中药复配物对猕猴桃溃疡病菌抑菌机理研究

【目的】研究由黄芩、石菖蒲和丁香等中药组成的提取复配物对猕猴桃溃疡病菌的抑菌机理。【方法】通过牛津杯法测定中药复配物对猕猴桃溃疡病菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度,并对菌体的生长曲线、细胞壁和细胞膜完整性、胞内DNA含量变化测定,结合细菌电镜透射图,综合分析中药复配物对猕猴桃溃疡病菌的作用机理。【结果】测定得到其最低抑菌浓度为3.125 mg/mL;最低杀菌浓度为12.5 mg/mL。中药复配物可破坏猕猴桃溃疡病菌的细胞壁和细胞膜,使胞内物质溢出,DNA含量降低,还可破坏菌体形态结构,使菌体扭曲变形,生命活性降低。【结论】中药复配物对猕猴桃溃疡病菌有较强的抑制效果,其抑菌机理为影响菌体细胞形态、细胞壁、细胞膜和遗传物质等。     

黄芩抑菌物的提取工艺及抑菌稳定性

以黄芩提取物对葡萄座腔菌抑菌圈直径为衡量指标,筛选黄芩的提取工艺条件,对活性物质抑菌稳定性进行研究。结果表明,以80%乙醇作为提取溶剂时,黄芩提取物具有较强抑菌效果,在料液比1∶27.5、超声提取2.5 h、提取温度72.5℃、超声功率850 W条件下,抑菌圈直径达到31.8 mm,相比以丙酮作为提取溶剂,料液比1∶20、在40℃、700 W超声波提取2.0 h条件下的抑菌能力提高了28.69%。紫外光照射10 h以上、偏碱性环境、Ag~+、Fe~(3+)、Cu~(2+)金属离子对提取物活性均产生抑制作用,其中pH值为12时的抑菌圈直径比pH值为5时降低了44.10%;低于25℃储存40 d左右,对提取物活性的影响较小。     

多羟基双萘醛提取物对猕猴桃溃疡病菌的抑制作用

【目的】探讨多羟基双萘醛提取物(WCT)对猕猴桃溃疡病菌(Pseudomonassyingae pv.actinidiae)的抑制作用。【方法】采用平板抑菌圈法和猕猴桃苗盆栽接菌的方法,测定WCT对猕猴桃溃疡病菌生长的抑制作用,并在7年树龄的猕猴桃树上进行田间药效试验,分析WCT对猕猴桃苗各处理的多酚氧化酶(PPO)与过氧化氢酶(POD)活性及病程相关蛋白的诱导情况。【结果】WCT对猕猴桃溃疡病菌的抑制中浓度(EC50)为11.5 mg/mL;猕猴桃苗接种WCT和病原菌后,其PPO和POD活性均保持在较高的水平,其中WCT预防处理的PPO和POD活性均较其他处理高;SDS-PAGE电泳分析结果显示,WCT处理和接种猕猴桃溃疡病原菌均可诱导产生分子质量为35 ku的蛋白。【结论】WCT对猕猴桃溃疡病菌的生长有显著的抑制作用,通过在猕猴桃树上涂药可诱导寄主产生抗病性,进而减轻病害的发生。     

猕猴桃溃疡病病菌新筛选方法与菌种鉴定

【目的】研究高效筛选猕猴桃溃疡病致病菌的新方法对湘西地区感染溃疡病的猕猴桃植株进行快速病菌分离与鉴定。【方法】以一年生猕猴桃枝条对不同糖浓度和氮浓度基质耐受情况为依据和柯赫氏法则来验证高效筛选病原菌方案的可行性与提取经筛选得到猕猴桃溃疡病病菌的DNA并扩增16Sr DNA进行系统发育树分析。【结果】本实验得到一高碳氮比(C∶N=10∶1)的筛选培养基,其对猕猴桃溃疡病致病菌筛选效率优于目前已报道的筛选基质;经筛选获得溃疡病致病菌为丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种,与目前已报道的丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种亲缘关系较远,有区别于以往的文献报道。【结论】以高碳氮比(C/N)的菌种选择压力用于丁香假单胞杆菌猕猴桃致病菌的筛选是高效的。丁香假单胞杆菌猕猴桃致病菌可能出现新的变异。     

