莴笋链格孢叶斑病病原鉴定及室内生防菌剂筛选

【目的】明确江西省南昌市郊区莴笋链格孢叶斑病病原菌种类，筛选出能有效防治该病害的生防菌剂。【方法】采用组织分离法对莴笋链格孢叶斑病进行病原菌分离纯化，选择代表性菌株WS1作为供试菌株进行孢子悬浮液刺伤接种，再对接种发病的病斑进行病原菌再分离，以完成柯赫氏法则验证，最后对分离所得病原菌进行形态学鉴定；采用真核生物核糖体基因转录间隔区rDNA-ITS以及过敏原基因Alt a1分别对病原菌进行PCR扩增和序列测定，使用BLAST软件，在GenBank中进行序列同源性比对，并利用MegA 7.0软件构建系统发育树，以对病原菌进行分子鉴定。采用对峙培养法测定8种常见市售生防菌剂对该病原菌的室内抑菌效果。【结果】共分离获得23个培养性状一致的链格孢菌株，其对莴笋叶片均具有致病性。病原菌在PDA培养基上菌落圆形，中间灰褐色，边缘白色，菌丝体茂密呈绒状，后期正面中央颜色加深成暗青褐色，背面呈黑褐色，菌落平均生长速度10.86 mm/d。分生孢子倒棍棒形或椭圆形，淡褐色至褐色，具0～6个横隔、0～3个纵隔和0～2个斜隔，孢身大小14.60～40.09μm×6.61～14.44μm。短喙柱状或锥形，淡褐色...     

奉新猕猴桃黑斑病病原菌鉴定及室内药剂筛选

【目的】明确江西省奉新县猕猴桃黑斑病病原菌种类,筛选防治该病害的有效药剂。【方法】从奉新县果园中随机采集40个呈典型症状的猕猴桃黑斑病病果,采用PDA培养基按照常规组织分离法对其进行病菌分离和纯化。从获得的菌株中选择代表性菌株HB-1进行病菌鉴定和药剂筛选。在测定其致病性的基础上对其培养性状、分生孢子和分生孢子链形态进行观察,并测量其分生孢子大小。根据菌落形态特征和病菌形态大小,参考相关文献,对病原菌进行种类归属鉴定。提取菌株HB-1基因组DNA,对其rDNA-ITS和EF-1α基因进行PCR扩增和序列测定,根据序列同源性大小对病原菌进行分子鉴定。采用菌丝生长速率法测定22种杀菌剂对该病菌的室内抑菌活性。【结果】共分离获得35个培养性状一致的真菌菌株,供试菌株HB-1具有致病性,其菌落绒状,正面墨绿色,背面淡绿色。菌株产生卵形或倒棍棒形,具2～5个横隔膜和1～3个纵、斜隔膜、大小(15～50)μm×(7.5～12.5)μm的分生孢子。分生孢子链状着生并有分支,支链一般长1～5个孢子,最长也未达到10个孢子。上述培养性状和形态特征符合文献中对链格孢(Alternaria alternata)的描述。该菌株的rDNA-ITS和EF-1α基因序列长度分别为531 bp和240 bp,与GenBank中链格孢(A. alternata)的序列同源性为100%。在药剂筛选试验中,申嗪霉素、咪鲜胺锰盐、己唑醇、肟菌·戊唑醇、丙环唑、苯醚甲环唑、戊唑·嘧菌酯和氟硅?8种杀菌剂抑菌活性强,EC_(50)值均小于1μg/mL;中生菌素、嘧菌环胺、吡唑醚菌酯、异菌脲、噁酮·锰锌、多抗霉素、丙森锌、代森联和腈苯唑9种杀菌剂抑菌活性较强,EC_(50)值1～10μg/mL;啶酰菌胺、乙蒜素、春雷霉素、精甲·百菌清和百菌清5种杀菌剂的抑菌活性较弱或不明显,EC_(50)值均大于25μg/mL。【结论】确定奉新县猕猴桃黑斑病病原为链格孢(A. alternata),申嗪霉素、咪鲜胺锰盐、己唑醇、肟菌·戊唑醇、丙环唑、苯醚甲环唑、戊唑·嘧菌酯和氟硅?8种杀菌剂对链格孢具有强烈的抑菌活性。     

