人工诱导盘鲍异源雌核发育多倍体的初步研究

通过预实验,观察和了解在24．8℃下九孔鲍精子与盘鲍卵子授精,及其受精卵第一极体和第二极体出现的时间．采用不同浓度的乙烯脲失活九孔鲍精子的遗传物质,确定其最佳处理浓度和处理时间．遗传物质失活的九孔鲍精子和盘鲍卵子授精,用CB进行不同持续处理时间抑制受精卵第一极体和第二极体出现的方法诱导多倍体．实验结果表明,在水温24．8℃下,作为失活九孔鲍精子遗传物质的乙烯脲,当其质量分数为0．5‰和处理时间为10min是比较适宜的;用遗传物质失活的九孔鲍精子与盘鲍卵子授精,在授精后10min,用浓度为1．0mg·dm-13的cB持续处理受精卵24min,表观三倍体率达65％以上,表观四倍体率达5％左右．稚鲍的倍性检查中,雌核发育多倍体占总多倍体数的80％,杂交多倍体占20％．盘鲍异源雌核发育的三倍体率达到93％,四倍体率为3％左右．     

人工雌核发育诱导太平洋牡蛎四倍体的研究

通过人工雌核发育诱导太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)四倍体。精子遗传失活采用紫外线照射法,紫外线照射时间1 min、紫外线照射剂量1 500-W.cm-2。诱导雌核发育四倍体用6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP),选用L9(34)设计,进行三因素三水平的正交试验。诱导持续时间(A)设35,45,55 min;处理起始时间(B)10,15,20 min;6-DMAP浓度(C)设300,450,600μmol.L-1等三水平,试验重复二次。解剖法获取精卵,人工授精。染色体倍性检查采用染色体计数法。根据正交试验直观分析结果,得出诱导太平洋牡蛎四倍体各因素的最优水平组合:处理起始时间15 min、6-DMAP浓度450μmo.L-1、诱导持续时间45 min;三因素主次顺序:6-DMAP浓度→处理起始时间→诱导持续时间。     

南方鲍藻混养技术研究及其效益分析

在福建省莆田市南日东岱海区,利用现有海藻养殖设施,进行海藻与皱纹盘鲍混养周年试验.结果表明：海区筏式单养、混养生长率无显著差异,但混养的成活率、肥满度比单养分别高8%、2.24%;2种养殖模式的投入产出比分别为1∶1.62、1∶1.9.同时,鲍和海藻处在海洋生态系统的不同生态位,互利共生,促进海洋生态系统物质良性循环.     

皱纹盘鲍与九孔鲍杂交的研究

采用皱纹盘鲍与九孔鲍进行杂交,并与两亲本自交进行育苗比较.结果表明：自交组的受精率、孵化率以及存活率显著高于杂交组（P〈0.05）;皱纹盘鲍（♀）×九孔鲍（♂）和皱纹盘鲍（♂）×九孔鲍（♀）杂交的受精率分别为0.9%和3.2%,受精率存在显著差异（P〈0.05）,而孵化率分别为12.4%和13.1%,二者差异不显著（P〉0.05）,二者之间幼体存活率的差异也不显著（P〉0.05）;自交组和杂交组之间的鲍生长速度存在明显的差异（P〈0.05）,杂交组合的生长速度明显比自交组合的要快;但杂交组中稚鲍的存活率和自交组之间差异不显著（P〉0.05）.     