3种植物提取物对樱桃番茄青枯病病原菌的抑菌活性

青枯病病原菌已成为樱桃番茄优质、高产的重要障碍。比较大蒜、银杏、海金沙3种植物提取液对青枯病病原菌的抑制作用。结果表明,随着3种提取物浓度的增加,抑菌效果逐渐增强。3种提取物的抑菌效果极显著高于农药对照的最低浓度分别为大蒜提取物20%、银杏提取40%、海金沙提取60%,且20%大蒜提取物对青枯病菌B2.1.2.2、青枯病菌I1.2.1.1、青枯病菌K5.1.1.1、青枯病菌L5.3.1.2的抑菌圈直径分别为:9.23、8.30、8.12、9.19 mm。当浓度为100%时,3种提取物的抑菌效果均最好,但大蒜提取物对供试菌株的抑菌效果最强。因此,大蒜可作为樱桃番茄植物保护剂的主要开发原料。     

竹屑制备天然防腐剂的工艺优化及抑菌性能研究

【目的】为研究竹屑制备天然防腐剂的最优工艺并探讨其抑菌性能。【方法】以竹屑为原料,采用乙酸乙酯回流法,在单因素试验基础上,应用响应面法优化天然防腐剂制备条件,并考察其抑菌活性。【结果】竹屑制备天然防腐剂的最佳工艺条件为超声功率300 W、提取温度89℃、液料比20∶1、提取时间2 h。在此条件下,所得提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和黑曲霉的抑菌效果达到最强,抑菌圈直径分别为:9.33、15.67、10.00、6.67 mm,最低抑菌浓度分别为:0.025 00、0.012 50、0.050 00和0.100 00 g·mL-1,竹屑天然防腐剂得率为4.77%。【结论】响应面法优化工艺制备的天然防腐剂对4种供试菌抑菌效果良好,制备工艺可行性高。该工艺可为竹废弃物的加工再利用提供参考。     

10种中药材和大蒜提取液对菊果胶杆菌的抑菌效果

菊果胶杆菌是魔芋软腐病的主要致病菌之一。用10种中药材和大蒜提取液对菊果胶杆菌的抑菌效果进行研究,结果表明,黄连、大蒜、黄芩、乌梅和柴胡提取液抑菌效果与对照差异极显著,其中黄连和大蒜对菊果胶杆菌抑菌效果最优,平均抑菌圈直径分别为2.27、2.19 cm,黄芩次之,平均抑菌圈直径为1.68 cm。选取抑菌效果较好的黄连、黄芩和大蒜提取液用二倍稀释法稀释后,进行抑菌效果测定,结果表明,黄连2倍稀释液与黄芩2倍、4倍稀释液均具有明显的抑菌效果,而大蒜提取液稀释后抑菌效果不明显。     

几种香辛料的体外抑菌研究

摘 要【目的】 考察不同香辛料（乌梅、石榴皮、鼠尾草、公丁香）提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、腐败希瓦氏菌、铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、枯草芽孢杆菌的体外抗菌活性影响并探讨香辛料可能存在的协同增效效应。【方法】采用牛津杯平板扩散法,以最小抑菌圈直径确定不同香辛料提取液的最低抑菌浓度（MIC）,同时采用棋盘法测定乌梅、石榴皮的联合抑菌效果。 【结果】 4种香辛料（乌梅、石榴皮、鼠尾草、公丁香）提取物对金黄色葡萄球菌的MIC为15.62、15.62、125、31.25mg/mL;对腐败希瓦氏菌的MIC为7.81、3.905、250、62.5mg/ml;乌梅与石榴皮复配对大肠杆菌的FIC为1.25;对金黄色葡萄球菌的FIC为2.5;对荧光假单胞菌的FIC为0.25;对腐败希瓦氏菌的FIC为0.75;对枯草芽孢杆菌的FIC为2.5;对铜绿假单胞菌的FIC为1。【结论】乌梅与石榴皮单独使用时表现出较鼠尾草和公丁香更好的抑菌效果;腐败菌对香辛料更为敏感;乌梅与石榴皮复配后对荧光假单胞菌有协同增效作用;对腐败希瓦氏菌及铜绿假单胞菌有相加效应。     

