成纤维细胞生长因子在烧伤治疗中的作用

成纤维细胞生长因子在烧伤治疗中的作用黄广恩，程怀正，黄宇伦，陈娟，王谨（湛江中心人民医院烧伤整形外科，湛江５２４０３７）生长因子与创面愈合的关系，已引起国内外学者的密切关注［１］。近年来，动物实验研究表明，成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）能促进大鼠烧伤...     

成纤维细胞生长因子（FGF）研究进展

介绍了成纤维细胞生长因子（FGF）的种类和作用机理。同时,对国内外对FGF在胚胎发育、器官形成及毛囊发育过程中的作用等方面的研究进展进行了综述。     

豌豆植物瞬时表达酸性成纤维细胞生长因子研究

为探索豆科植物豌豆作为生物反应器瞬时表达外源重组蛋白的可行性,选择豌豆作为宿主植物,构建了含有酸性成纤维细胞生长因子基因的植物瞬时表达载体,以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,并以叶片注射法进行接种,在豌豆植株中瞬时表达了人酸性成纤维细胞生长因子,接种后在紫外灯下跟踪观察绿色荧光蛋白的表达情况.研究结果表明,接种后8～10 d在紫外灯下可观察到GFP的表达,12～14 d GFP表达量最大.蛋白质杂交检测结果表明,酸性成纤维细胞生长因子在豌豆植物中成功表达,说明豌豆植物可作为植物瞬时表达外源蛋白新的选择平台.     

人成纤维细胞生长因子-21分泌型表达及鉴定

利用基因工程手段,将人成纤维细胞生长因子-21(hFGF21)与分泌信号肽相融合,构建得到能够分泌表达FGF21蛋白的表达载体.将该表达载体导入到Rosetta(blue)宿主细胞中,在分泌信号肽的引导下,在细胞周质中表达.经IPTG诱导表达可获得分子量为21 kD的蛋白,Western-Blotting证明该蛋白为FGF21蛋白.经SOS-PAGE证明获得了可溶性的FGF21蛋白.该方法简化了纯化工序,提高了成品率,使大规模生产重组人成纤维细胞生长因子-21(rhFGF21)成为可能.     

乳糖诱导成纤维细胞生长因子-21在大肠杆菌中的表达

[目的]研究用乳糖作为诱导剂诱导成纤维细胞生长因子-21(fibroblast growth factor 21,FGF21)基因重组蛋白的表达,以探讨其工程化生产的可能性。[方法]对影响重组表达产物的乳糖诱导浓度、诱导时机、诱导时间及诱导温度等进行比较,并以IPTG诱导作为对照,确定最佳的乳糖诱导条件。[结果]对于重组目的蛋白,乳糖可以起到很好的诱导效果,诱导产物的表达量与IPTG诱导产物相当。其最佳表达条件为:在A600为0.8～1.0时,加入乳糖至终浓度为0.5 g/L,在35℃下诱导6 h。[结论]乳糖可诱导FGF21基因表达,并取得良好效果,为工程化生产提供了试验数据和借鉴。     

siRNA对鸡胚成纤维细胞中GAPDH基因表达的抑制作用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是通过短双链RNA(small interference RNA,siRNA)介导的特异性抑制相应基因表达的新技术。作为研究基因功能的有效手段,该技术已在线虫、果蝇、斑马鱼和鼠等动物中进行了应用。本研究利用体外转录合成的短双链干扰RNA(siRNA),针对鸡的管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH),在鸡胚成纤维细胞中对其表达进行干扰。结果显示siGAPDH能有效阻断GAPDH基因在鸡胚成纤维细胞中的表达,而不相关的siRNA则对该基因的表达没有影响,证明在鸡细胞中也存在RNA干扰现象,为利用RNAi技术对鸡的基因功能研究奠定了一定基础。     

结缔组织生长因子在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达

目的 :探讨结缔组织生长因子 (CTGF)在人类增生性瘢痕成纤维细胞中的表达与瘢痕纤维化之间的关系。方法 :应用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)和 Western blot技术 ,检测了瘢痕组织原代培养的成纤维细胞中 CTGFm RNA及蛋白表达。结果 :CTGF m RNA及蛋白在人类增生性瘢痕成纤维细胞中高度表达 ,与正常皮肤组织的成纤维细胞比较 ,差异有显著性意义 (P<0 .0 1)。结论 :CTGF在人类增生性瘢痕成纤维细胞中呈高度表达 ,提示其在增生性瘢痕的纤维化进程中起着重要的作用 ,这为临床上寻找安全、有效的治疗增生性瘢痕药物提供了可能。     

