澳洲指橘与粗柠檬体细胞杂种倍性FCM分析及其花粉活力检测

利用流式细胞仪对5株澳洲指橘(Microcitrus papuana Swingle,2n=2x=18)与粗柠檬(Citrus jambhiri Osbeck,2n=2x=18)属间体细胞杂种进行倍性分析,以已知倍性的二倍体粗柠檬植株的峰对应荧光值(FL)50作为对照,5棵再生植株的FL值分别为51、51、47、52、48,表明这些体细胞杂种植株均为二倍体。同时,实验结果还表明,HR(HighResolution)试剂盒中的核提取液HR-A和染色液HR-B的最佳处理时间分别是5min和2min。体细胞杂种于2002年3月首次开花,对其花粉活力进行分析,结果表明体细胞杂种的花粉活力为50％～90％。     

柑桔体细胞杂种的花粉育性及其遗传稳定性

对原生质体融合产生的５个已开花的体细胞杂种的花粉育性观察表明，它们的花粉染色活力在０－９０．１８％之间。其中４个体细胞杂种的花粉育性介于双亲之间，偏向高值亲本；种间异源四倍体体细胞杂种产生７．１８％－１８．５９％的小花粉，这类花粉只有正常花粉粒的１／３左右大小、内空。脐橙与红桔的体细胞杂种不产生花粉。墨西哥来檬与伏令夏橙的体细胞杂种花粉育性稳定，年份间无显著差异；粗柠檬与哈姆林甜橙的体细胞杂种无性繁殖后代之间，花粉育性无显著差异。     

柑桔体细胞杂种的花粉育性及其遗传稳定性

对原生质体融合产生的５个已开花的体细胞杂种的花粉育性观察表明，它们的花粉染色活力在０－９０．１８％之间，其中４个体细胞杂种的花粉育性介于双亲之间，偏向亲值亲本，种间异源四倍体体细胞杂种产生７．１８％￣１８．５９％的小花粉，这类花粉只有正常花粉粒的１／３左右大小、内空，脐橙与结桔的体细胞杂种不产生花粉，墨西哥来檬与伏令夏橙的体细胞杂种花粉育性稳定，年份间无显著差异，粗柠檬与哈姆林甜橙的体细胞杂种无性     

柑橘体细胞杂种有性后代花粉母细胞减数分裂的观察

柑橘体细胞杂种后代为三亲来源,采用酸解压片法对柑橘体细胞杂种[哈姆林甜橙(Citrus sinensis Osbeck)+粗柠檬(C.jambhiri Luss)]与单胚二倍体植株宜本杂4号[华农本地早橘(C.reticulata Blanco)×宜昌橙(C.ichangensis Swingle)]的有性杂种后代进行减数分裂观察,以明晰柑橘体细胞杂种有性后代减数分裂行为。结果表明,有性后代二倍体后代减数分裂行为与二亲杂种后代相似;三倍体后代减数分裂过程异常现象较二亲杂种后代复杂,中期Ⅰ出现56.9%的不配对染色体以及各种多价体,中期Ⅰ和中期Ⅱ观察到游离在赤道板外的染色单体,变幅为1～3个,平均比例分别为51.2%和38.68%;后期Ⅰ和后期Ⅱ观察到染色体桥及染色体断片、落后染色体;四分体时期含微核等。同时对后代植株花蕾直径与花粉母细胞减数分裂各个时期之间的关系进行了分析。     

柑橘体细胞杂种超低温保存后的植株再生

 对9年生印度酸橘(Citrus reticaulata)和飞龙枳(Poncirus trifoliata)的体细胞杂种的茎段进行离体培养得到再生植株，用改良的玻璃化法对再生植株茎尖进行超低温保存后获得92％的再生率。这是柑橘体细胞杂种茎尖超低温保存的首例报道。     

柑橘种间体细胞杂种的核质遗传研究

为了解柑橘体细胞杂种的核质遗传组成,采用流式细胞仪(FCM)、简单序列重复(SSR)、相关序列扩增多态性(SRAP)以及酶切扩增多态性序列(CAPS)对此前通过对称融合获得的2株种间体细胞杂种进行了分析。结果表明,在丹西红橘+红江橙种间组合中,分析的2株植株中1株为二倍体非对称体细胞杂种,其核DNA具有双亲的部分DNA,并有重组发生,胞质DNA则来源于红江橙(叶肉亲本);而另1株则是异源四倍体体细胞杂种,其核DNA来源于双亲,并有重组发生,胞质DNA则来源于红江橙。     