7种可食藻提取物对食品致病菌的抑菌效果

为探讨可食藻作为天然食品抑菌剂的可能性,用冻融法和回流法提取7种可食藻(地木耳、海白菜、海带、螺旋藻、裙带菜、小球藻及坛紫菜)的活性成分,将其水提物和醇提物应用于食品致病菌金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠杆菌、沙门氏菌、白色念珠菌及黄曲霉,测定了抑菌圈直径和最小抑菌浓度值(MIC)。结果表明,除坛紫菜外,其他藻类提取物对供试菌种均有一定的抑制作用(P0.05),其中,螺旋藻和海带提取物的抑菌作用较强,抑菌谱较广,特别是螺旋藻,浓度为1 mg/m L水提物对黄曲霉的抑菌圈直径可达19.58 mm,MIC值为25 mg/m L,而1 mg/m L螺旋藻醇提物对沙门氏菌的抑菌圈直径可达21.03 mm,MIC值为12.5 mg/m L。可见这些天然藻类具有作为新型食品抑菌剂的潜力。     

20种植物提取物对芒果炭疽病菌的抑制作用研究

[目的]筛选对芒果炭疽病菌具有抑制作用的植物资源,为开发植物源杀菌剂提供理论依据。[方法]以20种植物为材料,用80%无水乙醇提取其中的生物活性物质,测定不同植物提取物对芒果炭疽病菌的抑菌活性。[结果]20种植物提取物对芒果炭疽病菌菌丝生长均有一定的抑制作用,提取物随着浓度的降低,抑菌作用逐渐下降。在供试质量浓度为100mg/ml时,丁香、藿香、肉桂、石菖蒲、五味子、黄连、大黄和虎杖8种提取物对芒果炭疽病菌的抑制效果最好（抑制率100.0%）,其次是高良姜、黄柏、黄芩、益智和阳春砂,抑制率均达到了80.0%以上;在浓度为25mg/ml时,丁香、藿香和肉桂提取物对芒果炭疽病菌的抑制作用最好（抑制率100.0%）,其次是石菖蒲,抑制率为81.0%;对采后芒果进行接种炭疽菌试验结果表明,丁香和藿香提取物处理显著抑制了芒果果实病斑直径的扩展。[结论]丁香和藿香提取物对芒果炭疽病菌的抑菌活性最强。     

大蒜抑菌成分提取方法及抑菌活性的研究

以番茄早疫病菌{Alternaria solani(Ellis et Mmartin)}为供试菌,以抑菌圈法检测抑菌活性,系统地研究了大蒜(Allium sativum L.)抑菌有效成分的提取方法,发现鲜蒜在室温粉碎后,放入28℃培养箱中酶解30～60 min,然后加入乙酸乙酯试剂在28℃振荡提取12 h获得的提取物抑菌活性最佳;通过大蒜提取物抑菌活性与TLC和HPLC检测结果比较,证实大蒜提取物中的抑菌活性成分是大蒜在粉碎过程中产生的,主要为大蒜酶酶解蒜氨酸产生的大蒜素和大蒜素进一步分解产生的其他含硫化合物,其成分多达18种以上,且易挥发成分抑菌活性最好。     

超声波辅助提取大黄抑菌物质的工艺研究

[目的]为进一步开发利用大黄资源提供理论依据。[方法]以抑菌圈直径作为评价指标,通过对乙醇浓度、回流温度、超声波时间、液料比4个单因素分析和正交试验优化出最佳工艺条件。[结果]最佳工艺条件为:乙醇浓度70%、回流温度60℃、超声波处理时间35 min、液料比20∶1。在此条件下所得提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的抑菌圈直径分别为20.0、18.9和18.1 mm。[结论]超声波辅助法提取明显优于常规回流法。     

新疆野核桃叶提取物抑菌试验研究

试验选用新疆野核桃叶为研究对象,以金黄色葡萄球菌为指示菌,用抑菌圈直径为指标,在单因素试验的基础上通过正交实验对核桃叶的提取条件进行优化。结果表明:对核桃叶抑菌活性物质提取效果的影响为乙醇浓度液固比提取温度提取时间;最佳提取条件:乙醇浓度70%,液固比15∶1,提取温度60℃,提取时间4h。在此优化条件下,核桃叶提取物抑菌圈直径为1.932cm。     

