辛伐他汀通过激活p38MAPK信号通路促进MC3T3-E1细胞增殖的研究

为研究辛伐他汀通过激活p38MAPK信号通路对小鼠胚胎成骨前体细胞(MC3T3-E1)增殖的影响,将试验分为2个部分:①将辛伐他汀作用于MC3T3-E1细胞,设置不同的辛伐他汀浓度和作用时间,采用pNPP、CCK8方法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性并得到辛伐他汀对MC3T3-E1细胞增殖作用的最适浓度和最佳培养时间....     

大孔树脂吸附法分离纯化竹叶黄酮研究

采用大孔树脂吸附分离的方法对粉单竹竹叶黄酮提取物进行纯化,探讨D101大孔吸附树脂的静态及动态吸附解吸动力学特性,并对树脂动态柱层析的工艺条件进行优化。结果表明,D101大孔树脂较适宜于竹叶黄酮提取物的纯化;动态柱层析的工艺条件为:上样溶液的p H为8.0,上样流速1.0 m L/min,分别用2倍柱床体积的20%、40%、60%及80%乙醇以1.5 m L/min的洗脱速率进行阶梯梯度洗脱。在优化工艺条件下,可以收集得到纯度分别为50.9%、38.0%、35.8%等3个竹叶黄酮产品,黄酮总回收率可达63%左右。该工艺既可满足产品高纯度的要求,又保证了竹叶黄酮的高回收利用率,具有可行性。     

荔枝壳总黄酮大孔树脂纯化工艺研究

[目的]优化大孔吸附树脂法纯化荔枝壳总黄酮的工艺。[方法]比较AB-8、HPD-600和D101 3种大孔吸附树脂对荔枝壳总黄酮的吸附和解吸效果,并对上柱液的pH、黄酮浓度、上柱液体积和洗脱液乙醇体积分数等条件进行优化。[结果]D101大孔吸附树脂适宜荔枝壳总黄酮的提纯,其最佳工艺条件为上柱液pH 5.0,上柱液浓度4 mg/ml,上柱液体积2.5 BV,洗脱液乙醇体积分数80%,洗脱体积2.0 BV。[结论]经D101大孔吸附树脂分离后,荔枝壳总黄酮含量在83%以上。     

丹参地上部分正丁醇萃取部位化学成分检测及其抗脑缺血研究

筛选丹参地上部分抗脑缺血的活性部位,并检测其所含化学成分,对丹参的开发和利用具有重要意义。采用D101大孔吸附树脂吸附丹参地上部分正丁醇萃取部位,将其分离纯化为多个部位。以昆明小鼠常压缺氧模型和不完全性脑缺血模型筛选有效部位;将筛选出的活性部位再用聚酰胺柱分离为不同部位,选用上述模型进行活性部位筛选;并用高效液相检测筛选的活性部位所含化学成分。结果表明:D-101大孔树脂经体积分数为50%和75%乙醇洗脱部位能显著增加小鼠常压耐缺氧时间,延长小鼠全脑缺血后的存活时间(P0.01);聚酰胺柱分离后的水洗部位可显著增加小鼠常压耐缺氧时间和小鼠全脑缺血后的存活时间(P0.01);高效液相检测聚酰胺柱分离的水洗部位含有原儿茶醛、咖啡酸、丹参素。丹参地上部分正丁醇萃取部位聚酰胺柱分离的水洗部位为有效部位,检测出有效成分为原儿茶醛、咖啡酸、丹参素。     

D101大孔树脂纯化犁头草黄酮的研究

研究D101大孔吸附树脂吸附纯化犁头草黄酮的工艺条件。以总黄酮含量为指标,以UV为检测手段,用不同浓度的乙醇进行洗脱,首次考察D101大孔吸附树脂对犁头草黄酮的吸附和洗脱条件。D101大孔吸附树脂纯化犁头草黄酮的动态吸附容量为709μg/ml,使用3倍体积蒸馏水洗去杂质,使用浓度为50%乙醇,用量为5倍树脂体积时可以完全洗脱提取物中的总黄酮,洗脱物总黄酮含量可达58.3%,提取率为2.1%。D101大孔吸附树脂能有效纯化犁头草黄酮,该工艺简单,成本低,产物纯度高,产率高,可用于犁头草中有效成分的富集分离和大工业生产。     

