VP_7-ELISA检测牛、羊血清蓝舌病抗体的研究Ⅱ应用VP_7-ELISA检测蓝舌病抗体

蓝舌病ＶＰ７抗原包被板在－２０℃保存期为６个月,４℃保存１个月。抗原批内重复性试验ＣＶ＜１０％,批间重复性试验ＣＶ＜１０％。ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ与ＡＧＩＤ对４２０份血清平行检测结果：ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ较ＡＧＩＤ试验多检出了 １３份阳性样品, ＶＰ,－ＥＬＩＳＡ检出的阳性样品对ＡＧＩＤ阳性样品的覆盖率为９７．４％,对采自陕西等省１８１６份牛、羊血清样品进行检测,检出阳性样品数为２５７份阳性检出率为１４．２％。     

VP7—ELISA检测牛,羊血清蓝舌病抗体的研究Ⅱ应用VP7—ELISA检 …

蓝舌病ＶＰ７抗原包被板在－２０℃保存期为６个月,４℃保存１个月。抗原批内重复性试验ＣＶ＜１０％,批间重复性试验ＣＶ＜１０％。ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ与ＡＧＩＤ对４２０份血清平行检测结果：ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ较ＡＧＩＤ试验多检出了１３份阳性样品,ＶＰ７－ＥＬＩＳＡ检出的阳性样品对ＡＧＩＤ阳性样品的覆盖率为９７．４％,对采自陕西等省１８１６份牛、羊血清样品进行检测,检出阳性样品数为２５７份,阳性检出率为１４．     

应用C—ELISA检测禽流感病毒核蛋白抗体

应用杆状病毒表达的重组核蛋白及单抗建立了竞争ＥＬＩＳＡ（Ｃ—ＥＬＩＳＡ）,用于抗Ａ型禽流感病毒核蛋白抗体的检测。试验检测了７５６只鸡,１１２３只火鸡,７０７只鸸鹋和１２６１只鸵鸟的共３８４７个血清样品。与琼脂扩散试验（ＡＧＩＤ）对比,Ｃ—ＥＬＩＳＡ方法对上述四种血样的敏感性均为１００％;而与血凝抑制试验（ＨＩ）相比,则其敏感性在鸡、火鸡和鸸鹋为１００％。鸵鸟为９６．２％。经ＡＧＩＤ检测为阴性而Ｃ—ＥＬＩＳＡ阳性的样品中有９０％以上通过ＨＩ试验至少一种血清亚型呈阳性反应。试验发现Ｃ—ＥＬＩＳＡ和ＡＧＩＤ方法的特异符合率在８５．５％—９９．８％之间。这些结果表明,Ｃ—ＥＬＩＳＡ和ＨＩ一样都比ＡＧＩＤ更敏感、更特异。因此,Ｃ—ＩＬＩＳＡ有可能取代ＡＧＩＤ,用于禽类（包括平胸鸟）Ａ型流感病毒血清学监测。     

应用琼脂免疫扩散试验检测猪伪狂犬病抗体的研究

建立了ＡＧＩＤ用于猪伪狂犬病（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ,Ｐｒ）的诊断。对９８份被俭血清的ＡＧＩＤ结果与ＳＮ结果比较,当ＳＮ滴度大于１：８时两者的阳性检出符合率为１００％,ＳＮ滴度小于或等于１：８时,两者的阳性检出符合率为８７．５％,ＡＧＩＤ和ＳＮ总的阳性符合率为９４．４％,结果表明,ＡＧＩＤ对Ｐｒ可进行特异性诊断,流行病学调查和免疫动态监测。     

赤羽病琼脂免疫扩散试验诊断方法的研究

应用引自美国和日本的羽病毒和标准阳性血甭,制备了琼脂免疫扩散试验（ＡＧＩＤ）抗原和高免阳性血清,建立了赤羽病ＡＧＩＤ诊断方法。应用此方法对上海、杭州、广州等地的１３８３头牛进行了检疫,ＡＧＩＤ抗体阳性牛７４６头,阳笥率５４．０％,与流行情况相符。同时对从澳大利亚、美国、新西兰和加拿大等国进口的牛、羊、猪血清１６２头份进行了检疫,全部为ＡＧＩＤ抗体阴性。     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和（ＳＮ）试验和单克隆抗体（ＴＧＥｍＡｂ和ＴＧＥ／ＰＲＣＶｍＡｂ）阻断酶联免疫吸附试验（Ｂ－ＥＬＩＳＡ）对８１头美国进口猪血清作猪传染性胃肠炎（ＴＧＥ）抗体检测。ＳＮ试验检出７份阳性血清，检出率为８．６４％；Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于ＳＮ试验     