初始pH对嗜线虫致病杆菌YL001菌株抑菌活性及代谢的影响

【目的】研究初始培养pH对Xenorhabdus neamatophila YL001发酵液抑菌活性的影响,为进一步提高YL001的抑菌活性提供理论依据。【方法】采用生长速率法、琼脂扩散法、活体组织法,分别测定了初始pH 4.5,5.5,6.5,7.0,7.5和8.5培养条件下,X.neamatophila YL001发酵液及其乙酸乙酯提取物的抑菌活性;同时采用HPLC、LC-MS分析了乙酸乙酯提取物中代谢物的差异。【结果】随着初始pH的升高,共生菌发酵液及其乙酸乙酯提取物的抑菌活性也逐步提高。pH8.5时,YL001发酵液对水稻瘟疫病菌(Magnaporthe grisea)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、苹果轮纹病菌(Physalospora piricola)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甘蓝黑斑病菌(Alternaria brassicae)以及枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)均具有最强的抑制作用,发酵液乙酸乙酯提取物对番茄灰霉病的EC50为1.29mg/mL,对枯草芽孢杆菌的抑菌圈直径为14.65mm。随着初始培养pH的升高,YL001发酵液及乙酸乙酯提取物对番茄灰霉病的治疗和保护作用也逐渐提高,保护作用明显优于治疗作用。HPLC和LC-MS代谢分析表明,pH8.5、pH 7.0及pH 4.5培养条件下发酵液乙酸乙酯提取物中代谢物含量存在显著差异。【结论】初始培养pH可以显著影响X.neamatophila YL001的抑菌活性及代谢能力,碱性条件更有利于活性物质的产生及其稳定性的保持。     

黄柏枝皮抑菌活性成分提取工艺及其稳定性研究

为了进一步开发用于防治番茄枯萎病的植物源杀菌剂,本试验以传统中草药黄柏为原料,筛选最佳提取方法,以抑菌圈直径为考核指标,采用单因素和正交试验优化黄柏抑菌物质的提取工艺条件,并对其抑菌稳定性进行研究。结果表明,采用超声波辅助醇提取法制备的提取物对番茄枯萎病菌的抑菌活性最强,抑菌率高达80.19%;优化超声波辅助醇提取法的最佳工艺参数为乙醇浓度70%、液固比6:1、提取时间30 min、提取温度45℃,在此条件下黄柏提取物抑菌效果最强,经验证抑菌圈直径平均值为61.38mm;黄柏提取物对高温、过酸过碱环境、长时间紫外线照射均具有一定的耐受性,经121℃高温处理、或当环境pH5或pH11时、或经紫外线照射45 min后,抑菌率维持在70%以上。黄柏提取物对番茄土传病害具有高效、稳定的抑菌效果,有较高的应用潜力和开发前景。     

凤仙透骨草中抑菌活性物质提取工艺研究

以意大利青霉做指示菌,以抑菌圈直径为活性追踪指标,在单因素实验的基础上通过二次回归正交旋转组合设计进行凤仙透骨草中抑菌活性物质的提取工艺参数优化。结果表明:最佳提取工艺条件为φ(乙醇)=96.8%,溶剂倍数10倍,提取温度50℃,提取时间3 h,在此优化条件下抑菌圈直径为36.95 mm。各因素对凤仙透骨草提取物抑菌效果的影响由大到小依次为:乙醇浓度,溶剂倍数,提取时间,提取温度。     

5种植物乙醇提取物及其复配物对荔枝霜疫霉菌的抑菌活性

[目的]研究5种植物乙醇提取物及其复配物对荔枝霜疫霉菌的抑菌活性,为开发荔枝水果保鲜剂和植物源复配杀菌剂提供科学依据.[方法]采用超声波辅助提取法提取丁香、黄柏、细辛、苦参和花椒等5种植物的乙醇提取物,利用生长速率法和孢子囊萌发法探讨5种植物乙醇提取物及其复配物对荔枝霜疫霉菌的抑制作用.[结果]丁香、黄柏和细辛在提取物浓度5.000 mg/mL下对荔枝霜疫霉菌的抑菌率均为100.00%,苦参和花椒的抑菌率分别为83.00%和74.00%.丁香、细辛、黄柏、苦参和花椒的乙醇提取物对荔枝霜疫霉菌的抑菌中浓度(EC50)分别为0.30、0.51、0.58、1.21和1.48 mg/mL.在1:1 (V/V)的配比下,苦参与花椒乙醇提取物的复配物抑制荔枝霜疫霉菌菌丝生长的增效比率(SR)最高,为4.59,表现为增效作用;丁香+黄柏、丁香+细辛和黄柏+细辛复配物的SR则在0.5~1.5,表现为相加作用.[结论]丁香、黄柏、细辛、苦参和花椒等5种植物的乙醇提取物对荔枝霜疫霉菌有较强的抑菌活性,其复配物对抑制荔枝霜疫霉菌菌丝生长具有增效或相加作用.在抑菌复配剂配伍时,可从降低成本和保护野生植物资源角度考虑选择适当的植物种类.     

