犬Ⅱ型腺病毒自然弱毒株的分离与鉴定

从一只３月龄病犬中分离出一株犬腺病毒（ＣＡＶ）,暂定名为ＹＣＡ１８。从一系列形态学、生理化学、生物学和分子病毒学实验证明这是一株Ⅱ型犬腺病毒自然弱毒。此毒株能在犬、猪肾原代细胞和传代细胞系上生长,能产生腺病毒感染的特征性细胞病变,细胞肿胀,变圆和呈“葡萄串样”。在细胞核内可见病毒粒子及其前本的晶格状排列,病毒粒子呈２０面体立体对称,表面有排列整齐的壳粒;能抵抗乙醚的处理,在ＰＨ３及５０℃温度中稳定     

犬Ⅱ型腺病毒蚀斑技术的建立和初步应用

犬Ⅱ型腺病毒(CAV-2)是犬喉气管炎的病原,通常只引起轻微的呼吸道疾病[1],但是在其它病毒或细菌继发感染的情况下可诱发较严重的肺炎、支气管炎、扁桃体炎[2],直接影响我国军、警犬和实验犬的培育、训练和使用.本文拟建立一个广泛适用的犬腺病毒蚀斑技术,为进一步以犬腺病毒为载体的重组弱病毒疫苗的筛选提供一个有效的技术方法.介绍如下.     

应用犬五联弱毒冻干苗预防犬副流感的免疫程序的研究

本试验应用目前国内研制的含犬副流感弱毒疫苗的五联苗,采用微量血凝与血凝抑制试验,通过对96条军犬和民犬进行定期采血检测,研究了本疫苗预防犬副流感的免疫程序,以犬副流感抗体效价达到1:64为标准,该苗的免疫程序为第一次注苗后14天再注射1次,以后每隔6个月注射1次。在将血凝与血凝抑制试验用于犬的血清副流感抗体检测中,采用了绵羊红细胞,结果清晰准确,方法有所创新。     

水貂病毒性肠炎弱毒疫苗株的选育及实验免疫研究

从自然发病死亡貂体内分离到１株水貂病毒性肠炎（ＭＶＦ）强毒株－ＭＥＶ，将该株病毒在犊牛睾丸（ＣＴ）细胞和猫肾传代细胞（ＣＲＦＫ）上混合培养进行适应。当传至５６代时，在ＣＴ细胞上出现细胞病变（ＣＰＥ），而后单独在ＣＴ细胞上传至７０代，经终点稀释克隆和鉴定获得一弱毒株。以其制备的ＣＴ细胞弱毒疫苗，给每只貂注射或口服１～５ｍＬ均未见任何不良反应。注苗后１２、６０、７２、１８０ｄ攻毒，保护率均为１００％。     

犬Ⅱ型腺病毒的分离鉴定

在做犬腺病毒分子流行病学调查的过程中,从送检的犬粪便中分离出多株犬腺病毒,并对其中１株进行了系统鉴定。经形态学、理化学、血清学交叉中和试验、动物感染试验与分子生物学鉴定,证明为１株犬传染性喉气管炎病毒的强毒,即犬Ⅱ型腺病毒。     

用PCR技术鉴定犬细小病毒弱毒疫苗株

通过分析比较犬细小病毒(CPV)弱毒疫苗株和强毒株的基因序列，设计了3条引物并组成2对引物，对弱毒疫苗株和强毒株进行了半嵌套式PCR扩增。第1轮PCR扩增的结果为CPV弱毒疫苗株和强毒株有相同的目的片段(585bp)；第2轮PCR扩增的结果为CPV强毒株有375bp目的片段，而CPV弱毒疫苗株没有375bp目的片段。对PCR产物进行电泳和酶切分析，结果证明PCR产物片段大小和酶切位点与设计的产物完全一致。特异性和敏感性测定结果表明，该方法是高度特异和敏感的，可用于弱毒疫苗毒株与强毒株的鉴定。     

