低酚陆地棉直接体细胞胚胎发生和植株再生

选用低酚陆地棉无菌苗下胚轴为材料进行全固体组织培养,直接诱导获得了胚性愈伤组织,并进一步分化为再生植株.结果表明,激素是影响棉花直接体细胞胚胎发生的重要因素.MSB培养基中添加2,4-D有利于愈伤组织的形成,却不能直接诱导获得胚性愈伤组织.MSB培养基中添加IBA和BA也不能直接诱导获得胚性愈伤组织.MSB培养基附加适当浓度的IBA和KT能直接诱导出胚性愈伤组织.最适激素组合(1.0 mg/L IBA,0.5 mg/L KT)能使诱导棉花下胚轴产生大量胚性愈伤组织,并且在3个月内就可肉眼观察到不同发育时期的胚.MSB培养基中附加1.0 g/L谷氨酰胺和0.5 g/L天门冬酰胺有利于胚萌发成苗.本研究建立了简便高效的棉花直接体细胞胚胎发生和植株再生培养体系,从胚性愈伤组织诱导到植株再生约需5～6个月时间.     

超甜玉米自交系幼胚高效成株系统的建立

以超甜玉米自交系S1、S2、S3和粤甜3号等为材料,建立了超甜玉米高效再生系统。研究结果显示,超甜玉米基因型、幼胚的大小是影响胚性愈伤组织生成的主要因素,幼胚长度在0.5-1.2mm之间时,胚性愈伤组织的诱导频率最高。培养基中蔗糖浓度和细胞分裂素浓度对胚性愈伤组织的分化和小植株再生频率有重要影响,低浓度的蔗糖（20g/L）和6-BA（2mg/L）获得的再生频率较高。继代培养中ABA处理可使愈伤组织的再生频率提高1.68倍,IBA浓度在3.0mg/L,可以明显提高小植株生根。     

利用病菌培养液离体筛选水稻抗稻瘟病植株研究

以稻瘟病菌粗毒素提取液作为抗性筛选的选择压，对水稻体细胞系和花药及其愈伤组织进行抗病筛选。结果表明，毒素对体细胞和花药愈伤组织的诱导和植株再生有着明显的抑制作用，抑制程度随浓度的增加而增大，经过滤灭菌的粗毒素的毒性大于高压灭菌的毒性，花药的抑制程度大于种子胚愈伤组织，花药筛选系统的适宜毒素浓度低于体细胞筛选系统的毒素浓度。粗毒素液可以作为抗病筛选的选择压。     

通过基因枪和农杆菌介导用BADH基因转化小麦

土壤盐碱是一种严重障碍作物生产的环境因子,甜菜碱醛脱氢酶BADH基因是一种重要的可赋予植物渗透调节抗性的基因。本研究用基因枪法及农杆菌介导法向小麦幼胚和成熟胚愈伤组织导入了BADH基因。用PDS-1000／HE基因枪轰击2933块幼胚愈伤组织,分化出了45株再生植株,分化率为1．53％。PCR分析表明,其中的5株为BADH基因转化植株。用PPT涂抹其叶片,进一步证实了PCR的结果。以小麦成熟胚愈伤组织为受体,用农杆菌介导转化1968块愈伤,仅再生出了5株绿苗,PCR检测结果均为阴性。但对其转化愈伤组织的PCR检测表明,外源基因已在受体细胞中实现了整合。以幼胚愈伤组织为受体,用农杆菌介导转化2933块愈伤,共再生出了21株绿苗。对其进行PCR检测,仅有5株为BADH基因转化植株。转化处理过的幼胚愈伤组织的绿苗再生率（0．72％）高于成熟胚愈伤（0．25％）。与对照相比,所有的转化植株均能够在0．5％NaCl（w／w）条件下正常生长,表明外源BADH基因已经整合并表达。     

EMS诱变小麦愈伤组织选择抗旱突变体的研究

以抗旱性差的小麦品种温麦6号和周麦17的花药愈伤组织和幼胚愈伤组织为材料,进行EMS诱变处理,结果表明：EMS溶液处理花药愈伤组织相对分化率近50%的浓度和时间组合为0.20%＋（2~6h）;处理幼胚愈伤组织相对分化率近50%的浓度和时间组合为（0.20%~0.40%）＋（2~4h）。将EMS诱变处理后分化的224株再生植株接种到PEG浓度为80g/L的生根培养基中,进行抗旱筛选,共得到13株抗旱植株,平均变异率为5.8%。花药愈伤组织和幼胚愈伤组织EMS溶液诱变处理的适宜浓度和时间组合为0.20%＋4h。     

