2,4-D残留检测的ELISA方法的建立和初步应用

本研究用标准抗原、纯化抗体和辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG,建立了间接抑制酶联免疫吸附法,测定了地下水、蔬菜和原粮等样品中的2,4-D含量.结果表明,间接抑制ELISA检测样品中的2,4-D含量变异系数小于15%,样品回收率误差在15%以内;工作曲线表明,在50～2000ng/ml浓度范围内呈良好的线性关系,检测底限为50ng/ml,低于我国规定残留限量(200ng/m1).因此,本研究建立的间接抑制ELISA法检测地下水、蔬菜和原粮中的2,4-D含量是可行的.     

2,4-D残留免疫学检测方法研究进展

概述环境样品、生物样品和各类农作物等样品中2,4-D残留的免疫学检测方法的研究进展,并指出免疫学检测方法在使用中存在的问题和未来的发展趋势。     

2,4-D的毒性与残留检测方法研究进展

2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)是常用的除草剂和植物生长调节剂,并被广泛应用于提高水果品质和延长保鲜时间,但其毒性和残留问题日益受到人们的重视。为了给2,4-D的检测提供方便,从免疫毒性、生殖毒性及其他毒性方面综述了其毒副作用,简要叙述了其检测方法,如高效液相色谱法、气象色谱法、联用技术、免疫学检测方法等。     

砂糖橘果实中2,4-D的残留及保鲜效果研究

2,4-D与杀菌剂施保功混配处理可显著提高砂糖橘的贮藏保鲜效果,30 d内可较好地保持果实的糖度,防止Vc损失,并使果实维持一定的酸度。对处理后贮藏期间砂糖橘果皮和果肉内2,4-D含量变化进行分析,结果显示,在用2,4-D浸泡处理4 h后果皮中2,4-D含量急剧升高,在处理24 h后果肉中2,4-D含量最高,之后均逐渐降低。贮藏30 d后,2,4-D含量均降至一个较低的水平,符合柑橘的食用安全标准。     

2,4-D对土壤酶活性的影响

采用室内培养的方法,研究了2,4-D对土壤中脲酶、磷酸酶、过氧化氢酶活性的影响。结果表明:2,4-D对脲酶表现出先激活后抑制的作用,并且激活与抑制的天数几乎一致;对磷酸酶主要表现出抑制作用,开始有一段迟缓期随后表现激活作用紧接着又是抑制作用,主要趋势为抑制—激活—抑制;2,4-D对过氧化氢酶在中前期主要表现为抑制作用,后期出现刺激作用。     

离子色谱法同时检测饮用水中草甘膦、2,4-D和灭草松

建立并优化了对饮用水中草甘膦、2,4-D和灭草松进行同时检测的离子色谱法.选用大容量AS19分析柱,结合抑制型电导检测器,大体积进样,以35 mmol/L KOH为淋洗液,流速为1.00 mL/min,进样量350 μL,抑制型电导检测器进行分析3种除草剂的线性范围分别为50～1 000、7.00～70.0、20.0～400 μg/L,相关系数均大于0.995,方法检测限分别为4.8、2.0、24.0 μg/L,加标回收率为92.8％～109.9％,相对标准偏差为0.3％～8.8％(n=7).该法满足《生活饮用水卫生标准》(GB 5749-2006)的检测要求,可对饮用水中草甘膦、2,4-D和灭草松进行同时检测.     

气相色谱-质谱联用仪测定玉米子粒中2,4-D异辛酯的残留

为检测玉米子粒中2,4-D异辛酯残留量,样品用丙酮提取后,三氯甲烷萃取,经弗罗里硅土层析柱净化,用气相色谱质谱联用仪测定.结果表明:玉米子粒中2,4-D异辛酯添加平均回收率为88.7％～101.7％,变异系数为7.6％～9.0％,2,4-D异辛酯的最小检出量为2.0×10-11 g,玉米子粒中最低检出浓度为4.0×10-3mg/kg.     

2,4-D对小南瓜结籽特性和果实品质的影响

以韩国品种小南瓜(Cucubita moschata Poiret)‘香栗’为试验材料,在冀西北高原砂质栗钙土上,用不同浓度的2,4-二氯苯氧乙酸(简称2,4-D)处理小南瓜未授粉的雌花花柱、幼果或果柄,研究2,4-D对小南瓜结籽特性和果实品质的影响。结果表明:不同浓度2,4-D处理小南瓜的不同部位,使其产量和平均单果重降低;用50 mg/kg 2,4-D处理小南瓜的花柱,利于增加果肉干物质含量;用79 mg/kg 2,4-D处理小南瓜的幼果,能抑制籽粒的正常发育;用50 mg/kg 2,4-D处理小南瓜的果柄,能显著提高Vc含量;用50 mg/kg 2,4-D处理小南瓜的花柱对增加β-胡萝卜素含量效果较好。     