链格孢属一新种——沙棘链格孢

【目的】发现链格孢属新种资源,以丰富生物多样性研究,为植物病害的防治提供依据。【方法】采用实地考察、分离培养和鉴定的方法,与我国和世界已经发现的链格孢属的种特征进行了比较分析。【结果】得到的链格孢属新种沙棘链格孢不同于已发现链格孢属种之处主要在于,其孢子深褐色,长倒棒形,一些孢子近圆柱形,只在孢身与喙处才收缩。【结论】沙棘链格孢与已报道的种在孢子颜色、形状等方面均不同,是一链格孢属新种。研究的模式标本（PSNXAAFS19785）保存在宁夏农林科学院植物病害标本室。     

剑兰叶斑病菌鉴定及其生物学特性研究

【目的】叶斑病是制约广东省台山市剑兰产业的重要因素,对病原菌进行分类鉴定、生物学特性和杀菌剂敏感性研究,旨在为病害防控提供参考。【方法】基于病菌致病性、形态特征和 rDNA-ITS 序列分析确定病菌分类地位,采用菌丝生长速率法和镜检孢子量测定温度、pH、光照、碳源、氮源和杀菌剂对病菌生长的影响。【结果】分离纯化获得性状一致的 4 株菌株,致病性测定表明人工接种发病症状与田间症状表现一致。病菌分生孢子梗褐色,多单生,具隔膜,顶端屈膝状,大小为 51.0~80.0 m×4.0~7.6 m。分生孢子褐色、弓形、中间宽两端窄,向一侧弯曲,4 个细胞,大小为 23.5~32.0 m×11.5~16.0 m。基于病菌 rDNA-ITS 序列进行系统进化分析,病菌与唐菖蒲弯孢霉（Curvularia gladioli）聚类到一起,形成明显分支。给合病菌形态特征和 rDNAITS 序列分析确定病原菌为唐菖蒲弯孢霉（Curvularia gladioli Boerema & Hamers）。适宜病菌菌丝生长和产孢的温度范围为 26~30 ℃,pH 范围为 5.0~7.0;光照促进菌丝生长,黑暗利于产孢;碳源木糖、葡萄糖和有机氮源牛肉膏适宜菌丝生长和孢子产生。咪鲜胺和代森锰锌对菌丝生长抑制作用最强,EC50 分别为 1.23、2.81 g/mL。【结论】广东省台山市剑兰叶斑病病原菌为菌唐菖蒲弯孢霉,适宜生长温度为 26~30 ℃,pH 为 5.0~7.0,对咪鲜胺和代森锰锌敏感。     

链格孢属一新种

报道了链格孢属一新种——四合木链格孢,其寄生于四合木上,引起近圆形或不规则形病斑,与梨形链格孢的区别在于喙较短,孢子分隔处缢缩明显。模式标本保存在宁夏农林科学院植物病害标本室(PSNAAFS356608)。     

3种菊科千里光族植物病原链格孢菌的分离与鉴定

【目的】调查链格孢菌在菊科植物上的危害。【方法】2016—2017年,从湖北、北京、安徽及云南各地采集得到菊科千里光族植物瓜叶菊(Pericallis hybrida)、银叶菊(Senecio cineraria)及白子菜(Gynura divaricate)叶斑病病样4份。采用单孢分离的方法从各寄主上分别获得形态相似的链格孢菌大孢子种菌株。随后从各寄主分离物中筛选出1个代表菌株进行致病性、形态学及多基因位点(r DNA-ITS、GAPDH、Alt a 1、EF1-α、RPB2和ATPase)序列分析研究。【结果】4个菌株均可引起其寄主发生病害,且均为瓜叶菊链格孢菌(Alternaria cinerariae)。【结论】这是该菌种在国内的首次报道,也是该菌引起银叶菊与白子菜叶斑病病害的首次报道。     