‘苦水玫瑰’花色苷的提纯及其抑菌活性

【目的】探讨‘苦水玫瑰’花色苷最佳提纯工艺参数及对几种常见致病菌的抑菌效果.【方法】采用有机溶剂浸提法,在单因素试验基础上,运用Box-Behnken响应面分析优化‘苦水玫瑰’花色苷最佳提取工艺条件,经D-101型大孔树脂的动态纯化工艺后,确定最佳纯化工艺参数,测定其纯度,并进一步运用滤纸片法探究其抑菌效果.【结果】‘苦水玫瑰’花色苷最优提取工艺条件:提取液pH=1.05、乙醇浓度81.5%、提取时间45min、料液比1∶90(g/mL),提取2次,提取率4.27 mg/g.最佳动态吸附条件:上样液pH=2,吸附流速1 mL/min,上样液浓度0.15mg/mL,吸附率76.25%,95%酸性乙醇将花色苷全部洗脱.纯化后的花色苷对大肠杆菌和沙门氏菌抑菌效果不明显,对金黄色葡萄球菌抑菌明显,其抑菌圈直径为(6.35～10.12)±0.05 mm,最低抑菌浓度为1 mg/mL.【结论】利用响应面法确定最佳提取工艺条件合理,可用于‘苦水玫瑰’花色苷的提取.苦水玫瑰花色苷纯度由原来的5.862%提高到了23.97%,纯化效果显著,对金黄色葡萄球菌有明显抑菌效果.     

响应面法优化浸提大蒜抑制大肠杆菌成分工艺

在确定最佳浸提溶剂基础上,利用响应面分析方法对浸提法提取大蒜抑制大肠杆菌成分的工艺进行优化.选取酶解时间、浸提温度、浸提时间、液料比为自变量,大蒜提取物抑菌圈直径为响应值,根据中心组合(Box-Benhnken)试验设计原理采用四因素三水平的响应面分析法,对各个因素的显著性和交互作用进行分析.结果表明:以乙酸乙酯为浸提溶剂,浸提法提取大蒜抑菌成分的最佳工艺条件为酶解时间116 min,浸提温度15 ℃,浸提时间7.6h,液料比3.9:1(mL:g),该条件下的大蒜提取液对大肠杆菌的抑菌圈直径为2.61 cm.     

不同单味中草药与复配组方对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌效果

【目的】探明6种单味中草药与复配组方对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌效果，为抗嗜水气单胞菌感染的中药组方制剂选择提供参考。【方法】采用水提法制备单味中草药提取液，并按排列组合法将6种提取液按相同比例混合得到不同配方复配液，用牛津杯法进行体外抑菌试验，试管二倍稀释法测定最小抑菌质量浓度(MIC)与最小杀菌质量浓度(MBC)，研究不同单味中草药与复配组方对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌效果。【结果】6种单味中草药提取液对鲫鱼源嗜水气单胞菌抑菌圈直径为12.69～19.88 mm，五倍子的抑菌效果最好，为高度敏感，抑菌圈直径为19.88 mm，最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别为15.60 mg/mL和31.25 mg/mL；2味中草药复配对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌圈直径为10.64～19.98 mm，五倍子＋乌梅和五倍子＋五味子的抑菌效果最好，为高度敏感，抑菌圈直径分别为19.98 mm和19.94 mm，MIC和MBC分别为15.60 mg/mL和31.25 mg/mL；3味中草药复配对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌圈直径为9.94～20.26 mm，山茱萸＋诃子＋大黄的抑菌效果最好，为极度敏感，抑菌圈直径为20.26 mm，MIC和MBC分别为7.80 mg/mL和15.60 mg/mL；4味中草药复配对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌圈直径为9.88～21.28 mm，五倍子＋诃子＋乌梅＋五味子的抑菌效果最好，为极度敏感，抑菌圈直径为21.28 mm，MIC和MBC分别为7.80 mg/mL和15.60 mg/mL；5味及6味中草药复配对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌圈直径为14.11～19.07 mm，以6味的五倍子＋山茱萸＋诃子＋大黄＋乌梅＋五味子的抑菌效果最好，为高度敏感，抑菌圈直径为19.07 mm，MIC和MBC均为31.25 mg/mL。【结论】山茱萸＋诃子＋大黄和五倍子＋诃子＋乌梅＋五味子组方对鲫鱼源嗜水气单胞菌的抑菌效果最佳，均为极度敏感，可用于防治嗜水气单胞菌导致的鲫鱼败血症。