利用大孔树脂吸附法分离纯化三七总皂苷的工艺研究

研究了大孔树脂吸附法分离纯化三七总皂苷的工艺,利用3种不同类型的树脂对三七总皂苷的静态吸附．洗脱性能的效果进行了试验,确定选用洗脱率高达89．5％的D101型树脂。再根据选用的D101型树脂对洗脱溶媒的选择、吸附容量的确定、洗脱溶媒的用量等纯化工艺条件参数进行了研究和验证试验,最后确定了最佳工艺条件。     

三七须（绒）根的化学成分研究

为分析三七须(绒)根的皂苷成分,本研究将三七的须(绒)根乙醇提取物利用少量水溶解后通过D101大孔吸附树脂柱层析,先用水洗脱,再用70%EtOH洗脱得到三七总皂苷,随后经硅胶柱层析,以氯仿-甲醇-水(体积比∶8.0∶2.0∶0.2～6.50∶3.50∶0.35)梯度洗脱得到4个流份,经正相硅胶柱层析,得到化合物。通过谱学分析鉴定其结构。结果表明,分离得到8个单体化合物分别为胡萝卜苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rh1、20(S)-人参皂苷Rg3、20(R)-人参皂苷Rg3、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1。其中人参皂苷Rf和20(R)-人参皂苷Rg3是首次从三七须(绒)根中分离得到的化学成分。     

红景天提取物对3T3-L1脂肪细胞增殖及细胞分化的影响

[目的]应用3T3-L1前脂肪细胞株,分析红景天提取物(Rhodiola rosea L.herb extract,RRLHE)对3T3-L1细胞增殖和分化的作用。[方法]使用油红O染色法对红景天提取物干预分化的细胞进行评估并定量分析脂肪细胞分化程度。通过逆转录多聚酶联反应(RTPCR)来检测脂肪细胞分化相关基因过氧化物体增殖剂活化受体γ(PPARγ)、CAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA的表达。[结果]红景天提取物能显著抑制3T3-L1细胞增殖和向成熟脂肪细胞分化,另外,红景天提取物能显著提高3T3-L1前脂肪细胞的葡萄糖摄取和利用率,红景天提取物明显抑制PPARγ、C/EBPαmRNA表达,与对照组比较,差异显著(P0.01)。[结论]红景天提取物对3T3-L1细胞增殖和分化均有抑制作用,并能提高3T3-L1前脂肪细胞的葡萄糖摄取和利用率,其影响机制与钝化PPARγ、C/EBP-αmRNA的表达有关系。     

大孔吸附树脂富集·纯化粟米草总皂苷工艺研究

[目的]研究大孔吸附树脂富集、纯化粟米草总皂苷的工艺。[方法]利用大孔吸附树脂技术,通过对4种不同型号（AB-8、D101、HPD100、HPD600）的树脂进行选择,采用静态吸附方法确定适合的树脂型号;采用动态吸附方法,以总皂苷的得率为指标,考察其纯化富集的工艺条件。[结果]4种树脂型号中,D101型大孔吸附树脂对粟米草总皂苷具有良好的纯化富集作用,对粟米草总皂苷的洗脱率达80．9％,其工艺条件为：洗脱溶剂用体积分数为60％的乙醇,料液质量浓度为0．5g/ml,洗脱速率为2BV／h,树脂药材质量比2：1。[结论]用D101型大孔吸附树脂富集和纯化粟米草总皂苷的工艺具有吸附量较大、洗脱率较高、树脂再生简便等优点,在粟米草皂苷的富集纯化和生产中具有推广应用价值。     

木棉花红色素提取工艺及分离纯化分析

以木棉(Bombax malabaricum)花为原料,采用蒸馏水、乙醇、3%柠檬酸为提取溶剂,大孔树脂吸附、乙醇洗脱分离纯化,研究木棉花红色素提取工艺及分离纯化。结果表明,用3%柠檬酸提取木棉花红色素效果较好,最佳提取工艺为料液比1∶20(g/m L),提取温度100℃,提取时间20 min;用大孔树脂X-5、D101、D4020静态吸附木棉花红色素效果较好,解吸溶剂适宜使用75%~95%乙醇;动态吸附后D4020大孔树脂分离富集色素的效果优于X-5、D101树脂;用大孔树脂吸附木棉花红色素,经解脱、浓缩、真空干燥后得到木棉花固体红色素。     