湖北枣阳烟区烟叶赤星病病原鉴定

为明确湖北枣阳烟区烟草赤星病病原菌的种类,给产区综合防治烟草赤星病提供依据。从枣阳烟区采集典型烟草赤星病样本进行病原菌分离,在致病性测定的基础上通过形态学和分子生物学方法对病原菌进行鉴定。结果显示,分离出的菌株ZY-1为烟草赤星病病原菌,其分生孢子卵形或椭圆形,褐色,具有3～6个横隔膜和1～4个纵隔膜,分生孢子链较短呈树状,多分枝,病原菌rDNA-ITS序列分析结果表明,菌株ZY-1与链格孢(A.alternata)同源性最高,达100%。结合形态学和分子生物学鉴定结果,确定为链格孢(A.alternata),这是首次在湖北枣阳烟区发现由链格孢(A.alternata)引起的烟草赤星病。     

链格孢属一新种——竹链格孢

从华西箭竹病理组织上分离到一株真菌,通过对其产孢模式和分生孢子特点等的形态学研究,发现该菌为链格孢属小孢子种群成员。然而该菌具有区别于已知种的特征,如分生孢子梗常单生,少数成簇,无分枝;分生孢子大多单生,较少链生,孢身较大;寄主为华西箭竹,故立为竹链格孢新种。该模式标本保藏于山东理工大学生命科学学院实验室。     

黑龙江、四川和海南省稻作区水稻穗腐病病原比较分析

【目的】明确中国黑龙江、四川和海南省稻作区水稻穗腐病病原种类及优势致病菌,为水稻穗腐病的精准防控提供参考。【方法】在黑龙江、四川和海南省的13个水稻主要生产区采集水稻穗腐病样品,通过组织分离和单孢分离法,共分离纯化到568个菌株,对各菌株进行形态学鉴定,结合rDNA-ITS序列分析及科赫氏法则验证,明确13个水稻主要生产区穗腐病病原菌种类,分析其优势菌株及致病特征。【结果】黑龙江省水稻穗腐病病原有弯孢菌属、链格孢属和镰孢菌属3类,分别占总病原菌数的1.10%、83.43%和15.47%,链格孢属为该省份的优势菌种。海南省水稻穗腐病病原有弯孢菌属、镰孢菌属、黑孢霉属、毛色二孢属及蠕孢菌属5类,分别占总病原菌数的1.62%、89.47%、0.81%、1.62%和6.48%,镰孢菌属为该省份的优势菌种。四川省水稻穗腐病病原有弯孢菌属、链格孢属、镰孢菌属、黑孢霉属、蠕孢菌属5类,分别占总病原菌数的23.57%、13.47%、22.86%、16.43%和23.57%,无优势菌种。根据分生孢子及菌落形态差异筛选出具有代表性的23个菌株,结合rDNA-ITS序列分析及科赫氏法则验证,明确了水稻穗腐病...     

云南蒙自石榴叶霉病病原菌鉴定

[目的]鉴定云南蒙自石榴（Phomopsis punicae Linn.）霉病病原菌,为进一步研究蒙自石榴叶霉病有效防治方法奠定基础。[方法]病原分离采用组织分离法,通过分生孢子悬浮液接种,用柯赫氏法则对其致病性进行验证。显微镜下观察菌丝形态及产孢结构,测量孢子大小,根据形态特征进行鉴定。[结果]显微镜下,分生孢子梗单生,直立,顶部微弯或曲膝状,深褐色,有隔膜,（129.3～352.5）μm×（3.5～4.7）μm;枝孢短链生,褐色,有或无隔膜,具油滴,（9.0～36.0）μm×（4.0～5.0）μm;分生孢子链生,椭圆形,近球形,褐色,无隔膜,具油滴,（4.0～8.0）μm×（3.0～4.0）μm。[结论]叶霉病发生在石榴生长后期,一般危害石榴老叶,形成近圆形或不规则形黑褐色病斑,病斑上长橄榄绿色霉层,为病原菌的子实体。造成石榴提早落叶。其病原菌鉴定为极细枝孢（Cladosporium tenuissimum Cooke）。     

