蒜头果中植物内生真菌烟曲霉的抗菌活性研究

植物内生真菌是一类生活在植物体内的微生物,能够产生化学结构新颖、生物活性多样的次生代谢产物。本研究用纸片法检测从我国特有植物蒜头果中分离得到的植物内生真菌烟曲霉的抗菌活性,并采用单菌多产物(OSMAC)策略寻找植物内生真菌烟曲霉产生抗菌化合物的最佳条件。结果表明:该烟曲霉液体发酵提取物对供试的6种人体致病细菌均有抑菌活性(蜡样芽孢杆菌、副溶血性弧菌、无乳链球菌、福氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌),其中对副溶血性弧菌、藤黄微球菌最低抑制浓度达到6.25mg/mL。以马铃薯粉为氮源,麦芽糖或葡萄糖为碳源,提取物得率较大且抑菌活性最好,接种量为60mg/100mL时提取物收获量最高。此外,改变培养温度能提高提取物对除无乳链球菌及藤黄微球菌以外的4种致病菌的抗菌活性。与细菌共培养后对蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌的抗菌活性有所增强,但对副溶血性弧菌、无乳链球菌、福氏志贺氏菌的抗菌活性下降。本研究为植物内生真菌抗菌化合物的开发利用奠定基础。     

蒜头果根粗提取物的抑菌活性研究

为高效利用蒜头果资源,以蒜头果根的粗提取物对13种人体致病细菌进行抑菌活性实验。采用滤纸片法,对蒜头果根的乙醇及丙酮粗提取物进行抗菌活性检测,同时,对其抗菌化合物的热稳定性,光稳定性及在酸碱环境中的稳定性进行检测。结果表明:蒜头果丙酮粗提取物对蜡样芽孢杆菌、溶血性葡萄球菌和无乳链球菌具有抗菌活性(MIC值分别为:14.450mg/mL,7.225mg/mL,7.225mg/mL),丙酮粗提物通过不同温度(30℃、50℃、70℃、90℃、100℃)、不同pH值(3、5、7、9、11)和紫外光不同照射时间(30min、60min、90min、120min、150min)处理后,对蜡样芽孢杆菌和溶血性葡萄球菌依然有抑菌效果,而对无乳链球菌却没有抑菌活性。这说明蒜头果根含有多种抗菌化合物,且有不同的抗菌活性及稳定性。蒜头果根丙酮粗提取物在分段纯化后,只在50%乙醇洗脱部分具有抗菌活性。研究结果为蒜头果根的抗菌活性成分的开发利用提供科学依据。     

球孢白僵菌×蜡蚧轮枝孢菌(BV制剂)对松墨天牛幼虫寄生试验初报

用球孢白僵菌(Beauveriabassiana)、蜡蚧轮枝孢菌(Verticilliumlecanii)及2种菌混合物配制成0 5×109～5 0×109孢子/mL,在室内和野外对松墨天牛幼虫进行了防治试验。室内试验结果表明,球孢白僵菌和蜡蚧轮枝孢菌对松墨天牛幼虫均有较强的致病性,2种菌混合使用致病作用倍增。球孢白僵菌对松墨天牛的寄生率为5%～32%,平均20%;蜡蚧轮枝菌的寄生率为2 9%～25%,平均14 9%;2种菌混合物寄生率为12%～76%,平均47 9%。野外试验表明,球孢白僵菌防治效果为50 43%,蜡蚧轮枝孢菌防治效果为38 66%,2菌混合物防治效果为69 69%。     

4种绿僵菌乙酸乙酯初提物抗菌活性比较

绿僵菌属真菌是一种具有很强致病性的昆虫病原真菌,广泛地寄生于多种昆虫体内。以冬虫夏草、蛹虫草为代表的昆虫病原真菌具有良好的医药保健功能,绿僵菌能产生多种具有活性的代谢产物。本研究采用液体深层培养技术,对4种绿僵菌菌丝体进行液体培养,培养液经乙酸乙酯萃取后获得绿僵菌初提物。采用抑菌圈法评价4种绿僵菌乙酸乙酯初提物对13种致病菌的抗菌活性,并测定对相应致病菌的最低抑制浓度。结果表明,经液体培养后的4种绿僵菌乙酸乙酯初提物均具有一定的抗菌活性。4种绿僵菌提取物均对蜡样芽孢杆菌和缓慢芽孢杆菌具有抑制作用,其中贵州绿僵菌提取物对蜡样芽胞杆菌的最低抑菌浓度达到6.45mg/m L,对溶血性葡萄球菌的最低抑菌浓度为3.23mg/m L。棕色绿僵菌初提物均对蜡样芽孢杆菌、缓慢芽孢杆菌、溶血性葡萄球菌、副溶血性弧菌、藤黄微球菌产生抑制效果,对藤黄微球菌的最低抑菌浓度达到13.9mg/m L。本研究为虫草绿僵菌抗菌化合物的进一步研究及开发利用奠定基础。     

