脱氟磷酸三钙在畜禽饲料生产上的应用

饲用磷酸盐是畜禽饲料中磷的重要来源,从补磷的角度出发,饲料磷酸盐的品种有20余种之多,有钙盐、钾盐、按盐等,但目前主要使用的品种是钙盐,即磷酸氢钙和磷酸三钙。这几年来磷酸氢钙在国内取得了一定的发展,而磷酸三钙在我国尚未实现工业化9产。然而在国外情况大不?..     

家蚕组织中钙的亚细胞定位研究

应用锑酸盐沉淀技术研究家蚕中肠和马氏管的亚细胞钙离子分布，其螯合试验和电镜观察证明，用本试验方法产生的锑酸盐沉淀是锑酸钙，沉淀分布有规则，超微结构保存良好，是研究蚕体组织亚细胞钙离子分布较为有效的方法。作者应用这一技术观察了家蚕５龄幼虫中肠及马氏管组织的钙离子亚细胞分布，并发现氟中毒后马氏管组织的钙离子亚细胞分布有显著的变化，认为这一技术可为家蚕氟毒理研究提供一种新方法。     

细胞钙信息转导与疾病发生发展的关系

在动物中提出环磷酸腺苷(cAMP)第二信使概念后,人们在研究中确认了另一种胞内信使--钙离子(Ca2 ),二者共同作用,调节机体的各种生命活动。本文从细胞信息转导途径入手,阐述了细胞信息转导过程中的各种调控因子及相关途径,并对一些疾病的发生发展和Ca2 信息转导的关系做出进一步的论述。     

浅谈饲料级脱氟磷酸三钙的生产工艺研究

本文介绍了饲料级脱氟磷酸三钙生产原理、生产原料的特点,及国内外饲料级脱氟磷酸三钙的生产工艺.     

MDCK细胞连续传代培养的生长特性研究

目的:确定引进的MDCK细胞冻存保种效果。方法:复苏从ATCC引进保种冻存的MDCK细胞(P55),连续传代至P66,分别在P57、P59、P62和P66测定细胞生长曲线,计算细胞最大增殖浓度和倍增时间进行比较。结果:保种的细胞复苏活力达95.3%,最大增殖浓度分别为107.6×104、105.5×104、97×104和102.4×104(个/ml),倍增时间分别为15.8、15、15.2和15.3(h),结论:引进的MDCK细胞保种冻存后复苏活力高,能稳定连续传代培养,可用于相关研究。     

细胞钙信息转导与疾病发生发展的关系

在动物中提出环磷酸腺苷(CAMP)第二信使概念后，人们在研究中确认了另一种胞内信使—钙离子(Ca^2 )，二者共同作用，调节机体的各种生命活动。本文从细胞信息转导途径入手，阐述了细胞信息转导过程中的各种调控因子及相关途径，并对一些疾病的发生发展和Ca^2 信息转导的关系做出进一步的论述。     

云南磷矿制取饲料级脱氟磷酸三钙的研究

以云南低重金属磷矿为原料,按磷矿-磷酸-脱氟剂(AMP)工艺配方制备饲料级脱氟磷酸三钙进行了试验,取得了最佳工艺控制条件。进行了该工艺的适应性试验,证明适宜四川、湖北、贵州的磷矿矿种,所得产品进行了化学分析和X-衍射分析,并与韩国产品进行了对比,达到国外同类产品质量要求。     

基于流感疫苗生产用MDCK细胞的安全性评价

随着流感疫苗产业升级,传统的鸡胚基质疫苗已经满足不了大众需求,世界卫生组织建议使用细胞来代替鸡胚生产流感疫苗,MDCK细胞被认为是最适合于流感疫苗生产的细胞系之一,但由于MDCK细胞会使免疫缺陷型小鼠形成肿瘤,因此其安全性存在争议。本文阐述了MDCK细胞的安全性问题及生产中的应对策略,旨在为细胞基质流感疫苗的生产提供理论基础。     

细胞外信号调节激酶信号途径及其与动物肌肉生长发育的关系

细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）是信号转导的重要分子,也是丝裂原活化蛋白激酶家族中的重要成员。ＥＲＫ信号途径是多数生长因子、细胞因子调控细胞增殖的重要途径,参与细胞分化,调控细胞的周期循环。本文总结了 ＥＲＫ信号途径的特点及其在细胞凋亡中的作用,并结合屠宰后肌肉变化的信号级联反应特点,阐述了 ＥＲＫ信号途径与动物肌肉生长发育和屠宰后肌肉变化的关系。     