银杏内生小孢子链格孢的分离与鉴定

【目的】对银杏内生小孢子链格孢进行分类鉴定,探索鉴别内生小孢子链格孢的有效方法。【方法】采用组织分离法分离银杏叶片中的小孢子链格孢,分别用产孢表型鉴定法和OPA2-1核苷酸序列分析法对分离的小孢子链格孢进行初步鉴定。【结果】从银杏叶片中分离到55株内生小孢子链格孢,老叶中内生小孢子链格孢的分离几率(7.8%)明显比新叶(4.3%)高,是新叶的1.8倍。根据产孢表型可将55个分离物归为5个类群;通过OPA2-1核苷酸序列及系统发育分析,将银杏内生小孢子链格孢分为2个聚类组,其中分离物N02-4和XL-7聚在一个独立的分支上,而其余9个分离物与细链格孢(A.alternaria)、细极链格孢(A.tenuissima)、粗柠檬链格孢(A.limoniasperae)聚为一类,未能反映遗传上的差异。分离物N02-4的产孢表型与其他分离物不同,且其OPA2-1核苷酸序列与其他分离物有3个碱基的差异;分离物XL-7的产孢表型与细极链格孢(A.tenuissima)一致,但在核苷酸序列上存在3个碱基的差异。【结论】仅根据产孢表型对银杏内生小孢子链格孢进行归类,信息有限,结果不准确,需结合分子生物学手段才能进行准确归类。     

云南蒙自枇杷叶霉病病原菌的初步鉴定

[目的]该研究旨在研究云南蒙自的枇杷叶霉病病害,并为确定其有效的防治方法奠定基础.[方法]病原分离采用组织分离法,通过分生孢子悬浮液接种,用柯赫氏法则对其致病性进行验证.显微镜下观察菌丝形态及产孢结构并测量孢子大小,根据形态特征进行鉴定.[结果]在显微镜下发现分生孢子梗直立,顶端曲屈,深褐色,无隔膜,平滑,孢痕明显,(33.0～152.8) μm×(2.6～4.0) μm枝孢褐色或淡橄榄色,有胞痕,单胞或有1个隔膜,(7.1～19.0) μm×(1.9～5.9) μm分生孢子链生(2～4),椭圆形,偶球形,无孢痕,淡橄榄色,单胞,平滑,(2.1～9.4) μm×(1.2～2.6) μm.[结论]叶霉病在春梢和夏梢萌发期开始发病,秋梢发病最重,叶片正面和背面部长出烟煤状霉层,密布全叶,严重影响植株的光合作用,其病原菌初步鉴定为枇杷枝孢.     

云南蒙自枇杷叶霉病病原菌的初步鉴定

为了进一步研究云南蒙自的枇杷叶霉病病害,并为确定其有效的防治方法奠定基础,病原分离采用组织分离法,通过分生孢子悬浮液接种,用柯赫氏法则对其致病性进行验证.显微镜下观察菌丝形态及产孢结构并测量孢子大小,根据形态特征进行鉴定,在显微镜下发现分生孢子梗直立,顶端曲屈,深褐色,无隔膜,平滑,孢痕明显,(33.0 ～152.8) μm×(2.6～4.0) μm.枝孢褐色或淡橄榄色,有胞痕,单胞或有1个隔膜,(7.1～19.0) μm×(1.9～5.9)μm.分生孢子链生(2 ～4),椭圆形,偶球形,无孢痕,淡橄榄色,单胞,平滑,(2.1～9.4) μm×(1.2 ～2.6)μm.结果发现,叶霉病在春梢和夏梢萌发期开始发病,秋梢发病最重,叶片正面和背面都长出烟煤状霉层,密布全叶,严重影响植株的光合作用,其病原菌初步鉴定为枇杷枝孢.     