蒲公英提取物对乳房炎病原菌的抑菌活性分析

为了研究蒲公英的有效抑菌成分,利用超声提取技术对蒲公英进行提取,通过大孔吸附树脂D101分离其活性部分。试管法试验表明40%乙醇洗脱部分含有酚类物质,90%乙醇洗脱部分含有黄酮类化合物。经药敏试验证明90%和40%的乙醇洗脱部分为蒲公英的主要抑菌部位,对奶牛隐性乳房炎主要病原菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌有明显的抑菌效果。     

依普黄酮对破骨细胞活性及成骨细胞增殖分化作用的研究

采用1α,25-(OH)2Vit D3诱导兔骨髓细胞形成破骨细胞模型研究不同浓度依普黄酮对破骨细胞分化及骨吸收活性的影响;采用MC3T3-E1Subclone14(小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14)细胞模型研究不同浓度依普黄酮对成骨细胞增殖分化作用的影响。结果表明10-5,10-6,10-7,10-8,10-9,10-10mol/L的依普黄酮均能显著性抑制破骨细胞分化及骨吸收活性(P0.05)其中10-8mol/L的依普黄酮抑制作用最好。10-6,10-7,10-8,10-9,10-10mol/L的依普黄酮均能显著性促进MC3T3-E1Subclone 14细胞的增殖和分化(P0.05),10-10mol/L的依普黄酮促进作用最好。     

3种大孔吸附树脂对黄芩苷的静态饱和吸附量和脱附率

以黄芩苷含量为考察指标,用高效液相色谱法测定其含量,通过黄芩上柱液的澄清处理方法,比较3种大孔吸附树脂对黄芩苷的吸附量和脱附率。结果表明,3种树脂对黄芩苷的吸附能力大小为AB-8树脂LSA-40树脂D101树脂;选用50%乙醇溶液作为洗脱剂效果最好;AB-8树脂纯化黄芩苷效果最好,黄芩苷纯度约90%。     

青钱柳低聚糖对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化及相关基因表达的影响

探讨青钱柳低聚糖(Cyclocarya paliurus oligosaccharide,CPO)对3T3-L1脂肪细胞增殖分化及相关基因表达的影响。采用水提醇的方法得到青钱柳初多糖,经D301-R大孔吸附树脂和DEAE纤维素阴离子交换树脂分离纯化,收集CPO作用于3T3-L1前脂肪细胞,并采用Q-PCR测定相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisomes proliferator-activated receptorγ,PPARγ)和CAAT/增强子结合蛋白α(CAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达。结果表明:CPO含有2个组分,其重均分子量分别为3 842 Da和1 481 Da;CPO在低浓度时能促进脂肪细胞的增殖,高浓度时能抑制脂肪细胞的增殖;对脂肪细胞分化的影响较小。CPO可抑制PPARγ和C/EBPαmRNA表达,与对照组比较差异有极显著性意义(P0.01)。表明高浓度的CPO抑制脂肪细胞增殖分化水平,其机制可能与抑制PPARγ和C/EBPαmRNA表达有关。     

大孔树脂分离纯化苜蓿皂苷工艺研究

研究D101大孔吸附树脂提取苜蓿皂苷的工艺条件及参数。优化工艺条件包括树脂载样量、稀醇洗脱浓度和体积,有效部位洗脱液醇浓度和体积等参数考察。纯化前固形物苜蓿皂苷含量为0.37%,纯化后固形物中苜蓿皂苷含量为5.8%。     

无患子抗稻瘟病病菌活性皂苷的分离与鉴定

探索无患子抗稻瘟病病菌的活性成分,运用大孔吸附树脂及硅胶柱层析对无患子皂苷进行分离纯化,采用薄层色谱法和高效液相色谱法定性、光度比色法定量、核磁共振和质谱法确定结构、琼脂稀释法评价抗稻瘟病病菌活性。结果显示,无患子提取物过D101大孔吸附树脂的70%乙醇洗脱液,再经过硅胶柱,收集到由三氯甲烷-甲醇(体积比分别为1∶1、3∶1、5∶1、7∶1、9∶1)洗脱下来的5个活性组分,该5个组分的抗稻瘟病病菌EC_(50)分别为46.84、51.19、23.13、29.92、40.85μg/mL。进一步纯化7∶1、5∶1流分,分别获得1个单体成分和含有2种成分的混合物,在浓度为20μg/mL时,抗菌率分别为84.16%、81.24%。该单体结构经波谱分析和文献比对被鉴定为常春藤3-O-α-D-木吡喃糖基(1→3)-α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)-α-L-阿拉伯吡喃糖苷。     