基因枪轰击后大麦幼胚的组织培养及植株再生研究

以基因枪轰击后的6个大麦品种的幼胚为材料，研究了不同质量浓度的ABA，2，4-D，ZT和IAA对胚幼的出愈率、愈伤组织分化特性和植株再生能力的影响。结果表明：用1．0mg／L的ABA在诱导培养基上处理幼胚能大大降低胚芽鞘发生率，并对出愈率和胚性愈伤组织的形成无不良影响；经1．0mg／L的2，4-D诱导产生的胚性愈伤组织转到分化培养基上以后，芽分化率可达8％～17％，而4．0mg／L 2，4-D处理芽分化率极低。1．0mg/L ZT与0．1mg／L IAA配比能降低分化过程中不定根的发生率，有利于芽的分化。通过植株再生系统的优化，6个大麦品种的转化幼胚植株再生率达到2％～8％。     

燕麦愈伤组织诱导和分化再生影响因素的研究

以燕麦3个品种(系)幼胚、幼穗为材料,通过组织培养方法,研究了基因型、培养基、外植体对愈伤组织诱导、继代和分化再生的影响。结果表明,对愈伤组织的诱导,基因型和培养基起重要作用,对幼胚作用极显著,对幼穗作用显著;外植体不同也影响愈伤组织形成,随培养基成分改变而变化,且幼穗较幼胚更易培养;2,4-D浓度影响愈伤组织生长和胚性愈伤组织形成,3 mg/L 2,4-D有利于愈伤生长,促进胚性愈伤形成;草莜一号幼穗愈伤组织有很强的继代能力,继代培养330 d仍具有46.58%的分化率,该材料在组织培养和基因工程研究中具有很大潜力。     

冬小麦遗传再生体系及根癌农杆菌介导的转化研究

摘要:以冬小麦品种临优145的幼胚为外植体,消毒后用解剖刀挑取幼胚,盾片朝上接种于MS+2,4-D 2 mg/L+肌醇100 mg/L＋MES 400 mg/L＋CH 100 mg/L[7]＋40g/L麦芽糖＋8g/L琼脂的培养基中诱导愈伤组织, 每两周继代一次,将诱导出的淡黄色、颗粒状Ⅱ型胚性愈伤组织接种于分化培养基（MS+ZT 1 mg/L+IAA 1mg/L+ MES 400 mg/L＋CH 100 mg/L+麦芽糖40g/L+gelrite 2.6g/L,PH5.8）上培养2－3周,然后转接到再生培养基(1/10MS+NAA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+蔗糖30g/L+ gelrite 2.6g/L,PH5.8)中进行再生成苗。接种1229块幼胚,得到987块愈伤组织, Hyg抗性愈伤组织123块,抗性再生植株34株。在建立了再生体系的基础上,用根癌农杆菌介导法将GUS基因导入幼胚愈伤组织,抗性植株的PCR检测呈阳性。X－gluc染色表明, 少部分愈伤组织出现肉眼可见的蓝色晕斑,说明GUS基因已经在小麦幼胚愈伤组织中表达。     

大花萱草EMS离体诱变和抗叶枯病突变体的筛选

利用甲基磺酸乙酯(EMS)诱变处理大花萱草愈伤组织和分化芽,经过萱草叶枯病菌毒素离体筛选获得抗病愈伤组织和分化芽突变体。以不同浓度剂量EMS诱变处理大花萱草子房诱导的愈伤组织和分化芽,用经过毒力检测的萱草叶枯病菌毒素粗提液进行离体筛选,通过在继代培养基中添加毒素粗提液,对愈伤组织进行浓度递增法和分化芽一步筛选法,获得抗叶枯病突变体材料。结果表明,0.50%~0.75%EMS处理愈伤组织60 min,0.75%~1.00%EMS处理分化芽60 min,分别获得半致死剂量效应。对存活的愈伤组织进行病菌毒素浓度递增逐步筛选(10%30天~20%30天),分化芽用40%的毒素液一步法筛选21天。经定向筛选,初步获得抗叶枯病分化芽突变体103株,有待进一步进行抗病鉴定。愈伤组织未能获得抗病突变体再生植株。     