秋水仙素对大蒜茎尖试管苗四倍体的诱导

【目的】大蒜为无性繁殖作物,难以采用常规育种方法选育新品种,而化学诱变作为种质创制的重要方法之一,在一些作物上获得了较好的效果。探讨秋水仙素对大蒜茎尖组培试管苗多倍体的诱变效应,旨在为创新大蒜种质提供理论依据和技术方法。【方法】选用山东‘苍山蒲棵’、四川‘正月早’和‘新疆紫皮’3个生态区域的大蒜品种,鳞茎经自然晾干通过休眠后,取鳞芽茎尖为外植体接种到不同处理的培养基上,采用二次饱和-D最优设计方法,研究秋水仙素不同浓度及处理时间对大蒜茎尖试管苗成苗率及染色体加倍率的影响,并建立相关回归模型;通过对回归模型进行解析,确定诱变大蒜四倍体的优化方案;采用流式细胞仪检测幼叶和根尖压片染色体计数相结合的方法进行染色体倍性鉴定。【结果】利用流式细胞仪检测的四倍体大蒜植株叶片DNA相对含量是二倍体对照大蒜‘苍山蒲棵’的2倍;通过染色体计数法鉴定二倍体植株根尖染色体为2n=2x=16,而四倍体植株染色体为2n=4x=32。在秋水仙素处理大蒜茎尖诱变四倍体过程中,随秋水仙素处理浓度的升高及时间的延长,3个大蒜品种试管苗成苗率均逐渐降低,且处理浓度的影响大于处理时间;品种间成苗率存在显著差异,以‘正月早’较高,‘新疆紫皮’次之,‘苍山蒲棵’较低,其处理间平均成苗率分别为48.69%、46.73%和41.83%。秋水仙素对大蒜四倍体的诱变效应以处理浓度大于处理时间,不同大蒜品种对秋水仙素的反应存在显著差异,虽然‘苍山蒲棵’、‘正月早’与‘新疆紫皮’的最高四倍体诱导率分别达15.69%、15.69%和23.53%,但大蒜四倍体平均诱导率则以‘正月早’最高,‘苍山蒲棵’次之,‘新疆紫皮’最低,分别为9.15%、7.84%和6.53%。经计算机模拟寻优,求得的3个大蒜品种试管苗成苗率均超过50%的处理方案为秋水仙素浓度为0.268%-0.694%、处理时间为61.1-113.8 h;3个大蒜品种四倍体诱导率均超过5%的秋水仙素处理浓度和时间分别为0.531%-0.580%和79.8 -112.2 h。【结论】不同大蒜品种对秋水仙素处理浓度和处理时间的反应不同,秋水仙素对大蒜四倍体的诱变效应亦存在显著差异,但均以处理浓度的影响大于处理时间,且处理浓度与处理时间存在互作效应。3个大蒜品种成苗率超过50%且四倍体率超过5%的秋水仙素处理浓度为0.531%-0.580%、处理时间为79.8-112.2 h。     

复合螯合微量元素添加剂对鱼、贝生长及能量转化的影响

在罗非鱼、鲤鱼、皱纹盘鲍饲料中，分别添加氨基酸螯合盐添加剂和无机盐添加剂对罗非鱼、鲤鱼、皱纹盘鲍进行了对比喂养试验。结果表明：氨基酸螯合盐较无机盐具有显著促生长作用。添加螯合盐的2个试验组罗非鱼的平均特定生长率分别比无机盐对照组提高89．25％、79．61％；鲤鱼螯合盐试验组比对照组平均特定生长率提高55．00％；添加螯合盐的2个试验组皱纹盘鲍的平均特定生长率分别比对照组提高36．45％和64．49％。     

皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)数量性状的相关性与通径分析

为研究皱纹盘鲍各数量性状间的相关性及不同性状对体质量、软体部质量的影响,随机选取161只同一批次3-4龄的皱纹盘鲍,测量其壳长（SL）、壳宽（Sw）、壳厚（SH）、壳质量（SW）、足质量（FW）、软体部质量（MW）和体质量（BW）。计算性状间的相关系数,采用通径分析法计算不同性状对体质量、软体部质量的通径系数和决定系数,定量分析这些性状分别对体质量、软体部质量的影响效应。结果表明：所测各性状与体质量和软体部质量之间的相关系数均达到极显著水平（P＆lt;0.01）;在6个数量性状（壳长、壳宽、壳厚、壳质量、软体部质量、足质量）中软体部质量是影响体质量的主要因素;在体尺性状（壳长、壳宽、壳厚）中壳长对体质量影响最大;在体尺性状和体质量对软体部质量的影响中,体质量起主要作用。去除通径系数检验不显著的性状,利用逐步回归的方法,建立了6个数量性状对体质量的回归方程：BWq=-10.343＋0.255SL＋0.696SW＋0.951MW;体尺性状对体质量的回归方程：BWb=-69.930＋1.427SL＋0.728SH;体尺性状和体质量对软体部质量的回归方程：MB=4.430＋0.798BW-0.174Sw。研究结果为皱纹盘鲍的种质资源保护和选育工作提供一定的理论依据。     