马铃薯栽培种与野生种叶肉细胞融合及体细胞杂种鉴定

 以马铃薯栽培种Solanum tuberosum ‘中薯二号’的无性系3 # 、8 # (2n = 48) 和二倍体野生种Solanum chacoense (2n = 24) 的无菌苗为原生质体来源, 比较了PEG (聚乙二醇) 融合和电融合两种方式马铃薯原生质体融合效果的影响。结果显示, 两种融合方式对细胞的融合率没有显著差异, 但电融合的细胞植板效率和愈伤组织分化能力均显著高于PEG融合法。在早期挑选的生长旺盛的愈伤组织再生的100个株系中, 经RAPD 标记检测有97 个系为体细胞杂种。杂种植株经流式细胞仪倍性分析表明, 52.6 %为六倍体, 14.4 %为八倍体, 14.4 %为非整倍体, 18.6 %为混倍体。叶绿体SSR 引物NTCP29 用于细胞质重组检测, 结果显示, 体细胞杂种中叶绿体具有偏亲现象, 大多数杂种只含有单一亲本的叶绿体类型, 只有16.5 %株系为叶绿体重组的杂种植株。     

杜鹃红山茶花粉活力测定方法的比较研究

以4年生嫁接的杜鹃红山茶花粉为试材,采用MTT法、TTC法和离体萌发法,研究了不同测定方法对杜鹃红山茶花粉活力的影响。结果表明:不同测定方法对杜鹃红山茶花粉活力测定结果影响较大,其中,离体萌发法是杜鹃红山茶花粉活力的最佳检测方法,30℃条件下花粉萌花最适培养基为2.5%琼脂+100g/L蔗糖+10mg/L硼酸,适宜统计的培养时间为4h,花粉萌发率达58.10%,Ca2+对花粉萌发起抑制作用;MTT染色得出92.5%的杜鹃红山茶花粉具有活力,明显高于离体萌发法,而TTC法由于染色不清晰,不适合用于杜鹃红山茶花粉活力检测。     

‘纽荷尔’脐橙与‘尤力克’柠檬种间体细胞杂种的代谢特征分析

利用GC–MS(气相色谱—质谱)测定柑橘种间体细胞杂种——‘纽荷尔’脐橙(Citrus sinensis Osbeck)+‘尤力克’柠檬[Citrus limon(L.)Burm. F.]和其两个融合亲本果实的初生代谢物含量,包括可溶性糖、有机酸、氨基酸和脂肪酸;利用LC–MS(液相色谱—质谱)测定果实类黄酮含量,综合评估体细胞杂种果实的代谢特征。结果表明,体细胞杂种初生代谢物组成总体偏向‘尤力克’柠檬,苹果酸、柠檬酸和脂肪酸含量均高于两亲本,大多数氨基酸含量介于两亲本之间。体细胞杂种中共检测到48种类黄酮,整体偏向柠檬亲本;其中有33种物质含量介于两亲本之间,15种高于或低于两亲本。     

草莓六倍体种间杂种及其回交研究

 从草莓品种与野生种杂交组合哈尼(8x) ×黑龙江1号(5x)中得到一株六倍体种间杂种HH一1(6x)，对其植物学性状、果实性状、减数分裂行为及花粉大小等进行了观察研究，并用此6x杂种与栽培品种哈尼和宝交早生进行回交得到了6x、7x、8x后代实生苗，对这些不同倍性杂种的来源进行分析     

柑桔同源及异源四倍体花粉育性研究

对８个柑桔同源四倍体及通过原生质体融合得到的２个异源四倍体的花粉育性和花粉粒大小进行了测定。结果显示，同源四倍体柑桔花粉育性平均为３６％，约为二倍体（６２％）的６０％。‘伏今夏’甜橙由于是异质结合的染色体易位突变体，其同源四倍体花粉育性比二倍体（２３％）高出５０％。权（Ｐｏｎｃｉｒｕｓｔｒｉｆｏｌｉａｔａ）与甜橙（Ｃｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓ）属间以及来檬（Ｃ．ａｕｒａｎｔｉｆｏｌｉａ）与甜橙种间四倍体体细胞杂种花粉育性介于其双亲之间，花粉育性分别为各自高值亲本的９９％和７５％。同源及异源四倍体花粉粒体积平均为二倍体的２倍或双亲之和。本结果说明，柑桔体细胞杂种可作为杂交亲本进一步被利用。     