链格孢菌苹果致病型的ATMT转化体系的建立

【目的】链格孢菌（Alternaria alternate）苹果致病型是苹果上的重要致病菌,可以侵染苹果叶片和果实。论文旨在建立农杆菌介导的链格孢菌苹果致病型高效稳定的分子转化体系,为在分子水平上研究链格孢苹果致病型病菌的致病机制提供技术支持。【方法】质粒pKO1-HPH是以pCAMBIA1300骨架为基础构建的穿梭质粒,含有潮霉素抗性基因,并在其多克隆位点上插入了绿色荧光蛋白基因,这个质粒在大肠杆菌和农杆菌细胞中都能够稳定地复制繁殖。将质粒pKO1-HPH采用冻融法转化到农杆菌菌株AGL1中,然后与链格孢苹果致病型菌株XP-1的分生孢子在诱导培养基上共培养进行基因转化,转化子在含有潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上进行筛选;在含有50 μg·mL^-1潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上检测转化子细胞中抗性基因在转化子中的表达情况;用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白基因在转化子细胞中的表达情况。在初步确认可以将绿色荧光蛋白和潮霉素B磷酸转移酶基因转入链格孢苹果致病型菌株中后,对菌落培养时间、转化前分生孢子的预处理方法对转化效率的影响进一步优化。转化子的稳定性采用分生孢子5次继代培养后,能否在含有潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上稳定生长来检测;采用PCR方法检测绿色荧光蛋白外源基因和潮霉素B磷酸转移酶基因是否存在于转化子基因组中;用Southern杂交检测外源基因在转化子基因组中插入的拷贝数;在苹果果实和叶片上接种检测转化子致病性的变化。【结果】将100 μL孢子悬浮液（含10⁵孢子）涂布于马铃薯-胡萝卜-琼脂平板上菌落培养36-48 h后,链格孢苹果致病型菌株XP-1可以产生足量的孢子用于农杆菌介导的分子转化。将分生孢子用无菌水洗下,在4℃处理6 h,再与含质粒pKO1-HPH的农杆菌进行诱导共培养,转化子在含有50 μg·mL^-1潮霉素的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基上进行筛选,转化效率较好,10⁷个分生孢子转化可获得约200个转化子。转化子经过5次继代培养,对潮霉素B的抗性没有改变。特异性引物PCR检测表明外源基因能够成功地整合到供试菌株的基因组中;Southern杂交表明外源基因多以单拷贝形式随机插入到链格孢苹果致病型菌株XP-1细胞的基因组中;转化子的菌丝和分生孢子在荧光显微镜下可以观察到明显的绿色荧光,说明荧光蛋白基因在菌丝及孢子中均能够成功表达。通过部分转化子的致病性试验,筛选获得数个在苹果果实和叶片上致病性都显著降低的菌株。【结论】建立了农杆菌介导的链格孢菌苹果致病型稳定高效的分子转化体系,为进一步开展此病菌与其寄主的分子互作研究打下基础。     

灰梨孢菌产孢培养基筛选

【目的】筛选操作方法简便、产孢效果好、适宜于大多数灰梨孢菌的产孢培养基,为灰梨孢菌研究提供一定的技术支持。【方法】从水稻、香蕉和杂草马唐上分离获得6个灰梨孢菌菌株,接种于紫花鸭趾草、高粱粒和大麦粒等9种培养基上,测定不同培养基对灰梨孢菌产孢量的影响,并比较分析紫花鸭趾草培养基对病菌致病力的影响。【结果】高粱粒、大麦粒和紫花鸭趾草培养基对6个菌株孢子形成均有明显的促进作用,以紫花鸭趾草培养基的促进作用最明显。与常用的高粱粒培养基相比,6个菌株在紫花鸭趾草培养基上形成的病菌分生孢子对香蕉和水稻的致病力没有明显差异。在4℃冰箱中,用紫花鸭趾草培养基保存蕉瘟病和稻瘟病菌菌种,两年后病菌仍具有生活力。【结论】紫花鸭趾草培养基是适宜于灰梨孢菌分生孢子形成的理想培养基,紫花鸭趾草培养基也适合于保存灰梨孢菌。     