利用叶斑病菌粗毒素离体筛选太子参抗叶斑病突变体

为培育太子参抗叶斑病新品种,运用组织培养技术以太子参叶斑病粗毒素为选择压力进行胁迫培养,采用逐步正筛选法离体筛选太子参叶斑病突变体。结果表明,太子参叶斑病粗毒素对愈伤组织的诱导、增殖、不定芽分化有明显的抑制作用,逐步提高毒素浓度能够在一定程度上提高愈伤组织对毒素的抗性。25 mL/L的毒素可以作为愈伤组织突变体的筛选压力,愈伤组织存活率达15.5%;将粗毒素浓度适当降低至10~20 mL/L有利于不定芽的分化,分化率达54%~40%;60~70 mL/L的毒素可以作为苗期抗毒素突变体的筛选压力,小苗存活率为8.3%。获得了46株高抗性植株,其对毒素的抗性显著高于对照。     

The role of nickel on somatic embryogenesis in Setaria italica L. in vitro

Nickel (0.13, 0.25, 0.5, 1.0 and 1.5 mg/l) increased the efficiency of somatic embryogenesis in leaf base and mesocotyl derived calli of Setaria italica. A lower concentration of nickel in the culture media promoted long-term maintenance of embryogenic calli that regenerated into plantlets. The plants obtained from embryogenic calli grown on Ni-containing medium showed tolerance to nickel. The growth of embryogenic callus was the maximum at 1.5 mg/l as compared to a lower or a higher concentration of Ni. Use of nickel may help in the induction of high frequency somatic embryogenesis in Setaria italica. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.     

大麦原生质体培养再生胚性愈伤组织和白化苗

从来自春大麦品种“如车”成熟胚的愈伤组织中,挑选出适于悬浮培养的松脆型胚性愈伤组织,在短期内建立胚性细胞悬浮系。此系酶解后分离出的原生质体在修改的MS培养基上能够持续分裂形成愈伤组织。将其直接转至分化培养基上获得结构紧密的胚性愈伤组织并再生白化苗.     

大蕉幼雄花易碎胚性愈伤组织长期继代培养及其植株再生

大蕉未成熟雄花接种到胚性愈伤组织诱导培养基中,4～5个月后可诱导出胚性愈伤组织,并可在继代培养基上长期增殖。这些继代培养了6年多的松软易碎的胚性愈伤组织转移到含有0.2 mg/L 6-BA的分化培养基中,可诱导出芽,得到了53株再生植株,这些再生植株可进一步扩大繁殖。组织学切片证明长期继代培养的愈伤组织维持了胚性的状态。     

魔芋愈伤液体培养与植株再生的研究

以魔芋颗粒状愈伤组织为试材,进行了液体培养及植株再生诱导的探讨。结果表明,MS BA 1.0 mg/L 2,4-D 0.2 mg/L 蔗糖30 g/L 琼脂6.0 g/L培养基适合从芽鞘诱导颗粒状愈伤组织。获得的愈伤组织切割成0.3cm左右在MS BA 0.05 mg/L NAA 0.1 mg/L 蔗糖30 g/L PVP 1.0 g/L液体培养基中振荡培养,建立液体培养体系。液体培养材料的生长曲线呈上升的半抛物线型,从第6天到第12天期间增重占整个培养周期增重的80%以上,随着液体培养材料的生长,培养液pH值上升。将液体培养12 d的材料转到1/2MS BA 0.6 mg/L NAA 0.1 mg/L 葡萄糖30 g/L 维生素C100 mg/L 琼脂6.0 g/L培养基上,进行愈伤组织的分化培养;然后将长到出叶期的大芽切割转入到1/2MS NAA 0.1 mg/L 蔗糖30 g/L 琼脂6.0 g/L生根培养基诱导生根,形成再生植株。     

掌叶半夏细胞悬浮培养及单细胞培养再生植株

掌叶半夏成熟胚在含２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ，ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上可诱导形成颗粒状胚性愈伤组织。用附加２，４－Ｄ ２．０ｍｇ／Ｌ，ＢＡ０．１ ｍｇ／Ｌ，ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ的ＭＳ液体培养基对胚性愈伤组织进行悬浮振荡培养，经３￣４次继代培养即可得到悬浮的单细胞，其细胞多为圆形或椭圆形，具有较强的分裂能力。经测定，悬浮培养过程中细胞生长曲线呈“Ｓ”型，培养２０天时细胞数量和鲜重达到最大值；随着     

高效的水稻基因枪转化和可育转基因植株再生

从水稻品种台北309成熟胚诱导生长3~4周的愈伤组织,经过1~3次继代培养后,可以形成大量颗粒状胚性愈伤组织,适用于基因枪转化实验。将分别含有雪花莲凝集素(GNA)基因、h pt基因的质粒pIP860和p35H混合包裹在金粉上轰击转化上述胚性愈伤组织,在含30~50mg/L潮霉素的培养基上进行筛选、预再生、再生及长根培养。使用干燥处理     