禽流感研究：I.鸡A型禽流感病毒的分离与血清学初步鉴定

从发病率颇高的产蛋鸡群和死亡率达３０％以上的肉鸡群的病例中，先后分离到６株Ａ型禽流感病毒。这些分离毒株可在鸡胚中传代。可以凝集鸡红细胞，不被新城疫阳性血清所抑制。用这些分离毒株制成的ＡＧＰ抗原与禽流感阳性血清在ＡＧＰ试验中出现白色的沉淀线。用ＡＩＤ＿（９３－１）分离毒株与１５个标准ＨＡ亚型的标准血清进行ＨＩ试验，结果鉴定出ＡＩＤ＿（９３－１）毒株的ＨＡ亚型为Ｈ＿９。至于神经氨酸酶（ＮＡ）有待于今后测定。其余５个分离毒株的血凝素可被ＡＩＤ＿（９３－１）毒株的高兔血清所抑制。人工复制病例出现明显的临诊症状，可缓慢康复，不引起死亡。这些分离毒株具有良好的免疫原性。通过电镜观察符合流感病毒的形态特征，病毒粒子的直径为８０～１２０ｎｍ。     

斑点免疫金测定法检测鸡减蛋综合征抗体的研究

用胶体金标记提纯后的免抗鸡ＩｇＧ，建立了一件以微孔滤膜为固相载体，以红色胶体金作为标记物的检测ＥＤＳ－７６病毒抗体的斑点免疫金测定法（ＤＩＧＦＡ）．该法具有简便、灵敏、快速等优点，全过程于３～５分钟内完成，阳性结果在膜上呈现红色斑点；对鸡ＩｓＧ的最小检测量（灵敏度）为６３×１０－９ｇ；与其它病毒阳性血清无交叉反应。ＤＩＧＦＡ检测ＥＤＳ－７６抗体既可定性，也可定量。检测８０份待检血清，在ＨＩ检出的５６份阳性标本中（效价≥４ｌｏｇ２）用ＤＩＧＦＡ检出阳性标本５５份（效价≥６１ｏｇ２）二者阳性符合率为９８．２％．与ＨＩ比较，ＤＩＧＦＡ平均高２．５（ｌｏｇ２）。本技术为ＥＤＳ－７６和其它禽病的快速诊断和免疫监测提供了一个新的方法。     

应用C—ELISA检测禽流感病毒核蛋白抗体

应用杆状病毒表达的重组核蛋白及单抗建立了竞争ＥＬＩＳＡ（Ｃ－ＥＬＩＳＡ），用于抗Ａ型禽流感病毒核蛋白抗体的检测。试验检测了７５６只鸡，１１２３只火鸡，７０７只鸸鹋和１２６１只鸵鸟的共３８４７个血清样品。与琼脂扩散试验（ＡＧＩＤ）对比，Ｃ－ＥＬＩＳＡ方法对上述四种血样的敏感性均为１００％；而与血凝抑制试验（ＨＩ）相比，则其敏感性在鸡、火鸡和鸸鹋为１００％。鸵鸟为９６．２％。经ＡＧＩＤ检测为阴性而Ｃ－     

HIV—2gag基因在重组痘苗病毒中的表达

以痘苗病毒ＨＡ基因为侧翼，将ＨＩＶ－２ｇａｇ基因部分序列（简称Ｇ１）和全部序列（简称Ｇ２）分别插入牛痘病毒Ａ型包涵体（ＡＴＩ）和串联１０个（与ＨＡ基因反向）或１６个（与ＨＡ基因同向）痘苗病毒Ｐ７．５组成的复合型启动子下游，构建了４个重组痘苗病毒表达载体质粒。经脂质体转染、鸡红细胞吸附试验筛选和免疫荧光鉴定，获得４株能稳定表达目的蛋白的重组痘苗病毒。实验结果表明，以ＨＡ基因为侧翼构建重组病毒的重组率约为０．１％，阳性重组率为２５％～１００％。实验中还发现，以ＨＡ基因为侧翼的重组痘苗病毒能够引起细胞融合，其可作为筛选重组痘苗病毒的另一种标志。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，表达的Ｇａｇ蛋白能被ＨＩＶ－２血清中的特异性抗体所识别，并能诱导小鼠产生抗ＨＩＶ－２Ｇａｇ抗体。     