益母草基于45S rDNA染色体定位的核型分析及减数分裂观察

 以番茄的45S rDNA为探针,采用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）技术与核型分析相结合的方法,对益母草（Leonurus japonicus Houtt）的核型和45S rDNA在染色体上的定位进行了研究,同时采用压片法观察了其花粉母细胞减数分裂中染色体的行为。结果表明,益母草绝大多数花粉母细胞减数分裂中染色体的行为正常,终变期形成10个二价体,佐证了益母草的染色体数目为2n = 20,且为二倍体,其减数分裂为同时型,花粉粒育性为97.10%。益母草体细胞有丝分裂中期染色体上具有2对45S rDNA杂交信号,分别位于第2号染色体短臂的末端和第3号染色体短臂近着丝粒处,益母草的核型公式为2n = 2x = 20 = 2m + 16sm（2SAT）+ 2st,染色体相对长度组成为2n = 2L + 8M2 + 10M1,最长染色体与最短染色体的比值为1.58,核型不对称系数为69.39,染色体相对长度变异范围为8.05% ~ 12.73%,其核型为“3A”型。基于上述结果绘制了益母草的核型模式图。     

辣椒属种间杂交及杂种鉴定研究

通过辣椒属5个栽培种(Capsicum annuum, C. chinense, C. f rutescens, C. baccatum 和C. pubescens) 种间正反杂交试验, 获得了3株C. baccatum ×C. chinense (H_bc ) 和7株C. annuum ×C. chinense(H_ac ) 种间杂种植株。除H_ac-7单株表型异常外, 其他杂种F1植株均生长正常。H_ac、H_bc花粉可染率分别为13.9%和23.8% , 显著低于其双亲。同一组合内单株间花粉育性、形态性状和同工酶电泳图谱表现一致,形态学观察和过氧化物同工酶电泳分析结果均验证了种间杂种的真实性。     

沙田柚在不同砧木上的早期表现

供试品种为沙田柚,砧木材料２８个,以酸柚砧作对照,研究了不同砧木上沙田柚树体生长发育,产量的早期表现。经过７年的观察分析,初步认为关云大叶枳,江津大叶枳,多花枳,朱砂柑、摩洛哥酸橙对沙田柚有早结,矮化作用。定植后第３年试花,第４年开始结果,结果最多的是关云大叶枳,株产达４个,树体高度比对照矮１１．８％￣２１．０％,产量比对照高２４０％￣６００％,其余砧木都比对照结果迟。     

桂晚柑花粉及其育性研究

采用扫描电镜、琼脂培养和柱头整体压片荧光法，对桂晚柑花粉形态、亲缘关系和育性进行了研究。结果表明，桂晚柑花粉体积小，表面具网状纹饰、网眼小、网脊宽，其亲缘关系与桔、橙较近，与柚次之。桂晚柑花粉可育，但４８小时后丧夫生活力。     

菊属植物远缘杂交亲和性研究

 开展了不同倍性菊属物种间远缘杂交试验,比较不同杂交组合的杂交亲和指数,并对授粉后生殖生物学过程（柱头花粉附着、花粉萌发、花粉管生长、受精及子房发育）进行荧光显微观察。结果表明,具相同倍性的种间及四倍体与六倍体物种间杂交较易结籽,而二倍体与四倍体或六倍体间难以结籽,表现杂交不亲和性。菊属远缘杂交不亲和表现为柱头上花粉粒粘附少,花粉萌发率低,花粉管生长异常难以进入花柱,诱导柱头胼胝质生成,受精胚败育。     

黔阳无核大红甜橙的选育

1980～1982年从湖南省黔阳县园艺示范场普通大红甜橙冻后回蔸树萌生徒长枝中选育出来的黔阳无核大红甜橙,果形美观。品质优良,无核(每果种子数0～0.3粒),汁胞较纤细,柔软多汁,维生索C含量较丰富;产量高而稳定;耐贮藏。截至1991年已推广1500多亩,已经湖南省农作物品种审定委员会认定为甜橙类新品种。据花粉发芽试验及花粉母细胞减数分裂观察,初步认为花粉败育是导致其无核的主要原因。     

药用栀子和二种观赏型栀子的细胞学研究

采用压片法对药用栀子、狭叶栀子及大花栀子的花粉母细胞减数分裂及核型进行了研究。结果表明:3种栀子的绝大多数花粉母细胞减数分裂过程中染色体的行为正常,仅在3种栀子少数花粉母细胞中观察到落后染色体和染色体桥等异常行为;药用栀子的花粉粒育性最高,约为99%,狭叶栀子的花粉粒育性较低,约为45.5%,而大花栀子的花粉粒育性最低,为39.5%;3种栀子的染色体数目均为2n=2X=22,其中药用栀子的核型公式为K(2n)=2X=22=2x=4m+7sm,其核型为"3B"型,狭叶栀子的核型公式为K(2n)=2x=22=6m+5sm、大花栀子的核型公式为K(2n)=2x=22=7m+4sm,后2种观赏型栀子的核型均为"2B"型。