土壤酶活性对2,4-D丁酯的动态响应

通过盆栽试验,研究了种植条件下2,4-D对土壤脲酶、碱性磷酸酶和蛋白酶活性的动态影响。结果表明,与对照相比,低浓度2,4-D对脲酶活性有较强的激活作用,且随着处理时间的延长以及2,4-D浓度的增大酶活性增强,最高激活率达151%;高浓度2,4-D对脲酶活性表现为先抑制后激活。不同浓度2,4-D对碱性磷酸酶活性呈先激活后抑制又激活的趋势。当2,4-D浓度为0.25mL/L时,对蛋白酶活性具有激活作用;当2,4-D浓度增大时,蛋白酶活性表现为先抑制后激活。可见,2,4-D对土壤酶活性的影响,不仅与2,4-D的浓度和处理时间有关,还与土壤酶的种类有关,反映出土壤酶活性在一定程度上可作为除草剂污染土壤环境质量变异的有效指标。     

2，4-D丁酯水剂防除水葫芦的效果及其在水中的残留动态

采用枯叶指数、枯柄指数、新根抑制、鲜重防效等指标,评价2,4-D丁酯对水葫芦的防除作用,并测定其在水中的残留动态。盆栽毒力测定结果表明,2,4-D丁酯对水葫芦根、叶柄、叶片毒力较强,LC50分别为20.45、573.8、781.82mg·L-1;而对鲜重的毒力较弱,LC50为2880.29mg·L-1。水域测定结果表明,1.80g·L-1剂量药后40d,对叶片的防除效果及新根抑制率均达100%,2.40g·L-12,4-D丁酯对各防治指标的防除效果均达100%。2,4-D丁酯控制叶片及新根的速效性较好,2.40g·L-1处理10d后对叶片、新根的控制效果分别达到83.76%、82.61%。采用气谱法测定水中水葫芦不同覆盖度和不同施用量条件下2,4-D丁酯的残留量,0h残留量为0.1193～0.4320mg·L-1,均超过0.07mg·L-1残留标准;24h残留量为0.0017～0.1766mg·L-1,除无水葫芦覆盖的水体施用量为3.60和2.40g·L-1的72%2,4-D丁酯残留量超过或略超标准外,其他处理均未超标准。48h残留量为0.0014～0.052153mg·L-1,均未超标准。     

衍生后SPE_(C18)-GC-FID测定芦柑2,4-D残留

建立了永春芦柑(Citrus madurensis Lour)2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)残留量气相色谱(GC)测定方法。样品用乙酸乙酯超声波提取,减压蒸干,甲醇溶解,H2SO4催化衍生成甲酯,C18固相萃取净化除去H2SO4与杂质并富集10倍,HP-5柱气相色谱分离,火焰离子化检测器检测。结果表明,本方法测定2,4-D的线性范围为1.00-20.00 mg·kg-1,线性相关系数0.9987。合理用药时芦柑果皮2,4-D残留量为1.04 mg·kg-1,所测定的5批次芦柑2,4-D含量均在0-0.90 mg·kg-1之间,变异系数为4.8%-10.0%,2,4-D加标回收率为82%-89%。     

间接竞争性ELISA检测甲胺磷残留

采用制备的兔抗血清建立了甲胺磷（methamidophos,MTP)残留的间接竞争性ELISA方法，证明了抗血清的特异性较好，并确立了测定参数：抗血清与包被抗原的最佳工作浓度分别为1：3000和1：5000；最适检测范围为0．01－0．1μg/ml；批内变异系数7．56％，批间变异系数5．70％。     

气相色谱—串联质谱法测定青稞中除草剂2,4-D丁酯残留

建立气相色谱—串联质谱(GC-MS/MS)测定青稞植株、籽粒和土壤中2,4-D丁酯残留分析方法。青稞植株样品用乙腈提取,籽粒和土壤样品用丙酮∶正己烷(3∶2)提取后经Florisil柱净化,采用DB-5MS色谱柱程序升温分离,选择多反应监测模式(MRM)测定,外标法定量。结果表明:在优化试验条件下,该法检出限为0.03 mg/L,定量限为0.10 mg/L,线性范围为0.01~0.10 mg/L,线性相关系数0.996,加标回收率为92.8%~109.6%,相对标准偏差RSD为2.3%~8.2%。该试验方法结果可靠,简单快捷,具有可行性。     

鸡肉中氟苯尼考ELISA检测方法的建立及应用

 【目的】制备抗氟苯尼考（FFC）的高亲和力特异性抗体,建立检测氟苯尼考的间接竞争ELISA新方法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白（BSA）和人血清白蛋白（HSA）经混合酸酐法偶联,得到免疫抗原和包被抗原,其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫原FFC-HS-BSA免疫新西兰大白兔获得了效价较高的特异性抗体。建立并优化了间接竞争ELISA检测方法。【结果】抗血清效价为1﹕102 400。最佳包被抗原浓度为0.5 μg?ml-1,最佳抗体工作浓度为1﹕6 400,酶标二抗的工作浓度为1﹕20 000。回归方程Y = -0.1516X + 0.788（R2 = 0.9859）,检测范围为0.18～500 ng?ml-1,检出限为0.18 ng?ml-1,批内和批间平均变异系数分别为4.86%和7.77%。交叉反应试验中,抗血清与FFC结构相似的氯霉素和甲砜霉素交叉反应率分别为0.094%和0.098%,与其它药物交叉反应率均小于0.01%,表明该方法具有很强的特异性。FFC以浓度0.18～500 ng?g-1在鸡肉中添加,回收率为84.14%～106.1%,变异系数为2.1%～5.6%。【结论】成功获得了高效价、高特异性的抗FFC抗体,建立了鸡肉中氟苯尼考残留检测的ELISA方法。结果表明,所建立的检测方法具有灵敏、准确、简便、快速的特点。     