鸡miR-1749生物信息学分析及真核表达载体构建

为研究鸡miR-1749功能及其前体rs15860000(C>T)不同基因型对成熟miRNA生成的影响,采用Mfold软件预测C>T突变对miR-1749前体二级结构能值的影响;选用pcDNA3.1-EG-FP质粒,构建miR-1749前体不同等位基因的真核表达载体并转染DF1细胞,检测成熟miR-1749的表达;利用 TargetScan 和 miRDB 软件预测 miR -1749的靶基因,并将靶基因的并集在DAVID数据库进行GO功能富集和KEGG信号转导通路分析。 Mfold预测结果显示,miR-1749前体C>T突变影响其前体二级结构自由能值;成功构建pcDNA3.1-EGFP-pre-miR-1749-C和pcDNA3.1-EGFP-pre-miR-1749-T真核表达载体,转染DF1细胞后,不同基因型重组质粒miR-1749的表达量均显著高于空质粒组( P<0.01), T等位基因成熟miR-1749的表达量显著高于C等位基因(P<0.05)。2个软件预测结果显示,miR-1749靶基因的并集有250个基因,这些基因显著富集于Ras蛋白信号转导调控、GTPase介导信号转导调控、细胞稳态及胚后发育的生物学过程和GnRH、MAPK及细胞黏附分子的信号转导通路。     

鸡胚成纤维细胞培养的组织块贮存时间测试

鸡胚成纤维细胞培养的组织块贮存时间测试王立群，聂晶（东北农业大学生物工程系哈尔滨１５００３０）（哈尔滨市职工医学院）宣世纬（东北农业大学生物工程系哈尔滨）ＴＥＳＴＯＮＤＵＲＡＴＩＯＮＯＦＳＴＯＫＩＮＧＴＩＳＳＵＥＦＯＲＣＵＬＴＵＲＩＮＧＣＨＩＣＫＥＮ...     

人成纤维细胞生长因子FGF10的红花油体表达系统构建

利用红花油体系统表达人成纤维细胞生长因子10(FGF10)。将人源FGF10基因克隆至植物油体表达载体p CAMBIA1390Do(p1390Do)上,构建重组融合表达质粒p1390Do FGF10。通过农杆菌介导的叶盘法将FGF10转入红花,采用潮霉素(Hyg)筛选获得红花阳性苗。转基因红花经PCR、Southern和Western检测。PCR检测和Southern分析结果表明,Oleosin-FGF10基因已经成功转入红花中。Band Scand 5.0软件分析Western电泳图图谱结果显示,FGF10融合蛋白含量约占转基因红花种子可溶性蛋白的3.25%,并具有良好的反应原性。     

外用碱性成纤维细胞生长因子在糖尿病足溃疡的疗效分析

目的评价外用碱性成纤维细胞生长因子在糖尿病足溃疡的疗效。方法将124例糖尿病足患者按溃疡分级分为实验组(外用碱性成纤维细胞生长因子)和对照组,实验组在常规治疗的基础上采用外用碱性成纤维细胞生长因子,并与对照组进行比较。结果实验组的疗效明显优于对照组(有效率分别为96.67%和76.56%,P<0.05),治愈时间较短[(18.45±5.23)天比(22.60±6.11)天,P<0.01)]。结论外用碱性成纤维细胞生长因子治疗糖尿病足溃疡的临床效果较好,值得进一步研究并推广应用。     

强力霉素对骨关节炎大鼠膝关节软骨成纤维细胞生长因子-18表达的影响

目的 探讨强力霉素对骨关节炎大鼠膝关节软骨成纤维细胞生长因子-18(FGF-18)表达的影响.方法 32只SD大鼠通过膝关节前交叉韧带离断建立骨关节炎模型,随机分为A、B、C、D组,分别每日1次腹膜腔注射0.9％氯化钠溶液1 mL及3、6、9 mg/(kg.d)强力霉素溶液,共8周;免疫组化染色检测股骨髁FGF-18表达.结果 强力霉素处理组FGF-18表达低于对照组(P＜0.05),而不同剂量强力霉素组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 强力霉素可减少骨关节炎大鼠膝关节软骨FGF-18表达.     

12种藏药对鸡法氏囊病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响

藏医藏药有着独特的理论体系,在世界医学中独树一帜,是仅次于中医中药而有系统理论的民族医药.     

酸性成纤维细胞生长因子的分离纯化及活性分析

以瞬时表达酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)的豌豆(Pisum sativum L.)为试验材料,提取豌豆中可溶性总蛋白质,利用Western blot方法检测目的蛋白质,结果表明豌豆可成功表达aFGF;采用肝素亲和柱层析法分离目的蛋白aFGF,并用MTT法检测aFGF的生物学活性,结果表明豌豆中表达的酸性成纤维细胞生长因子具有促细胞分裂活性.     