大孔吸附树脂分离枳实总黄酮工艺的优化研究

[目的]优化大孔吸附树脂法纯化枳实（Auraneii immaturusFructus）总黄酮的工艺。[方法]比较AB-8、HPD-450和D1013种大孔吸附树脂对枳实总黄酮的吸附和解吸效果;并对上柱液的黄酮浓度、pH值和洗脱液乙醇体积分数进行了优化。[结果]D101大孔吸附树脂对枳实总黄酮的分离纯化效果最好,其纯化枳实总黄酮的工艺条件为：上柱液浓度3mg/ml,上柱液体积2.0BV,上柱液pH值4.5,洗脱液乙醇体积分数70%,洗脱体积2.0BV。[结论]D101大孔吸附树脂对总黄酮的综合性能较好,适合于枳实总黄酮的分离纯化。     

观光木叶黄酮类物质纯化、化学成分及抗氧化活性研究

采用D101大孔树脂对观光木叶进行柱层析,提取黄酮类物质;先后用10%、30%、50%和70%乙醇/水进行梯度洗脱,得到4个洗脱组分,测定了各个组分的总黄酮含量;采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-连氮-2-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)的清除实验评价了各组分黄酮的抗氧化活性;使用超高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱仪联用(UPLC-Q-EXCTIVE-MS)技术对纯化后黄酮纯度最高的组分进行了成分鉴定。结果表明:观光木叶乙醇提取物经过D101大孔树脂分离后,黄酮类物质主要聚集在30%乙醇/水洗脱组分,黄酮纯度为28.40%,并且对DPPH和ABTS的清除能力最强,清除率分别达到87.22%和99.07%,半抑制浓度(IC_(50))分别为112.753和65.528 mg/L;从30%乙醇/水洗脱组分中初步鉴定了7个黄酮类化合物,分别为3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮、酮洛芬、白麻苷、三叶豆苷、假荆芥属苷、射干苷、川陈皮素。     

博落回中生物碱的超声提取和分离

运用超声波辅助提取技术,通过L9(3)4正交试验考察了乙醇浓度(A)、液固比(B)和超声时间(C)3个因素对博落回生物碱提取的影响,同时还研究了D101大孔树脂对粗提液中生物碱的吸附和分离效果.结果表明最佳提取工艺为A3B1C3,即用9倍量的90%的乙醇超声提取45 min.D101大孔树脂能从博落回的pH2～3的盐酸提取液中以游离碱形式全部吸附其生物碱,分别采用50%乙醇和丙酮洗脱能有效地将极性和弱极性生物碱分离开来.     

观光木叶黄酮类物质纯化、化学成分及抗氧化活性研究

采用D101大孔树脂对观光木叶进行柱层析,提取黄酮类物质;先后用10％、30％、50％和70％乙醇/水进行梯度洗脱,得到4个洗脱组分,测定了各个组分的总黄酮含量;采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-连氮-2-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)的清除实验评价了各组分黄酮的抗氧化活性;使用超高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱仪联用(UPLC-Q-EXCTIVE-MS)技术对纯化后黄酮纯度最高的组分进行了成分鉴定.结果表明:观光木叶乙醇提取物经过D101大孔树脂分离后,黄酮类物质主要聚集在30％乙醇/水洗脱组分,黄酮纯度为28.40％,并且对DPPH和ABTS的清除能力最强,清除率分别达到87.22％和99.07％,半抑制浓度(IC50)分别为112.753和65.528 mg/L;从30％乙醇/水洗脱组分中初步鉴定了7个黄酮类化合物,分别为3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮、酮洛芬、白麻苷、三叶豆苷、假荆芥属苷、射干苷、川陈皮素.