通过风力扩散到环境中,继续传染。因此,养蚕发生此病,如处理不好,很难控制。其预防措施为:一、严格消毒。…     

生物防治白僵菌与家蚕病原白僵菌的生物学特性初步比较

对广州市森林保护用生防白僵菌Bb2、华南农业大学保存生防用白僵菌Bb7以及收集自广东省化州蚕种场、化州市笪桥村、翁源县硝村等蚕区的3株家蚕白僵菌分离株(Bb8、Bb13、Bb14),分别用PDA培养基进行分离和扫描电子显微镜观察,并对菌株的生物学特性进行初步比较,为开展家蚕白僵病的病原溯源和防控研究,以及为评估蚕区使用白僵菌农药对养蚕生产安全的影响提供实验依据。结果表明,上述5株白僵菌的菌落形态、营养生长量、产孢量等生物学性状存在差异,生长最快的是Bb2菌株,产孢量最高的是Bb8菌株和Bb13菌株;2株僵蚕蛹来源白僵菌Bb8、Bb14的分生孢子在扫描电子显微镜下呈球形或近球形,二者同为球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Bals.)Vuill.]。研究结果还显示部分蚕区的家蚕白僵菌与生物防治用白僵菌有一定程度的生物学特征相似性,而相同地区的家蚕病原白僵菌也存在差异,这暗示广东蚕区家蚕白僵病的病原来源复杂,对于2株生防用白僵菌菌株Bb2、Bb7是否为家蚕病原白僵菌还有待进一步研究。     

一株分离自感病桑天牛的高毒力球孢白僵菌菌株对6种植物病原真菌的拮抗作用研究

球孢白僵菌(Beauveria bassiana)Bi05菌株分离自感染白僵病致死的桑天牛幼虫僵体。测试分析白僵菌Bi05菌株对植物病原真菌链格孢菌(Alternaria alternata)、茎点霉(Phoma sp.)、拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis funera)、杨树腐烂病菌(Valsa sordida Nits)、曲霉(Aspergillus ruber)、油松枯梢病菌(Sphaeropsis sapinea)的拮抗作用,探究该菌株是否具有防治害虫和植物病害的双重生防功效。在平板对峙培养试验中,白僵菌Bi05菌株对除油松枯梢病菌之外的其余5种病原菌均有一定的抑制作用,对茎点霉、拟盘多毛孢菌、杨树腐烂病菌的抑制率均在50%以上;在白僵菌Bi05菌株孢子悬浮液的抑菌试验中,显示浓度为108m L-1的孢子悬浮液对6种病原菌均有抑制作用,且抑制效果优于平板对峙培养;在Bi05菌株发酵液的抑菌试验中,培养7 d时对茎点霉、拟盘多毛孢菌、杨树腐烂病菌的抑制率分别达到30.67%、41.38%、46.80%。以上试验结果表明,白僵菌Bi05菌株对茎点霉、拟盘多毛孢菌、杨树腐烂病菌有较明显的抑制效果。     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)对桑炭疽病菌的抑制作用

以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株BS-LX04为材料,测定其对桑炭疽病病原菌(Colletotrichum m orifoli-um)的抑制作用。结果表明BS-LX04对桑炭疸病病原菌的菌丝生长和分生孢子萌发具有较强的拮抗作用:能够使菌丝生长受阻且产生畸形;能够抑制分生孢子的萌发,培养24 h检查孢子萌发抑制率为73.22%;能够推迟分生孢子的萌发时间,并导致萌发孢子的芽管和菌丝畸形而不能继续生长。BS-LX04发酵培养滤液中可粗提到对菌丝生长和分生孢子萌发具有抑制作用的粉状物质,随着菌株培养时间的延长,粗提物对桑炭疽病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制率也逐渐升高,即抗菌物质产生逐渐增多,培养48 h是适宜的发酵时间。菌株在28℃培养,获得的抗菌物质粗提物的抑菌率和孢子萌发抑制率均最高,28℃为菌株最适发酵温度。     

拮抗放线菌BS-112的鉴定及抗菌物质粗提物对家蚕主要病原菌的抑制作用

以绿僵菌(Nomuraea rileyi)和黑胸败血病菌(Bacillus sp.)为靶标,从泰山林地土壤中分离获得一株对多种家蚕病原菌具有强烈拮抗作用的放线菌BS-112。根据该菌株的形态特征、培养特征、理化性质、细胞壁组分及16S rDNA序列分析结果,将其鉴定为吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)。该菌株抗菌谱广,抗菌物质耐高温,在酸、碱环境比较稳定,抗菌物质粗提物对黑胸败血病菌和绿僵菌的最小抑菌浓度分别为19.53μg/mL和78.13μg/mL,最小杀菌浓度分别为78.13μg/mL和156.25μg/mL,表明在较低浓度下即可达到杀菌效果。     