筛选球孢白僵菌菌株的试验

为防治松褐天牛筛选致病性强的白僵菌菌株，把来自不同寄主的１４株球孢白僵菌分离、纯化后，分别接种在ＰＤＡ和松褐天牛虫体培养基上进行生长速度，产孢能力测定，从中选出８株培养性状好的进行致病性试验。再选出致病力较强的菌株Ｂ１和Ｂ２生产高孢粉，用于做室内对松褐天牛致病力及防治方法的比较试验。结果显示，Ｂ１致病力优于Ｂ２，注射菌液法的防治效果优于撒菌粉法     

淡翅黎丽金龟生物防治试验

采用白僵菌Beauveria sp.、绿僵菌Metarrhizium sp.、粉拟青霉Paecilomycesfarinosus、苏云金杆菌Bacillus thuringiensis var.sandiego、芜菁夜蛾线虫Steinernemafeltiae对淡翅黎丽金龟Blitopertha pallidipennis Reitter进行致病力测定和苗圃防治试验。结果表明:卵孢白僵菌AB菌株和球孢白僵菌YB菌株室内致病率60％—83.3％,苗圃防治效果67.6％—86.6％;芜菁夜蛾线虫室内致病率98％,苗圃防治试验校正虫口减退率87.5％;绿僵菌室内致病率13.8％;苏云金杆菌室内致病率58.8％,苗圃防治效果3.4％;粉拟青霉不致病。     

寄生松墨天牛幼虫的白僵菌和轮枝菌三级培养研究

对球孢白僵菌和蜡蚧轮枝孢菌作了分离和三级培养试验。结果表明,球孢白僵菌和蜡蚧轮枝孢菌均有较好的培养性状。三级培养物中蜡蚧轮枝菌孢子含量可达1.46×1011个/g,白僵菌孢子数可达7.8×1010个/g。这二种虫生菌的分离培养成功,为松材线虫病的综合防治提供了方法。     

青杨天牛的致病真菌

1983年春,我们先后从青杨天牛(Sap-erda populnea L.)的越冬幼虫虫尸上分离出顶孢霉(Cephalosporium acremoniumCorda.)、球孢白僵菌(Beauveria bassiaha(Balsamo)Vuill.)、金龟子绿僵菌(Metarhi-zium anisopliae(Mefsch.)SoroKin)、串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme Sheld.)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Sch-elcht.)等5种致病真菌。有关这方面的研究,尚未见专门报道。本文仅将对5种致病真菌的形态、培养特性、生物学特性及致病力的研究结果报道如下。     

球孢白僵菌中与致病相关的NRPS基因的克隆与表达

以真菌球孢白僵菌为研究对象,以基因序列相似性为基础从球孢白僵菌基因组中挖掘获得Bbnrps1基因,再通过序列相似性和聚类分析等生物信息学方法推断该基因功能,并比较相同环境下不同的培养基配方对该基因表达水平差异等手段以寻找能够诱导该基因表达的最佳条件。结果表明,Bbnrps1基因的cDNA全长4 032bp,编码1 343个氨基酸;BbNRPS1是一种定位于细胞质基质,无信号肽具7个跨膜结构域的蛋白;BbNRPS1与羊毛状小孢子菌(Microsporum canis,XP_002842845)、Nannizzia gypsea(XP_003169294)、Xylona heveae(XP_018190776)聚为一支,可能负责参与ETP类毒素的生物合成。在以乳糖、葡萄糖、山梨醇和肌醇为碳源添加物的培养基上,Bbnrps1基因表达量较高,在以甘露糖和果糖为碳源添加物的培养基上表达量较低,在麦芽糖上不表达;在以牛肉浸粉(SGB)、胰蛋白胨(SGT)和马铃薯浸粉(SGP)为氮源添加物的培养基上表达量较高,在酪蛋白胨(SGC)上不表达。本研究有助于预测nrps基因功能,为异源表达球孢白僵菌中nrps基因奠定基础。     