MDCK细胞同时复制犬瘟热病毒与犬传染性肝炎病毒的研究

犬瘟热和犬传染性肝炎病毒共同在一株细胞内培养、复制的可行性,通过本实验及电镜的观察已得到充分的证实。电镜下证明犬瘟热病毒在细胞浆内复制,并自细胞膜上出芽式成熟释放出病毒粒子。而犬传染性肝炎病毒则呈结晶状在细胞核内复制。二种病毒在同一株细胞培养液中已分别测得了毒价,犬瘟热病毒为5.0TCID_(50)/0.1毫升,犬传染性肝炎病毒为4.7TCID_(50)/0.1毫升。本试验在国内首次获得了二种病毒共在一个细胞内复制的电镜照片,证实了犬瘟热和犬传染性肝炎病毒共同在一株MDCK细胞内复制不产生任何干扰。本项研究为犬用多种联苗的研制找到了新的、简便的方法。     

Annexin A2基因敲除MDCK细胞系的构建

应用Crispr/Cas9基因编辑技术敲除MDCK细胞中的Annexin A2基因,并验证其是否为ε毒素在MDCK细胞表面的受体。根据Crispr/Cas9靶点设计原则设计靶点,构建PALentiCRISPR v2重组质粒。借助Crispr/Cas9技术,将构建好的质粒转染至MDCK细胞中,用嘌呤霉素筛选敲除Annexin A2蛋白的MDCK细胞株,并通过测序和Western blot验证敲除效果。通过细胞毒性试验验证MDCK细胞膜表面的Annexin A2蛋白是否为ε毒素的受体蛋白。测序结果和Western blot结果表明,通过Crispr/Cas9技术成功敲除了MDCK细胞的Annexin A2基因,但细胞毒性试验结果表明,敲除Annexin A2基因并不能减弱ε毒素对MDCK细胞的毒性。结果表明,Annexin A2蛋白不是ε毒素在MDCK细胞表面的受体,研究结果为今后MDCK细胞其他蛋白的敲除提供了试验方法,构建的Annexin A2基因敲除的MDCK细胞也为Annexin A2蛋白引起的其他疾病的研究奠定了基础。     

Polymyxin B enhances acrosomal exocytosis triggered by calcium and the calcium ionophore A23187 in ejaculated boar spermatozoa

Polymyxin B (PMB) is beneficial for boar semen storage since it neutralizes the endotoxin of bacteria. However, the direct effect of PMB on boar spermatozoa has been unknown. This study aimed to examine the effect of PMB on acrosomal exocytosis, an essential process for successful fertilization in boar spermatozoa. Ejaculated spermatozoa stored with BTS extender at 17°C were washed and incubated with 0–100 μM PMB for 20 min and then examined for % total motililty, vigor grade and viability. None of the parameters was significantly different between 0 and 50 μM PMB with a gradual decline at higher concentrations. Thus the effect on acrosomal exocytosis was investigated at 0–50 μM of PMB. Spermatozoa were preincubated with PMB for 10 min, incubated for stimulation of acrosomal exocytosis with Ca²⁺ and the calcium ionophore A23187 and then fixed with glutaraldehyde at 5, 10 and 15 min. Preincubation with PMB at 0.01–50 μM and 0.05–50 μM resulted in significant enhancement of acrosomal exocytosis at 10 min and 15 min of incubation, respectively. Preincubation with PMB followed by incubation without A23187 did not affect acrosomal exocytosis. These results suggest that PMB exerts effects on the acrosomal exocytosis triggered by Ca²⁺ and A23187 in boar spermatozoa.     

基于MDCK悬浮细胞生产禽流感疫苗的放大工艺开发

以成功放大流感疫苗生产工艺至1500 L规模为目标,通过冷模实验研究了不同体积反应器条件下的混合时间,流体剪切力,体积氧传递系数和二氧化碳传递系数的区别。在1500 L反应器中进行培养时,转速为60 r/min,深层通气速率控制在22.5 L/min能够较好的满足供氧需求和提高CO2的移除效果,同时也降低了剪切力对细胞的损伤。病毒感染细胞60 h后,病毒滴度为211 HA units/25 μL,单位细胞病毒产量（Svy）为13145.05 virions/cell,2 L反应器的Svy为13298.70 virions/cell,两者仅相差1.16%。     

MDCK细胞悬浮驯化及对H9亚型禽流感病毒敏感性的研究

为获得对H9亚型禽流感病毒敏感的纯悬浮MDCK细胞株,通过逐渐降低血清的方法对贴壁依赖的MDCK细胞进行了无血清纯悬浮驯化,最终获得了一株对H9亚型禽流感病毒敏感的纯悬浮细胞株MDCK-sus。通过测定表明,该细胞株能够迅速增殖,倍增时间为24h,使用H9亚型禽流感病毒BX13株感染该细胞,培养72h,培养液的病毒HA价可达到1∶512,每0.1mL病毒含量达到108.5EID50,为利用生物反应器大规模悬浮培养制备H9亚型禽流感病毒抗原奠定了基础。     