Oryzalin离体诱导小果型西瓜四倍体及倍性鉴定研究

以3个二倍体小果型西瓜优良自交系048、032、047-1为试验材料,研究培养方式、Oryzalin浓度、处理时间对离体诱导西瓜四倍体的诱变效果,并对变异植株进行形态学比较、气孔测定及染色体鉴定。研究结果表明,采用液体培养的四倍体诱导率比固体培养高。在含50 mg/L Oryzalin的液体培养基中振荡处理2 d,四倍体诱导率最高达33.3%。变异植株通过染色体计数法鉴定得出染色体数为44,确定为四倍体植株。再生植株表现为叶片肥厚,叶色深绿,茎节缩短,株型紧凑矮小,茎蔓挺直,叶形指数变小;叶片气孔密度明显减小,保卫细胞体积增大,叶绿体数目增多;花瓣颜色深黄,且增宽、增厚。此结果说明Oryzalin对不同基因型的四倍体诱变效果存在一定差异。     

基于Ecopath模型的獐子岛人工鱼礁海域生态系统结构和功能变化

为了研究獐子岛海洋牧场的生态系统结构和功能,基于Ecopath with Ecosim 6.4软件,构建了獐子岛人工鱼礁区生态系统2010—2012年夏季的Ecopath模型,分析了3个时期海域生态系统的能量流动结构和功能变化,模型由23个功能组构成,基本覆盖了该海域生态系统能量流动的全过程。结果表明:2010—2012年夏季獐子岛海域人工鱼礁区生态系统中,虾夷扇贝Patinopecten yessoensis、许氏平鲉Sebastes schlegelii和大泷六线鱼Hexagrammos otakii等生物营养级升高;皱纹盘鲍Haliotis discus hannai的猎物重叠度指数平均值从0.123升至0.139,捕食重叠度指数平均值从0.112升至0.165,许氏平鲉的捕食重叠度指数平均值从0.063升至0.185,大泷六线鱼的捕食重叠度平均值从0.062升至0.132;该生态系统能量转化效率由2010年夏季的11.1%升至2012年夏季的14.4%;3个时期獐子岛人工鱼礁区生态系统的循环指数(FCI)值均大于0.1,再循环率较高,系统净生产力(NSP)值较高,杂食指数(SOI)从0.136升至0.172,联结指数(CI)从0.203升至0.224,平均能流路径(MPL)从2.555升至3.486。研究表明,獐子岛人工鱼礁区海域生态系统处于尚未稳定的成熟期。     

细胞松弛素B诱导鲍异源三倍体

用细胞松弛素B（CB）处理受精卵（九孔鲍♀×盘鲍♂）,抑制第二极体释放,诱导异源三倍体.在水温24℃下,分别进行了不同起始处理时间（受精后5~25 min）、不同药物处理浓度（0.2~1.0 mg/L）和不同持续处理时间（5~15 min）的实验.结果表明：受精后10~15 min开始处理的效果较好,平均担轮幼虫成活率为52.07%,平均三倍体率为55.81%;最佳药物处理质量浓度为0.4 mg/L,最佳持续处理时间为10 min,担轮幼虫率为21.43%,异源三倍体率为50.96%;药物空白对照组1（九孔鲍♀×九孔鲍♂）担轮幼虫率为85.38%,二倍体率为95.42%;药物空白对照组2（九孔鲍♀×盘鲍♂）担轮幼虫率为54.37%,二倍体率为75.87%.综合考虑,鲍异源三倍体的适宜诱导条件为：在受精后13 min,即当40%~50%受精卵排出第一极体时,用0.4 mg/L的CB处理10 min.     

用电子鼻和SPME-GC-MS分析鲍鱼熟制前后挥发性风味物质的变化

为了揭示熟制鲍鱼主要特征气味的成因,采用电子鼻及固相微萃取结合气-质联用(SPME-GCMS),对熟制过程中皱纹盘鲍Haliotis discus hannai香气差异和挥发性成分变化进行了研究。结果表明:电子鼻能够灵敏地检测到熟制鲍鱼的香气变化,经PCA分析发现,熟制鲍与生鲍整体气味有显著差异;GCMS分析表明,熟制前后鲍鱼的挥发性成分发生明显变化,从生鲍和熟制鲍中分别鉴定出42种和61种风味物质,主要物质有醇、醛、酮、烃、酯、酸、芳香族、含氮化合物、酚类;生鲍中挥发性风味物质含量较高的为苯甲醛(68.15%)和1-辛烯-3-醇(9.22%),熟制鲍中挥发性风味物质含量较高的为2,3-丁二醇(22.80%)和(2R,3R)-(-)-2,3-丁二醇(19.84%)。研究表明,运用电子鼻和固相微萃取结合气-质联用(SPME-GC-MS)能够很好地分析鲍鱼熟制前后气味的变化。     