圆孢芽孢杆菌A95抗菌蛋白的分离纯化及性质研究

对圆孢芽孢杆菌(Bacillus globisporus)A95产生的抗菌蛋白进行了分离纯化,并研究了其部分性质。菌株摇瓶发酵液离心后的上清液经硫酸铵40%~60%分级盐析获得粗提物。粗提物溶液经Sephadex G-100柱层析、DEAE-Sepharose Fast F low离子交换层析、Sephadex G-50脱盐纯化获得的抗菌蛋白,通过性质检测、电泳及MALDL-TOF-MS质谱检测,表明为分子量1.464~1.529 kD的一组环肽类抗菌蛋白。该抗菌蛋白对多种家蚕病原真菌具有较好的抗菌活性,参照美国国家临床试验标准化委员会(NCCLS)提出的标准,用微量液基稀释法分别测定了对绿僵菌、白僵菌和黄曲霉的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)。该抗菌蛋白对热稳定,对胰蛋白酶、蛋白酶K、氯仿有一定的耐受性,对酸部分敏感,对碱稳定。     

一株桑树内生拮抗菌的分离鉴定

从经过严格表面消毒的桑树根、茎、叶中分离获得内生细菌76株。以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)作为指示菌进行拮抗菌的筛选,其中5个分离株具有抑菌活性,复筛选出抑菌活性及热稳定性最强的G21菌株。进一步研究表明G21菌株对家蚕病原真菌球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、绿僵菌(Metarhizium)均具有较强的拮抗作用。该菌株的形态及部分生理生化特征为:革兰阳性,杆状,产芽孢,接触酶阳性,好氧。16S rDNA序列分析表明该菌株与芽孢杆菌(Bacillus)的同源性达到99.8%。综合以上鉴定结果确定G21菌株为芽孢杆菌。     

家蚕白僵病抗性检测平台的建立

为建立一套科学、规范、可靠的家蚕白僵病抗性检测方法,通过对抗性检测过程中病原制备、家蚕选择、浸浴攻毒、数据调查等主要技术环节制定具体操作标准,建立起以浸浴攻毒为核心的抗性检测技术平台.实验结果表明,该方法重复性较好,3个试验家蚕品种攻毒后死亡率的标准差较小,调查数据在各重复区间基本一致.该检测平台具有较好的实用性、准确性和可靠性,在家蚕白僵病抗性比较和白僵菌菌株毒力评价上都具有较好的应用价值.     

家蚕三种白僵菌的初步观察

从本校的蚕病实验室收集寄生家蚕的白僵菌中,分离出球孢、小球孢和卵孢三种白僵菌.球孢和小球孢白僵菌分生孢子为球形或卵形,前者孢子较大,且菌落呈平绒状,并逐渐由白变黄;后者孢子较小,菌落后来形成乳粉状孢子层.卵孢白僵菌分生孢子多亚圆形或椭圆形,且大小开差较大,菌落表面高低不平,白色,后期形成粉状.小球孢白僵菌菌丝体,从病蚕节间膜生出,而球孢和卵孢白僵菌全身布满菌丝层,但以卵孢白僵菌生长速度为快.球孢和小球孢白僵菌病蚕血液中有芽生孢子.且球孢白僵菌特多.而卵孢白僵菌病蚕血液中芽生孢子极少.其中以卵孢白僵菌致病力最强.球孢和小球孢白僵菌较弱.     

家蚕灰僵病病原的鉴定

家蚕灰僵病(grey muscardine)是一类不常见的真菌病,其病原一直未能确定。从感染灰僵病的家蚕体中分离获得一株棒束孢(Isaria),菌株编号为RCEF197,测定了该菌株的ITS1-5.8S-ITS2 rDNA区域序列,研究了该菌株的菌落和显微形态特征。与一些近似的棒束孢和拟青霉(Paecilomyces)的ITS序列进行比较,该菌株和爪哇棒束孢菌株CBS134.22的相似性为99.8%,在构建的棒束孢属部分种的系统发育树中,该菌株与爪哇棒束孢聚为一类,再结合该菌株具有的淡灰紫色菌落和长椭圆形分生孢子大小等形态学特征,将家蚕灰僵病的病原确定为爪哇棒束孢Isaria javanica。     