H9亚型禽流感病毒感染引起MDCK细胞内抗氧化功能的变化

将传代MDCK细胞以8×10⁴/cm²的密度接种于6孔细胞培养板,H9亚型禽流感病毒以不同剂量0(对照组)、10^-3(高剂量组)、10^-4(中剂量组)、10^-5×EID₅₀(低剂量组)分别接种,检测H9亚型禽流感病毒对MDCK细胞内抗氧化功能的影响。结果表明,与对照组相比,高剂量H9亚型禽流感病毒接种MDCK细胞使细胞内过氧化氢(H₂O₂)和羟基自由基(·OH)含量均显著增加(P>0.05),细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力均显著下降(P>0.05),细胞内的丙二醛(MDA)含量显著增加(P>0.05)。说明H9亚型禽流感病毒可显著提高MDCK细胞内活性氧自由基(ROS)含量,并降低抗氧化酶活力,阻碍ROS在细胞内的清除机制,引起细胞脂质过氧化作用,从而损伤细胞。     

悬浮MDCK细胞源与鸡胚源H9亚型禽流感疫苗免疫效力比较研究

为探讨MDCK纯悬浮细胞制备的H9亚型禽流感灭活疫苗的免疫效果,使用10日龄SPF鸡胚和MDCK纯悬浮细胞分别接种H9亚型禽流感 BX13株病毒,收获抗原液,制备2种单价油佐剂灭活疫苗,按照不同免疫剂量对21日龄SPF鸡进行免疫接种,测定免疫后不同时间的血清HI抗体,免疫后21 d翅静脉攻毒,测定疫苗的保护率。结果表明：2种疫苗分别以0.3、0.2、0.1、0.02 mL/只的剂量接种21日龄SPF鸡后,7 d HI抗体均为0log2,免后14 d、21 d时2种疫苗相同免疫剂量组间HI抗体无明显规律性差异。免疫后21 d,2种疫苗0.1mL/只～0.3mL/只的免疫剂量,各组间HI抗体水平无明显差异,可以达到1∶128以上。攻毒试验表明,鸡胚源疫苗0.1 mL/只、MDCK细胞源疫苗0.2mL/只的免疫剂量可以达到10/10保护。本研究为使用MDCK纯悬浮细胞制备的H9亚型禽流感疫苗的深化研究和应用奠定了基础。     

咖啡因和肝素、钙离子载体对家畜冷冻精子体外获能的协同作用

本文报道了用咖啡因与肝素、钙离子载体(I-A)协同处理诱导马、驴、猪冷冻精子体外获能的研究结果.咖啡因与肝素、I-A均有协同作用.在肝素或I-A处理中添加咖啡因,不仅能提高穿透率,而且能促进卵内雄原核的形成和发育.精子先经洗涤,再用咖啡因与肝素或I-A协同处理,可得到良好的获能效果.     

共表达siat7e和st3galⅠ基因MDCK细胞株的建立

为建立易悬浮驯化和对流感病毒易感的MDCK细胞株,将表达siat7e和st3galⅠ基因的真核表达载体电击转染MDCK细胞,采用有限稀释法、荧光定量PCR和流式细胞术成功筛选到1株双基因共表达MDCK-C5细胞株,且传至12代后仍表达稳定,为流感疫苗工业化大规模生产奠定了基础。     

重组禽流感病毒H5亚型Re-7株在MDCK细胞上增殖条件的研究

为了探索重组禽流感病毒H5亚型Re-7株在MDCK细胞上的增值规律,确定最适的接毒量与最佳收获时间。将重组禽流感病毒H5亚型Re-7株接种至100 L生物反应器全悬浮无血清培养的MDCK细胞进行增殖试验,检测不同病毒感染量,接种后不同时间病毒的HA、TCID50以及EID50。根据确定的最佳增值条件将病毒接种到MDCK细胞中进行大规模增殖培养。确定最适接毒量MOI为10~(-2),最佳收获时间为60 h。在100 L生物反应器中进行重复验证,获得稳定的试验结果,病毒HA达到1∶1024,每1 m L病毒含量达到107.33TCID50,每0.1 m L病毒含量达到106.83EID50。研究为重组禽流感病毒H5亚型Re-7株的全悬浮规模化生产提供了相对稳定的参数指标。