稻曲病菌分生孢子高产突变体A2588的T-DNA 插入位点侧翼基因分析

【目的】克隆稻曲病菌（Ustilaginoidea virens）分生孢子高产突变菌株A2588的T-DNA插入突变基因,解析该基因在稻曲病菌分生孢子形成中的功能,为进一步揭示稻曲病菌的分生孢子形成机制提供理论基础。【方法】测定A2588的产分生孢子能力、孢子萌发率、菌丝直线生长能力和热敏感性等生物学特性,利用hiTAIL-PCR、RACE和半定量PCR等方法克隆T-DNA插入突变基因,并结合生物信息学方法分析T-DNA插入导致分生孢子产量提高的分子机理。【结果】与稻曲病菌野生型菌株70-22相比,突变菌株A2588在PS培养液中产生数量为10倍以上的分生孢子,在MM培养液中产生数量约20倍的分生孢子,其在PS培养液中培养的菌球较为致密;在PSA和MM固体培养基上A2588产孢周期较短,孢子萌发率较低,虽然菌丝生长速度无明显差异,但热处理后菌丝不能恢复正常生长速率。hiTAIL-PCR和RACE法克隆了A2588中T-DNA侧翼基因,并利用RT-PCR检测侧翼基因表达水平,结果表明T-DNA侧翼基因spo76表达水平下降,进一步分析发现T-DNA可能插入至spo76的启动子区域,从而破坏了该基因启动子的部分功能。【结论】稻曲病菌突变菌株A2588中,T-DNA插入导致spo76启动子功能部分缺失,spo76表达水平下降,可能使A2588产孢周期缩短,并产生更多分生孢子。     

农杆菌介导苹果炭疽病菌的遗传转化及转化子鉴定

【目的】优化农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导转化苹果炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）的技术体系,并对转化子进行筛选鉴定,比较其生物学特性和致病性差异。【方法】以苹果炭疽病菌LXS010101分生孢子为转化受体,利用携带重组双元载体的农杆菌进行转化;对获得的转化子进行遗传稳定性测定、PCR检测及Southern blot分析;选取一定数量的转化子,比较其菌落形态、生长速率及分生孢子发育等主要生物学性状及致病性的差异。【结果】苹果炭疽病菌的最优转化体系为：病菌分生孢子悬浮液浓度1×105个/mL,共培养温度和时间分别为22℃和24 h,共培养基中添加200 μmol•mL-1乙酰丁香酮,其转化效率达到1×105个孢子可获得439个转化子。随机选取30个转化子进行鉴定,发现T-DNA已整合进炭疽病菌基因组中,在所检测的转化子中都是以单拷贝的形式整合,且能够稳定遗传。与野生型菌株相比,转化子的菌落形态没有发生明显变化,但23.33%的菌株生长速率显著减低;转化子ATJ-3和ATJ-15不能产生分生孢子,在28个产孢菌株中,分生孢子萌发率显著减低的菌株占39.29%,附着胞形成比例显著减低和形态异常的菌株占25.00%。致病性测定结果显示,11个转化子的致病力显著降低,其中菌株ATJ-19完全丧失致病能力。【结论】优化的苹果炭疽病菌遗传转化技术体系,可用于炭疽病菌致病相关基因的克隆及致病分子机理的研究。     