PEG渗透处理侧柏种子的研究

于1990年在东北林业大学种苗室进行实验,对侧柏(Thula orientalis)种子用不同分子量、不同浓度及不同回干时间的PEG进行渗透调节处理。实验结果:(1)不同分子量的PEG(6000,10000,20000)处理,对侧柏种子的发芽势和发芽率均有明显的促进作用,尤以PEG—10000处理为最佳;(2);同一分子量(PEG-10000)不同浓度的PEG处理,对侧柏种子的发芽势,发芽率及简化活力指数的影响也不同,在浓度低于30％时均有不同程度的促进作用,其最佳处理浓度为20％-25％,当浓度大于35％时具有明显的抑制作用;(3)浓度为20％的PEG-10000的最佳渗透处理时间为2-4d,最高不能超过6d,超过8d时具有明显的抑制作用;(4)低分子量的PEG-60000处理后不宜进行回干,而高分子的PEG(10000,20000)处理后,若再进行回干处理可降低种子侵出液的电导率,提高种子的发芽率和种子活力,其回干时间以6—8h为宜;室内模拟田间实验结果,凡经过PEG处理的种子出土整齐、出苗率高。     

微量元素添加剂形态对皱纹盘鲍生长的影响

在鲍鱼基础饲料中,分别添加无机盐,氨基酸微量元素螯合盐,麦饭石等,对皱纹盘鲍的幼鲍进行喂养试验表明,添加螯合盐幼鲍生长最快,麦饭石其次,无机盐及对照生长最差。鲍的体重增长率,螯合盐与无机盐和对照的差异极显著,麦饭石与对照,螯合盐与麦饭石的差异显著、麦饭石、对照与无机盐差异不显著。     

皱纹盘鲍血细胞分类及活性氧产生机理的研究

研究了皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino血细胞的组成、数量、吞噬作用及活性氧产生机理。皱纹盘鲍血细胞分为透明细胞和颗粒细胞两大类。透明细胞无颗粒,具嗜碱性细胞质,约占循环血细胞总量的60％;颗粒细胞含嗜酸性颗粒。这两种血细胞都有吞噬作用,尤其是颗粒细胞,经酵母细胞刺激后,血细胞释放活性氧,还原氮蓝四唑(NBT)形成甲欣沉淀,有化学发光现象。长期饥饿的皱纹盘鲍,血细胞活性氧量低于正常水平。     

秋水仙碱离体诱导薄皮甜瓜四倍体的研究初报

以甜瓜组培苗茎尖为材料,研究了秋水仙碱诱导染色体倍性变异的最佳浓度、最适处理时间以及离体茎尖的最佳苗龄。结果表明：以8d苗龄的茎尖,在含有0．1mg／L秋水仙碱和较低浓度细胞分裂素的液体培养基中处理24-48h的诱导方法最有利于四倍体的产生,诱导染色体加倍的频率达30％～40％。变异株在田间表现出生长缓慢、叶片变宽加厚、茎增粗、节间变短、果皮变厚、种子变大增重的现象,显微镜观察变异后代根尖的染色体数目为2n=4x=48条。     

阔叶风铃草多倍体诱导与鉴定

培养的倍体能显著提高园林植物的观赏和利用价值。在离体培养条件下,比较了不同浓度、不同处理时间的秋水仙素对阔叶风铃草进行染色体加倍的诱导效果。结果表明,当秋水仙素浓度为0.10%,处理24h后变异率达到最高,为30%,诱导效果最好。从形态变异苗中鉴定出1株四倍体,四倍体植株与原二倍体植株比较,在形态上表现为：生长缓慢,生长期延长,叶片气孔变大,叶绿体数目增多,叶片变厚,叶色变深,茎变粗且节距长。     