犬细小病毒性肠炎弱毒疫苗的研究

选用从犬科动物貉中分得的貉细小病毒CR86106株为种毒,用猫肾传代细胞F81系培养增殖,制成犬细小病毒性肠炎弱毒疫苗(M-CPV)。该苗对猪红细胞的HA效价平均156,对F81细胞系的TCID_(50)平均为4.02。对离乳幼犬的最低免疫剂量为5×10~(3·8)TCID_(50)。苗注后2周即可获得免疫,血清HI抗体达32即可抵抗CPV强毒感染。疫苗的免疫期为1年。于-15℃以下冰盒保存,疫苗的有效期为9个月。CR80106株遗传性稳定,经CPV易感幼犬和F81细胞系连续传5代和22代,对犬的安全性和免疫原性不变。病毒蛋白经SDS—PAGE和HPLC分析,均未发现与原始毒株有不同。M-CPV对母源抗体干扰有较强的抵抗力,母源抗体达32的幼犬,100％可对该亩产生免疫应答。HI抗体<2的CPV易感幼犬接种该苗后除粪便轻度阳转外,无其他异常,同居CPV易感幼犬也不会感染发病。两次免疫后作同居感染攻毒,可获得完全保护,不会由粪便排出强毒。于产前20d给怀孕母犬接种,也未见有流产、早产、死胎和弱胎现象发生,所产仔犬全部生长发育正常。全国16个军、警犬场队用本疫苗累计免疫各类犬3320只,全部安全,没有一只因注苗而发病,经1～2年临床观察,3296头获得保护,保护率为99.28％。     

犬2型腺病毒SY株的致弱驯化

作者对分离和系统鉴定的一株犬传染性喉气管炎病毒（犬2型腺病毒）SY（沈阳）株，用犬肾传代细胞MDCK进行了致弱驯化，每驯化15代做一次初步的犬的安全性试验。用大剂量不同代次病毒对易感犬进行人工感染试验，每天观察犬的临床症状及白细胞总数，并于接毒后的第5d安乐死，作病理解剖学和病理组织学检查，易感犬的感染试验结果表明，SY株在犬贤细胞上传15代时对犬的致病力已降低，30代时对犬已不引起发烧，精神沉郁和厌食等症状，仅引起轻度的鼻炎，中度的咽炎，剖检肺表现正常，仅见支气管淋巴结肿大，45代时无临床症状，剖检除扁桃体肿大外没有见到其它症状，60代毒已完全失去致病力，未见任何临床症状及病理变化。     

犬2型腺病毒对犬的口服免疫研究

对未经犬腺病毒免疫的两月龄左右杂交狼犬，随机分为６组每组５只，另设５只对照，用作者分离鉴定和致弱驯化的犬喉气管炎病毒的第６０代ＤＫ细胞培养物（ＳＹＣＡＶ－２－ＤＫ６０）对犬进行免疫试验，在免疫第４周采血分离血清，测定犬腺病毒的血凝抑制抗体（ＨＩ）效价，结果３０只试验犬全部产生了ＨＩ抗体，表明ＳＹＣＡＶ－２可通过口服或饵料的途径对犬实施免疫，为犬口服联合疫苗以及犬２型腺病毒为勒体的口服狂犬 －腺病毒     

鸡ND、IB、IBD三联弱毒苗免疫剂量及免疫保护试验研究

本研究采用β-微量血凝抑制试验、琼脂扩散(AGP)试验及强毒攻击保护试验,对研制的ND、IB、IBD三联弱毒疫苗的最小免疫量和免疫保护性进行了测定,结果显示,125羽/mL以下的疫苗都能获得较好保护,且对ND、IB、IBD的保护率分别为100%、90%、70%。     

川株伪狂犬病疫苗的动物免疫试验

本试验采用川株伪狂犬病毒,通过鸡胚原代细胞培养,48～72h收毒,以白油为乳化剂,用胶体磨乳化制苗。用该苗106.0TCID50、104.0TCID50两个剂量先后建立非靶动物(兔63只、小白鼠、大白鼠各30只、豚鼠6只)的动物模型试验及靶动物(哺乳仔猪、母猪、育肥猪共135头)的兔疫区域性试验,结果表明:本疫苗安全性良好,免疫抗体在35～45d出现高峰,免疫后猪体能抵御强毒攻击,无任何不良反应。     