不同病原菌对光肩星天牛致病力测定及应用技术研究

不同病原真菌对光肩星天牛Ａｎｏｐｌｏｐｈｏｒａ ｇｌａｂｒｉｐｅｎｎｉｓ（Ｍｏｔｓｃｈ）幼虫致病力的测定表明：粉拟青霉９１０１、球孢白僵菌Ｚ２８ 和卵孢白僵菌寄生率均为１００％ ,粉拟青霉Ｚ２６为８７．５％ 。各种菌对光肩星天牛的最适致死温度是：粉拟青霉Ｚ２６ １５℃～２０℃;粉拟青霉９１０１ １５℃～２５℃;球孢白僵菌Ｚ２８ ２０℃～３０℃。用自己分离所得的球孢白僵菌Ｚ２８,粉拟青霉Ｚ２６,以含孢量４ 亿孢子／ｍ ｌ＋ ０．０２％ 增效剂做林间塞孔防治试验,每种处理与对照相比差异极显著。球孢白僵菌Ｚ２８１～３ 次／年处理间无明显差异,防治效果达９３．４４％ ～９７．２５％ 。粉拟青霉Ｚ２６１～３ 次／年处理间无明显差异,防治效果在９２．９２％ ～９６．５５％ 。两种菌混合塞孔,以１～３次／年处理间无差异,防效达９３．６４％ ～９６．４８％ 。每株树所用菌剂成本为０．０２元。     

白僵菌优良菌株的自然筛选

球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Ball)]制剂是防治马尾松毛虫的主要药物之一,菌粉年产量达数万kg以上。为了选育毒力强、人工培养菌丝生长快、产孢量高、优良品质稳定的菌株,从建阳、连城、莆田等地收集白僵菌虫体进行组织分离、单孢纯化、比较室内毒力以及在人工培养基上的性状,得到三个优良的白僵菌菌株,进行生产性试验,效果显著。     

环境条件及常见农药对球孢白僵菌生长的影响

研究了不同温度、紫外线及田间常用的2种杀虫剂和3种杀菌剂对球孢白僵菌菌丝生长的影响,结果表明:在15~25℃温度范围内,球孢白僵菌的菌落直径随着温度的升高而增大,在25℃条件下达到最大,即23.2~32.0 mm。经紫外线处理,得到菌株BbI01抗紫外线能力最强,处理与对照菌落直径无差别;杀菌剂对球孢白僵菌的菌丝生长完全抑制,而杀虫剂的抑制作用较弱,其中敌百虫对球孢白僵菌菌丝生长反而有促进作用,说明杀虫剂与球孢白僵菌相容性较好。     

几种桉叶提取物的抗菌活性研究

研究了大叶桉、柠檬桉、尤曼桉(A、B)叶乙醇提取物和大叶桉、尤曼桉B叶提取物浓缩浸膏的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取组分对金黄葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、黄瓜枯萎病菌的抗菌活性和以及这几种桉叶提取物的最低抑菌浓度。结果表明4种桉叶提取物对4种供试菌均有抑制作用,对金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌抑制作用强,对黄瓜枯萎病菌作用弱。大叶桉、尤曼桉B提取物的抗菌活性强,这两种桉叶的乙酸乙酯和正丁醇萃取组分对4种供试菌抑菌作用最明显。     

不同球孢白僵菌菌株对星天牛幼虫的致病力

为筛选出可用于星天牛生物防治的高致病力菌株,测定了8株球孢白僵菌菌株(Bb Ma A-01、Bb MQ-04、Bb MQ-07、Bb QZ-01、Bb QZ-02、Bb YXTR-03、Bb TK-02、Bb XJ-11)的生长速度和产孢量及其对星天牛幼虫的致病力。结果表明:不同球孢白僵菌菌株的生长速度、产孢量和对星天牛幼虫致病力差异十分显著。采用浸渍法接种15 d后,不同球孢白僵菌菌株对星天牛幼虫累计致死率(幼虫死亡率)在70%~100%之间,其中Bb XJ-11、Bb QZ-02菌株对幼虫的累计死亡率最高,均达100%;且接种后星天牛幼虫的僵虫率(感染率)也分别高达90%、80%;致死中时(LT50)较短,分别为5.38 d、5.83d。研究结果表明Bb XJ-11、Bb QZ-02菌株对星天牛幼虫的致病力较强,同时2个菌株的生长速度快、产孢量高,故可作为防治星天牛的优良菌株加以推广应用。     