多因素对秋水仙素诱导多倍体效率的影响

[目的]明确各因素对秋水仙素诱导效率的影响。[方法]通过正交试验,研究秋水仙素浓度、紫外线辐射单次时长及频数、温降单次时长及频数对秋水仙素诱导刺槐多倍体效率的影响。[结果]紫外辐射时长对秋水仙素诱导效率的影响最显著,80 s时膨大率最高,其次是浓度。各浓度组间膨大率呈周期性变化,随浓度增加整体略有上升。辐射频数和温降频数对膨大率的影响较小,分别以2、1次最好。温降时长以5 min最佳。不同辐射时长和不同辐射时间点的诱导效果有明显差异。单纯的紫外辐射不能诱导根尖膨大细胞加倍,不能降低秋水仙素的最低有效诱导浓度。单次剂量2 min出现抑制效果,4 min出现明显的生长抑制,8 min生长停止。[结论]最优组合是0.3%秋水仙素,辐射40 s共2次,温度骤降5 min共1次。     

用秋水仙素处理不同家系白桦种子诱导四倍体的研究

采用0.1%和0.2%秋水仙素分别处理4 个家系白桦种子1、2、3 和4 d,调查其对白桦种子相对发芽率、相对 发芽势的影响和四倍体诱导率,在此基础上研究了2 种桦树共7 个家系在0.2%秋水仙素处理3 d 的条件下四倍体 的发生率。结果表明:1)秋水仙素对种子发芽率、发芽势有显著影响,随着浓度的增加发芽率和发芽势降低;同一 浓度下随着诱导时间的增加种子发芽率和发芽势呈现先降低后增加的变化趋势,在诱导3 d 时为最低。2)用 0.2%的秋水仙素处理种子3 d,发现白桦种间和家系间的四倍体诱导率明显不同,欧洲白桦4 个家系的平均诱导率 为3.76%,而3 个白桦杂种家系的平均诱导率仅为0.09%,7 个家系中YB3 的诱导率高达8.86%。      

渗透调节在提高柏木种子活力中的作用

利用PEG、尿素和氯化铵渗透调节物对柏木进行渗透处理,研究了它们对柏木种子活力的影响,结果表明:PEG浓度和处理时间对种子活力影响的程度大于分子量,就活力的直接性指标看,浓度>时间,间接性指标却是时间>浓度;PEG与尿素组合处理具有叠加效应,其中以先PEG处理,后用尿素处理效果更佳;NH_4Cl盐浸的各处理组合对柏木种子活力皆有提高作用,其中以盐浸2小时效果最好。     

聚乙二醇处理对‘717’杂交杨组培苗的影响

以‘717’杂交杨(‘INRA 717-1B4’杨)组培苗为试验材料,采用0、2.5%、5.0%、10.0%聚乙二醇(PEG)6000模拟干旱胁迫,研究PEG对‘717’杂交杨膜脂过氧化和抗氧化保护系统的影响。结果表明:(1)2.5%PEG处理促进了‘717’杂交杨的生长,而10.0%PEG显著抑制其生长。(2)PEG处理显著增加‘717’杂交杨幼苗体内H2O2和丙二醛(MDA)含量,其中10.0%PEG处理最显著。(3)3个PEG浓度处理都降低了‘717’杂交杨超氧歧化酶(SOD)的活性,浓度越大下降越大;而PEG处理后过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)、谷胱甘肽还原酶(GR)活性4种酶活性都较对照显著提高,其中POD、APX活性都随着浓度增加和时间的延长而增强,而2.5%PEG处理10 d和5.0%PEG处理20 d后CAT活性最高,5.0%~10.0%PEG处理GR活性增加明显,但10.0%PEG处理后CAT与GR活性比5.0%处理的有所降低。(4)3个浓度PEG处理均能显著促进抗坏血酸(As A)和谷胱甘肽(GSH)含量的积累,As A含量在5.0%和10.0%PEG处理10 d时上升较显著,GSH含量在2.5%PEG处理10 d时含量显著高于对照,在10.0%PEG处理时GSH含量出现下降。结果表明,低浓度(2.5%)PEG处理刺激了‘717’杂交杨的生长状态,通过提高体内抗氧化酶活性和抗氧化剂的含量以维持其生长,而高浓度(10.0%)PEG处理时,细胞的ROS清除平衡被打破,细胞受到伤害。