现地马传贫琼扩阴性 酶联免疫法阳性病马血清的特异性试验

在内蒙古牙克石市图里河镇非马传贫注苗区，用琼脂扩散试验（ＩＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）两种方法对６４匹马进行了对比检查，检出ＩＤ、ＥＬＩＳＡ双阳性４匹、ＤＬＩＳＡ单阳性马３匹。对３匹ＩＤ阴性，ＥＬＩＳＡ阳性马血清用不同浓度琼扩抗原重复检测结果为阴性，而用不同批次的ＥＬＩＳＡ抗原包被板及酶标抗体检测结果均为陧阳性，用马传盆病毒抗原对３匹单阳性马血清中和后，再进行ＥＬＩＳＡ测定，ＯＤ值均降低５     

用固定细胞阻断酶联免疫吸附试验鉴别诊断猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的感染

用固定细胞阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）对来自丹麦猪的１８０份血清进行了猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）和猪呼吸道冠状病毒（ＰＲＣＶ）感染的鉴别诊断，共检出了ＰＲＣＶ抗体阳性血清１０７份（５９．４％），ＴＧＥＶ抗体阳性血清０份。同时也检测了一些来自国内不同ＴＧＥＶ感染类型的猪场血清。该鉴别诊断方法在我国的建立和应用为从ＰＲＣＶ阳性国家进口猪的ＴＧＥ的检疫提供了一条有效途径。     

雏番鸭细小病毒病诊断技术和试剂的研究

根据番鸭细小病毒单克隆抗体（ＭＰＶ－ＭｃＡｂ）致敏的胶乳可与ＭＰＶ产生特异性凝集反应，而这种特异性凝集反应可被ＭＰＶ抗体所抑制的原理，建立了胶乳凝集试验（ＬＰＡ）和胶乳凝集抑制试验（ＬＰＡＩ）。致敏抗体蛋白浓度为０．５ｇ／Ｌ时，ＬＰＡ可检测出ＭＰＶ最小蛋白量为２μｇ／Ｌ。对ＬＰＡ与ＦＡ、ＬＰＡＩ与ＡＧＰ作了比较，结果：ＬＰＡ阳性率９０．５％，ＦＡ阳性率９２．４％，两者的符合率９２．４％；鸭血清ＬＰＡＩ抗体效价在Ｌｏｇ２５以下时，ＡＧＰ试验均阴性，前者比后者敏感性高３２～６４倍。ＬＰＡＩ抗体效价与保护力相关性试验结果表明，当鸭血清中ＬＰＡＩ抗体效价在Ｌｏｇ２１以上时，雏番鸭均能耐受强毒的攻击，两者呈正相关。致敏胶乳和抗原保存时间在４～８℃时，分别为５个月和６个月；在２２～２８℃时，分别为７ｄ和１５ｄ。     

4型菌毛、毒素及蛋白酶在动物源气单胞菌的检测

将来源于鱼、猪、犬等９种动物的１８株气单胞菌分离株通过ＡＤ（氨苄青霉素－糊精）培养基纯化。另以大肠杆菌束状菌毛相关（ｂｆｐ－ｒｅｌａｔｅｄ）基因的ＰＣＲ引物对ＥＢ１（ＧＡＴＴＧＡＡＴＣＴＧＣＡＡＴＧＧＴＧＣ）—ＥＢ２（ＧＧＡＴＴＡＣＴＧＴＣＣＴＣＡＣＡＴＡＴ）扩增,用ｄｉｇｏｘｉｎｇｅｎｉｎ－１１－ｄＵＴＰ标记,构建核酸探针,作斑点杂交试验,用以检测上述气单胞菌菌株的４型菌毛,同时以溶血试验检测其毒素,用脱脂奶溶蛋白圈试验检测其蛋白酶。结果显示,在１８个菌株中,４型菌毛、毒素和蛋白酶均为阳性者为１０株（５５．６％）;３项指标均无肯定的阳性结果者４株,两者合计共１４株,占检测总数约８０％（１４／１８）,提示这３种毒力因子存在较高的相关性。所有鱼源株（５株）三项指标皆为阳性;４株猪分离株三项指标均为阳性者占一半;其它动物分离株检测结果无明显规律性     