白僵蚕高效液相色谱指纹图谱的研究

建立白僵蚕甲醇提取物高效液相色谱指纹图谱,可较完整地反应白僵蚕内在化学信息,全面评价白僵蚕的质量。采用梯度洗脱高效液相色谱法对获取的指纹图谱数据进行相似度分析,建立了白僵蚕的指纹图谱。以主要的7个共有峰的相对保留时间和相对峰面积作为白僵蚕指纹图谱的相关技术参数,对10份白僵蚕样品测定得出的7个主要共有峰的相对保留时间重现性好,相对峰面积有明显差别。白僵蚕高效液相色谱指纹图谱可用于评价白僵蚕的质量。     

应用紫外指纹图谱分析技术鉴别白僵蚕

基于为白僵蚕的质量控制提供依据,研究了紫外指纹图谱技术在白僵蚕鉴别上的应用。将不同品种、不同季节的白僵蚕及健蚕的水溶性提取液、脂溶性提取液和醇溶性提取液用紫外分光光度法在200~400 nm波长范围内扫描,用白僵蚕的各提取液对小白鼠进行抗惊厥试验。结果表明,白僵蚕的醇溶性提取液的紫外指纹图谱可以对白僵蚕进行鉴别。     

盐酸特比萘芬对家蚕真菌病的防治效果试验初报

以家蚕真菌病病原为受试菌,对抗真菌药物氟康唑(FCZ)和盐酸特比萘芬(TBF·HCl)进行了体外筛选,研究了盐酸特比萘芬对家蚕真菌病的防治效果及其稳定性。试验结果表明,盐酸特比萘芬的体外抑菌、杀菌效果优于氟康唑,盐酸特比萘芬对家蚕病原真菌的最小抑菌浓度范围为0.0625～0.2726μg/mL,最小杀菌浓度范围为0.125～4μg/mL。生物试验表明,盐酸特比萘芬对家蚕真菌病防治效果良好,200μg/mL时防治效果达100%,且对家蚕生长发育、茧质无不良影响。稳定性试验表明盐酸特比萘芬长期稳定性良好。     

鲁烟Ⅰ号防治主要蚕病技术的研究

为取代治疗真菌病防僵药物、治疗细菌病抗生素类药物及防治蚕病,笔者研制了蚕业消毒新药——鲁烟Ⅰ号。经中试,鲁烟Ⅰ号对家蚕病毒、真菌、细菌等主要蚕病的病源具有很好的杀灭效果,用鲁烟Ⅰ号作为防治主要蚕病的药物,取代了传统养蚕中的多种药物,用药方便,取得了良好的效果。     

寄生桑粉虱的拟青霉菌对家蚕的致病性研究

研究证实，桑粉虱能被粉拟青霉菌（Paecliomycesfarinosus，异名：穗霉菌Spicariafarinosus）寄生而发生真菌病害。该菌与家蚕的灰僵病菌同属同种。用桑粉虱分离的拟青霉菌接种于家蚕，显示很强的致病力。桑粉虱危害桑叶是家蚕流行灰僵病的主要传染源之一。     

北方蚕区2013年春季桑蚕新品种实验室鉴定（山东点）报告

2013年春季对来自北方蚕区4家单位的6对桑蚕品种进行了实验室鉴定。结合蚕期饲养、茧期调查、丝质鉴定等,总结参鉴品种在山东试验点的饲育成绩和性状特点。结果表明,ZHG×春54A、ZHG×秋54A、0501×0502,、123·B×ECA、鲁51×鲁52、鲁41×鲁42这6对蚕品种孵化齐一,发育整齐,上簇齐涌,其它经济性状略有差异。     

陕西蚕病流行规律分析

通过历年盒种产茧量、干茧病蛹及蚕期蚕病调查，得知养蚕技术、养蚕形式、地理位置、气候条件影响陕西蚕病的流行分布。近几年危害生产的主要是僵病、多角体病及微粒子病。各地由于养蚕形式、技术、地理及气候差异，蚕病发生轻重不同。僵病流行比其它蚕病受养蚕技术、地理、气候影响更明显。多角体病流行与僵病不同，有较明显的垂直传播特点。微粒子病自１９８９年发现之后，蔓延迅速，其病原首先来自从疫区调入的带毒蚕种。     

北方蚕区2019年家蚕新品种实验室鉴定(山东点)报告

2019年春季、秋季,山东省蚕业研究所以菁松×皓月为对照种,按照《北方蚕业科研协作区家蚕品种实验室共同鉴定工作细则(2017修订稿)》要求,结合实验室蚕种催青、蚕期饲育、茧期调查、鲜茧烘干、丝质鉴定等过程,对参鉴品种进行简要概评和比对分析。