2,4-D处理对辣椒杂交制种产量和质量的影响

以辣椒杂交种‘甘科5号'的双亲及制种田第4~5层花为材料,对授粉花朵人工杂交后,随即用5种不同质量浓度的2,4-D溶液对花梗进行涂抹处理,以清水处理为对照(CK),重复3次,每重复100朵花。统计坐果率、单果种子数量和产量、种子千粒质量、发芽率和发芽势。结果表明,与CK相比,不同质量浓度2,4-D处理的坐果率、单果种子数量和产量显著提高,其中,20×10~(-3)g/L 2,4-D处理的坐果率最高;10×10~(-3)g/L处理的单果种子数量最多,单果种子产量最高,比CK提高约5.8倍。不同质量浓度2,4-D处理对种子的千粒质量和发芽率影响较小。辣椒杂交制种中,用5×10~(-3)~20×10~(-3)g/L的2,4-D溶液涂抹杂交授粉花梗,能够显著提高杂交坐果率和杂交果实的单果种子数量及产量,对种子质量各项指标没有显著影响。     

棉花抗除草剂2,4-D品系抗性遗传分析

利用高抗除草剂2,4-D的亲本与不抗除草剂的品系配制组合,对亲本、F1代和F2代植株进行抗性鉴定、调查、统计,进行棉花抗除草剂2,4-D性状遗传分析,试验结果表明,棉花除草剂2,4-D抗性性状是由一对显性基因控制。该抗除草剂性状属于质量性状遗传,便于在棉花育种中利用,抗性水平较高,能达到800mg/kg以上水平。抗除草剂性状可以在棉花常规育种和杂交种生产利用中发挥作用。     

高效液相色谱法测定豆芽中2,4-D含量

使用高效液相色谱法检测豆芽中2,4-D残留量,用氢氧化钠溶液作为提取剂,采用超声波法提取样品中的2,4-D,经SPE净化,采用紫外检测器检测;用保留时间进行定性分析,外标法进行定量计算。结果表明:标准曲线为Y=4 024.187 3x-113.999 9,相关系数0.9999,线性范围为0.05～10.00μg/mL,方法检出限为0.02 mg/kg,回收率为90.3%～104.7%,相对标准偏差为0.52%～11.18%。     

NAA、2,4-D对鹰嘴豆种子发芽的影响

本文通过对不同浓度NAA和2,4-D对鹰嘴豆种子发芽影响的研究,证明2,4-D浓度在1¹0 mg·L-1范围内,抑制了‘CDC Frontier’鹰嘴豆种子的发芽。NAA浓度在210 mg·L-1范围内,抑制了‘CDC Frontier’鹰嘴豆种子的发芽。NAA浓度在2²0 mg·L-1范围内,与对照相比,对发芽率和根长无显著影响;减少了茎长、茎重和叶片数;增加了根重。     

采后GA_3和2,4-D处理对葡萄贮藏效果的影响

采后用GA3 和 2 ,4-D处理可显著提高葡萄的保鲜效果。用 3 / GA3 和 5 0 / 的 2 ,4-D处理黑奥林葡萄 ,在 0 - 1℃条件下贮藏 3个月 ,果实耐压力分别提高 1 6 1g和 396g ;果梗耐拉力分别提高 1 1 9g和 1 4 7g ;鲜梗率分别提高 41和 39个百分点 ;好果率分别提高 1 1和 1 3个百分点 ;果糖总酸比值分别提高 1 2和 1 0。     

MSPD-HPLC法测定大蒜中3种2,4-D类除草剂的残留

本研究建立了一种应用基质固相分散-高效液相色谱(MSPD-HPLC)法,同时测定大蒜中2,4-二氯苯氧乙酸、2,4-二氯苯氧丙酸及2,4-二氯苯氧丁酸等3种2,4-D类除草剂残留的方法。大蒜样品与基质固相分散介质ODS一起研磨,所得分散体系以水洗去干扰杂质,再用甲醇洗脱得分析液;在HPLC上,分析液经ODS柱以乙腈和水为流动相洗脱,用紫外检测器检测。在0.1mg/kg及1.0mg/kg添加剂量下,3种2,4-D类除草剂在大蒜中的添加回收率为77.7%~93.1%,标准偏差为4.3%~10.8%,最低检测限为0.071~0.11μg/kg。