水牛盱眙病血清学研究

从水牛盱眙病病肝和淋巴结提纯病毒抗原，用双层间接ＥＬＩＳＡ和免疫扩散（ＩＤ）检测盱眙病抗体，结果在２９头病牛血清中ＩＤ阳性率为８％，ＥＬＩＳＡ阳性率为９３．１％；５４头疫区牛血清中，ＩＤ阳性率为１．９％，ＥＬＩＳＡ阳性率为１１．１％；非疫牛则两法均为阴性。以淋巴细胞免疫吸附试验证实病牛淋巴细胞的细胞膜上存在有病毒抗原。以病水牛血清和健康水牛对比作免疫电泳，发现病牛血清中缺少ＩｇＭ带     

银加强胶体金技术检测猪细小病毒的研究

本研究首次成功地建立了检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的银加强胶体金检测法（ＳＥＣＧＡ），并确定了操作流程中的最佳试验条件。应用该法对纯化ＰＰＶ抗原的最低检出量为０．３１２５ｎｇ／点，其敏感性分别为间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＨＡ的８倍和１０００倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明ＳＥＣＧＡ具有较高的特异性。２０份样本ＳＥＣＧＡ的检测结果与病毒分离和鉴定结果完全相符。ＳＥＣＧＡ和间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对７７份样本检测的阳性率分别为８３．１％和８０．５％，其阳性符合率为９６．９％。研究结果表明本法具有经济、敏感性、特异性强等优点，可用于ＰＰＶ感染的特异诊断。为胶体金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究奠定基础。     

衣原体单克隆抗体在牛羊血清诊断上的应用

采用淋巴细胞亲交瘤技术，研制出的抗衣原体单克隆抗体，应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法，对本地区所采集的１２８份羊血清、９０份牛血清进行检测，结果，羊血清阳性检出率为２５．８％，牛血清阳性检出率为３２．２％，选择５０份羊血清、５０份牛血清用已建立的检测衣原体抗体ＥＬＩＳＡ与间接血凝试验（ＩＨＡ）进行比较，牛血清ＥＬＩＳＡ阳性检出率为３２．０％，ＩＨＡ为２４．０％，ＥＬＩＳＡ比ＩＨＡ试验高出８个百分点；羊血清ＥＬＩＳＡ阳性检出率为２６．０％，ＩＨＡ为２２．０％，ＥＬＩＳＡ比ＩＨＡ高出４个百分点。     

蛋鸡鸡毒支原体与大肠杆菌混合感染的诊断及对产蛋率影响的分析

对湖北省某鸡场１１０只蛋进行了鸡毒支原体（ＭＧ）、滑液支原体（ＭＳ）血清平板凝集试验（ＳＰＡ）具有明显临床症状的鸡（眶下窦炎，呼吸困难，罗音等）均为ＭＧ－ＳＰＡ阳性（５４／５４）同舍６０只无症状鸡中有４６只为ＭＧ－ＳＰＡ阳性（７６．６％）对４只病鸡及４只ＭＧ－ＳＰＡ阴性健康鸡进行了支原体及细菌的分离鉴定。结果从３只病鸡中分离到鸡毒支原体，从２只病鸡分离到大肠杆菌Ｏ２血清型，证明为鸡毒支原体与大肠杆     

鸡新城疫琼扩试验与血凝抑制试验相关性的研究

应用ＮＤＶ－Ｌａｓｏｔａ株鸡胚液，经灭活、透个和浓缩而制成琼脂扩散（ＡＧＰ）抗原，对ＮＤ抗体进行检测，通过阻断等试验，表明ＡＧＰ检测ＮＤ具有特异性；应用血凝抑制试验（ＨＩ）和ＡＧＰ试验同步检测血清及卵黄中ＮＤ抗体，结果ＨＩ抗体Ｎ ＡＧＰ抗体两者具有相关性（ＮＤ－ＨＩ为４１ｏｇ时，ＡＧＰ是性率达９７．４％，＞５１ｏｇ时ＡＧＰ阳性率为１００％；ＡＧＰ试验简便，准确性高；特别适合大量血清样品的检测。     

江西省部分单位实验小鼠鼠痘病毒感染的调查

采用敏感性和特异性较好的酶免疫试验（ＥＩＡ）对江西省一些饲养单位在普通环境下饲养的４个品系２３２只小鼠进行了鼠痘病毒抗体检查。结果发现阳性标本３３份，阳性率为１４．２％。其中昆明小鼠的阳性率为１８．１％（３３／１８２），其它３个品系未检出。阳性感染鼠群似呈地区性分布，吉安地区未发现。