布鲁氏菌病弱毒活疫苗经不同黏膜途径免疫奶牛的排菌程度及免疫反应

为探究布鲁氏菌病疫苗经不同黏膜途径免疫奶牛后对体液免疫与细胞免疫水平及疫苗体外排菌方面的影响,将80头10~12月龄的奶牛平均分为四组,通过眼部滴注(A组)、口腔喷注(B组)、阴道灌注(C组)三种黏膜免疫途径对奶牛接种布鲁氏菌病弱毒活疫苗(A19株),并与皮下注射免疫组(D组)进行比较,测定了免疫后7 d内黏膜免疫组的排菌情况,180 d内四组免疫奶牛的抗体效价和60 d内四组免疫奶牛的外周血淋巴细胞细胞因子分泌(IFN-γ、IL-2和IL-4)水平。结果显示:黏膜免疫组在免疫后5 d内均有不同程度的排菌,以免疫后1 d内排菌量为最高,并且在黏膜免疫组中阴道灌注组排菌量最低;各组奶牛在免疫后20 d时MSAT测定抗体效价平均值均上升至最高,之后持续下降,黏膜免疫组的抗体水平显著低于注射免疫组,且在黏膜免疫组中阴道灌注组的抗体水平最高;A组和B组奶牛在免疫后120 d RBT检测无阳性,C组在免疫后150 d RBT检测无阳性,D组在免疫后180 d RBT检测阳性率35%;B组、C组在免疫后7 d,A组、D组在免疫后20 d IFN-γ分泌量达到最高值,各组IL-2和IL-4分泌量未见明显变化,黏膜免疫组中阴道免疫组的IFN-γ分泌量为最高,仅次于注射免疫。结果表明,阴道灌注是一种较优的奶牛布鲁氏菌病黏膜免疫方式。     

犬细小病毒基因疫苗对幼貉的免疫试验

应用已构建的pcDCPV和pIRCPVIL2重组质粒配制成疫苗,对幼貉进行免疫,并对其免疫反应进行观察。应用夹心ELISA方法检测外周血中特异性的抗细小病毒血清抗体免疫球蛋白(IgG)的水平,MTT比色法检测外周血中淋巴细胞的转化率,对基因疫苗的免疫保护进行观察。结果表明,用pcDCPV和pIRCPVIL2重组质粒免疫后的幼貉对细小病毒的攻击具有一定的保护性,为pcDCPV和pIRCPVIL2重组质粒的应用奠定了基础。     

猪瘟兔化弱毒疫苗与我国近年猪瘟野毒的免疫保护相关性试验

２批猪瘟兔化毒睾丸细胞苗分别来自两家兽医生物药品厂，各分别免疫接种猪只，随后以５株猪瘟病毒野毒分别攻击，疫苗接种猪完全存活，对照猪完全死亡。此５株野毒分离自国内不同地区，并皆已经过细致的鉴定，以免疫荧光技术对猪扁桃体进行了活体检查，各对照猪材料上能在攻击后一周时出现病毒，而疫苗接种猪在整个观察期间未出现病毒，据此，显然可见猪瘟兔化毒细胞苗在预防国内猪瘟上极有效力     

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活 疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)免疫程序研究

设计不同的免疫程序,用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)免疫黄羽肉鸡,通过对ND、IB、H9抗体滴度监测,探讨ND、IB、H9抗体消长规律及鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)的免疫程序。试验结果表明,用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)免疫黄羽肉鸡后,其诱导产生的ND、IB、H9抗体的消长规律基本同步;仅于10日龄免疫一次三联灭活苗,其抗体水平较低,于20、40日龄二免、三免或10日龄先用鸡新城疫病毒(La Sota株)、禽流感病毒(H9亚型,SS/94株)二联灭活疫苗作基础免疫,20或40日龄再用三联灭活苗作加强免疫,则上述3种抗体均快速上升,且维持时间长。根据试验结果,建议按照正常免疫程序作基础免疫的健康肉鸡,饲养期较短的可于20日龄左右用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)作加强免疫,0.3 mL/只;饲养期较长的则于40日龄左右用鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+SS/94株)作加强免疫,0.5 mL/只。     

巨型艾美耳球虫早熟减毒株的选育

对巨型艾美耳球虫(长春株)经20代的早熟选育,其潜隐期由132h缩短到116h,成为早熟株.该早熟株不经选择传递2代,仍保持了早熟的特性.该早熟株比其亲代株繁殖力下降74%,致病力降低,但仍然保持了其免疫原性.     

凋亡抑制基因免疫对小鼠生长的影响

小鼠经凋亡抑制基因免疫后，从3周龄到8周龄基因免疫组小鼠平均体重比对照组分别低0．48、1．18、1．16、1．35、0．99、0．85g。基因免疫后的头2周，小鼠生长速度明显低于对照组，且生长速度的差异随着免疫时间的增加而减小。这提示该基因与小鼠生长有关，如果用基因治疗方法增加凋亡抑制基因表达量，有可能增加小鼠生长速度。将凋亡抑制基因作为候选基因，研究它对家畜生长的遗传效应，对家畜繁育有重要的意义。