人成纤维细胞生长因子-21的拟南芥油体表达系统构建

【目的】利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)油体系统表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblastgrowth factor-21,FGF21),为利用植物油体表达系统规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因作为转基因植物的安全筛选标记,将带有组氨酸标签的人源FGF21基因与大豆油体蛋白基因融合,克隆至大豆油体蛋白启动子驱动的表达载体pCAMBIA1390MDo(p1390MDo)上,构建植物双元表达载体p1390MDoFGF21。采用冻融法将植物双元表达载体p1390MDoFGF21转入农杆菌GV3101,花粉管导入法转化拟南芥,采用PCR检测、Southern blot筛选转基因拟南芥阳性植株(T0),并对FGF21蛋白在转基因拟南芥种子(T1)中的表达进行Western blot分析。【结果】成功构建了带PMI安全筛选标记的植物双元表达载体p1390MDoFGF21。PCR扩增和Southern blot分析结果表明,重组FGF21融合基因以单拷贝和多拷贝2种方式已整合到转基因拟南芥基因组中。BandScand 5.0软件和Western blot分析结果显示,FGF21融合蛋白约占转基因拟南芥种子可溶性蛋白的3.76%,并具有良好的免疫原性。【结论】FGF21融合基因已经转入拟南芥中,并在以PMI为选择标记的转基因拟南芥种子中成功高效表达。     

TLRs信号通路和促炎症细胞因子基因在鸡胚成纤维细胞感染新城疫病毒过程中的表达分析

【目的】研究新城疫病毒对鸡胚成纤维细胞中TLRs抗病毒信号通路和促炎症相关细胞因子的诱导作用。【方法】采用分离培养的原代鸡胚成纤维细胞感染中等毒力的新城疫病毒,并在感染后的4、8、12、16、24h收集细胞,利用定量PCR检测TLRs信号通路及促炎症相关细胞因子在细胞新城疫病毒感染过程中的表达变化。【结果】结果显示,TLR3、TLR7、TLR15,及其衔接蛋白基因MYD88、TRIF,以及下游基因IFN-α、IFN-β、Mx的表达量在病毒感染后呈现出显著上调(P0.05)。同时促炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量在病毒感染后也表现出显著上调(P0.05)。【结论】研究表明,在鸡胚成纤维细胞对新城疫病毒的识别过程中,由TLR3、TLR7、TLR15介导抗病毒信号通路,同时诱导产生促炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α,并在新城疫病毒诱导的炎症反应过程中发挥重要的作用。     

siRNA干涉禽流感病毒PA基因在鸡胚成纤维细胞中的表达

用阳离子脂体质转染试剂将人工合成的小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)转染鸡胚成纤维细胞(CEF).结果表明,针对禽流感病毒(AIV)H5N1亚型核蛋白(NP)基因的siRNA能在AIV感染后1,2,3 h显著抑制NP基因的表达,表达水平分别降低3,1.4和2.5倍.     

几种中药粗提物对鸡胚成纤维细胞生长的影响

为筛选抗IBDV方剂的主药,采用组织培养方法,测试了黄芪、连翘等8种中药粗提物在体外鸡胚成纤维细胞(CEF)上的最大安全浓度及其对CEF增殖、存活时间的影响。结果显示,黄芪对CEF基本无毒性作用,最大安全浓度为25mg/ml,而连翘等其余7种中药粗提物则表现出较大的毒性作用,最大安全浓度极低,同时,黄芪对CEF还具有较强的促生长和延长存活时间的作用。因此,筛定黄芪作为抗IBDV方剂的主药。     

猪成纤维细胞视黄素X受体β基因的表达调控

采用半定量RT-PCR方法研究了在体外培养的猪成纤维细胞内,Vc对视黄素X受体β基因（RXRβ）的表达调控情况。结果表明,不同浓度的Vc对RXRβ基因的表达调控效果不同,其中终浓度为30μg·μL^-1组的RXRβ基因的表达水平在Vc作用48 h后出现了显著升高情况。     

碱性成纤维细胞生长因子对酒精中毒鼠小脑颗粒细胞存活的影响及作用机制的研究

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对鼠小脑颗粒细胞(CGC)存活的影响及作用机制。方法：通过光学显微镜观察bFGF、酒精及一氧化氮酶(NOS)抑制剂NG—硝基—L—精氨酸(N^G—nitro-L-arginine methyl ester,NAME)对CGC产生的影响。结果：bFGF能在无酒精的环境下，促进CGC的生存，使细胞数高于空白对照组(P＜0．01)，并能减少酒精对细胞的杀死，令CGC损失率较酒精空白对照组低(P＜0．01)，从而对细胞产生保护作用。但NAME却能抑制bFGF的作用。结论：bFGF通过一氧化氮酶促进CGC的存活并对抗酒精对CGC的毒性作用。