甘薯胚性细胞悬浮培养系的建立

地甘薯胚性细胞悬浮增减系的进行了研究。将１２个基因的长约０．５ｍｍ的茎尖培养在含有０．２ｍｇ／Ｌ或２．０ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上，形成了胚性愈伤组织。胚性愈伤组织的形成率因基因型和２，４－Ｄ深度不同而很大差异，为０－７５．７％。一方面，将胚性愈伤组织继续增减在含有２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上，它们形成了处于各发育时期的体细胞胚。将具有体细胞胚的胚性愈伤组织转移到ＭＳ基本培养基上，体细胞胚发育成     

Selection and Characterization of a Novel Glyphosate Tolerant Upland Cotton (Gossypium hirsutum L.) Mutant (R1098)

Stepwise selection approach was adopted to obtain glyphosate-tolerant upland cotton mutant (R1098) from the embryogenic calli of Coker 312 (Gossypium hirsutum L.).     

Intergeneric hybridization between Brassica species and Crambe abyssinica

A protocol for high frequency callus induction and plant regeneration from sunflower (Helianthus annuus L.) anthers is described. Different variables using Murashige & Skoog (MS) basal medium supplemented with 2.0 mg/l α-naphthaleneacetic acid (NAA) and 1.0 mg/l N₆-benzyladenine (BA) were tested for their ability to enhance the frequency of anther callusing and subsequent embryogenesis. Of these, agar concentration, sucrose concentration, carbohydrate source had significant effect on callusing, while differences due to incubation under dark vs light conditions, cold pretreatment of capitula for 1 to 6 days prior to anther inoculation and genotype on callusing were non-significant. However, all these factors exerted highly significant influence on embryogenesis when calli from the various media were transferred to medium supplemented with 0.1 mg/l NAA and 0.5 mg/l BA. With the procedure developed, callusing as high as 100% and embryo formation at a frequency of 44% was achieved. Although complete embryos were formed the frequency of their conversion to whole plantlets was low (14.3%). Hence, the embryogenic pathway was bypassed to obtain multiple shoots by transferring embryogenic calli with developing embryos to MS medium supplemented with 0.5 mg/l BA. Elongated shoots rooted on half-strength MS medium supplemented with 0.5 mg/l NAA. Cytological analysis of embryogenic callus and somatic embryos revealed haploids at a frequency of 30% while that of rooted plants showed haploid regenerants at a frequency of 8.3%. Nevertheless, the frequency of putative haploid plants could be enhanced through mass multiplication using nodal explants of the regenerants. This revised version was published online in August 2006 with corrections to the Cover Date.     

NAA或潮霉素对小麦成熟胚愈伤组织分化的影响

以5个栽培小麦品种诱导而来的成熟胚愈伤组织为外植体,研究了在分化培养基中加入NAA对小麦成熟胚愈伤组织分化的效果以及潮霉素浓度对不同阶段成熟胚愈伤组织分化的影响。研究结果表明,在对照的分化培养基中(含5mg/L激动素)加入0.1mg/L萘乙酸(NAA,1-naphthlcetic acid)形成的分化培养基,可显著提高4个供试小麦基因型的成熟胚愈伤组织的分化率,提高幅度达到12%～32%。不同的潮霉素浓度在"花培1号"愈伤组织的诱导阶段进行抗性筛选的结果表明,即使是在潮霉素浓度达到250mg/L时,仍有24%左右的愈伤组织存活率,这些存活的愈伤组织仍可能分化形成绿点甚至分化成苗,说明在"花培1号"愈伤组织的诱导阶段进行潮霉素抗性筛选是不适合的。5个不同小麦品种分化阶段进行潮霉素筛选具有明显的效果,但不同品种之间存在一定差异,其中:宁麦13的适宜潮霉素浓度为20mg/L,花培1号和扬麦158的适宜潮霉素浓度约为30mg/L,宁麦9和宁麦16的适宜潮霉素浓度在30～40mg/L左右。因此,我们认为,在分化阶段进行潮霉素抗性筛选是理想的筛选时期,在分化培养基中添加20～40mg/L浓度的潮霉素即可完全抑制小麦成熟胚愈伤组织的分化。本研究结果将有助于改进和完善普通小麦成熟胚遗传转化体系。