球孢白僵菌及酶增效剂对松墨天牛幼虫的毒力测定

为了有效阻止松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）病的传播，本文通过对比不同浓度的球孢白僵菌（Beauveria bassiana）孢子悬浮液对松墨天牛（Monochamus alternatus）4龄幼虫的毒力筛选出最佳浓度，在此基础上将球孢白僵菌蛋白酶、几丁质酶、脂肪酶作为增效剂测试其对球孢白僵菌毒力的增效作用，通过对松墨天牛幼虫致死率的比较，筛选出最佳增效酶。结果表明：1×108cfu/ml的孢子悬浮液对松墨天牛4龄幼虫的毒力最高，蛋白酶液为球孢白僵菌毒力的最佳增效剂。本研究证明了在球孢白僵菌制剂中加入酶增效剂可提高杀虫效果，为防治蛀干害虫提供理论依据。     

不同营养成分对桉蝙蛾高毒力球孢白僵菌生长的影响

研究了不同氮碳源及微量元素对2株桉蝙蛾高毒力球孢白僵菌生长的影响,结果表明,水解乳蛋白及蛋白胨均有显著促进白僵菌生长的作用,无机氮源均有不同程度抑制白僵菌生长的作用,其中(NH4)2SO4的抑制作用最强;不同碳源对菌株B-36生长促进作用不明显,葡萄糖具有显著促进菌株B-46生长的作用,甘露、葡萄糖、乳糖均能促进2个菌株产孢,蔗糖、阿拉伯树胶能明显促进B-36产孢,却对B-46产孢具有抑制作用;微量元素Al显著促进2个菌株的生长,而微量元素B具有促进两个菌株产孢的作用。     

双条杉天牛幼虫病原真菌——球孢白僵菌的分离鉴定与利用

2002-2006年在对呼和浩特地区杜松死亡原因调查的过程中,从死亡的树干内发现了罹病致死的双条杉天牛幼虫。通过对虫体内病原真菌的分离与鉴定,确定为球孢白僵菌。经管氏肿腿蜂带菌接种与人工接种方法的室内致病力测定,在22~25℃条件下饲养30 d,双条杉天牛幼虫感病致死率分别为100%、58.22%,证明球孢白僵菌是双条杉天牛的病原菌。同时,利用管氏肿腿蜂带菌接种,菌剂使用浓度低,虫菌结合能显著提高双条杉天牛幼虫的感病致死率。     

2种木材蓝变菌的生物学特性

对2种木材蓝变菌松球壳孢(Sphaetopsis sapinea)和可可球二孢(Botryodiplodia theobromae)的生物学特性进行试验研究。结果表明:2种蓝变菌菌株适宜温度均为30℃;适应的酸碱度范围均为5.0~9.0;两者都属于喜光菌;松球壳孢生长最适碳源为蔗糖,最适氮源为蛋白胨;可可球二孢生长最适碳源为葡萄糖,最适氮源为酵母浸膏。     

绿色木霉代谢产物抗菌活性研究

对绿色木霉产生的代谢产物进行了抑菌活性的初步研究,生测结果表明：离体条件下发酵液对尖孢镰刀菌、棒盘孢、茄链格孢、出芽短梗霉、灰葡萄孢均有较强的抑制作用,其对以上不同病原菌的抑制率分别为76．6％、86．5％、94．8％、91．4％、86．3％,抑菌活性成分在80℃以下较为稳定,pH值在6-7之间抑菌效果最好。     

感染油桐鹰尺蠖幼虫的优良白僵菌菌株筛选

油桐鹰尺蠖是危害速生桉树的重要食叶害虫之一,在我国南方大面积发生。为筛选出对该虫高效的生物防治资源,采用室内测定的方法测定6个不同来源的球孢白僵菌菌株(BbAX-07、BbFZ-51、BbFZ-58、BbMQ-08、BbMQ-02、BbQZ-05)生物学特性及其对油桐鹰尺蠖幼虫的致病力。结果表明:不同白僵菌菌株的菌落生长速度和产孢量间存在显著差异,菌落大小与产孢量呈正相关。BbFZ-58、BbAX-07菌株菌落直径和产孢量较其它菌株高,SDAY培养基上生长15d的菌落直径分别为6. 0、6. 3 cm,产孢量为1. 41×10~8、1. 35×10~8孢子·cm~(-2);接种这2个菌株15 d后,油桐鹰尺蠖幼虫校正死亡率分别达到96. 4%、90. 9%,僵虫率分别为73. 3%、71. 7%,致死中时(LT_(50))分别为4. 45、4. 72 d,均比其他菌株高。说明球孢白僵菌BbFZ-58、BbAX-07菌株对油桐鹰尺蠖的致病力强,可作为优良菌株进一步开发应用。