甜叶菊褐斑病的病原菌鉴定及MeJA的抗病作用

【目的】明确引起甜叶菊褐斑病的病原菌种类,分析MeJA在甜叶菊响应链格孢菌过程中的作用,为甜叶菊褐斑病的防治及抗病育种提供依据。【方法】对取自江苏省东台市富安镇甜叶菊生产基地的发病甜叶菊植株的叶片进行病原菌分离、纯化培养,观察菌落及分生孢子的形态、大小和病原菌的致病性。采用离体叶片接种的方法进行致病性测定。利用真菌通用引物ITS1和ITS4对7个致病菌株ST1-ST7的r DNA-ITS区进行扩增,对扩增产物进行回收和测序,并利用MEGA 7软件的邻接法(neighbor-joining,NJ)构建基于病原菌的r DNA-ITS序列和Gen Bank中相关链格孢菌序列的系统发育树,确定病原菌的种类。利用台盼蓝染色、光学显微镜观察分析链格孢菌分生孢子在甜叶菊叶片上的萌发状态及侵入叶片的方式。通过向马铃薯葡萄糖琼脂培养基(potato dextrose agar,PDA)上外源添加MeJA分析其对链格孢菌菌丝生长的影响;对甜叶菊离体叶片饲喂MeJA并接种链格孢菌,观察叶片对链格孢菌的抗性;采用q PCR方法分析JA通路相关基因在甜叶菊叶片接种链格孢菌前后的表达情况。【结果】从甜叶菊发病叶片上共分离到7个菌株,所有菌株在PDA培养基上呈近圆形等径辐射生长,气生菌丝较为发达,初期为白色,后期逐渐变为不同程度的灰黑色,分生孢子单生或成链,多为近球形、倒棒状或倒梨形,大小为(20.5—45.5)×(6.5—16.0)μm。将所分离得到的菌株接种于甜叶菊离体叶片上,发现7个菌株对甜叶菊叶片致病程度存在一定差异,ST2、ST3和ST7 3个菌株侵染叶片后病斑扩展速度快,致病力较强。3个致病力较强的菌株的r DNA-ITS序列长度分别为569、570和570 bp,通过系统进化树分析,ST2、ST3与菌株KY814634.1、DQ491089.1等(Alternaria alternata、Alternaria sp.,链格孢)的相似度达到99%—100%,ST7与菌株HQ402558.1(Alternaria tenuissima,细极链格孢)的相似度达到99%。对接种细极链格孢ST7分生孢子的甜叶菊叶片台盼蓝染色后的观察结果发现,分生孢子可以从孢子的头部、侧面、尾部多个位置萌发,从叶片的气孔和表皮细胞间隙侵入叶片表皮细胞内。外源施加浓度高于200μmol·L~(-1)的MeJA能有效抑制细极链格孢菌丝的生长;甜叶菊离体叶片饲喂100μmol·L~(-1)的MeJA后接种细极链格孢,病斑面积明显小于对照,表明MeJA可增强甜叶菊对细极链格孢的抗性;JA通路相关基因LOX3和JAR1在甜叶菊接种细极链格孢后上调表达,JAZ1和JAZ4反之下调表达,表明JA通路参与甜叶菊对细极链格孢的响应。【结论】江苏省东台市富安镇甜叶菊生产基地甜叶菊褐斑病的致病菌为链格孢菌。细极链格孢菌丝可以从叶片的气孔以及表皮细胞间隙侵入表皮细胞。外源施加MeJA能够有效增强甜叶菊叶片对细极链格孢的抗性,在甜叶菊褐斑病的防治中具有很好的应用前景。     

咯菌腈对四种牡丹叶片病原真菌的抑制活性

【目的】探究咯菌腈对牡丹黑斑病菌(Alternaria suffruticosae)、黄斑病菌(Phyllosticta commonsii)、腔孢叶斑病菌(Hainesia lythri)和叶霉病菌(Cladosporium paeoniae)菌丝生长、孢子萌发、芽管伸长及产孢的抑制活性,分析咯菌腈在牡丹病害化学防治上的应用前景。【方法】采用菌丝生长速率法测定咯菌腈对菌丝生长的抑制活性,采用涂布平板法测定咯菌腈对孢子萌发、产孢时间及产孢量、芽管伸长及芽管和孢子形态的影响。【结果】咯菌腈对腔孢叶斑病菌菌丝生长的抑制作用最强,EC_(50)为0.01μg·mL~(-1),其次为黑斑病菌和黄斑病菌,分别为0.07和0.35μg·mL~(-1);咯菌腈对4种病菌的孢子萌发均有较强的抑制作用,对腔孢叶斑病菌的抑制作用最强,其EC_(50)为1.26μg·mL~(-1),对其他3种病菌孢子萌发的EC_(50)在3.27—3.45μg·mL~(-1);0.1μg·mL~(-1)咯菌腈对4种病菌分生孢子芽管伸长的抑制率在40%—70%,表明咯菌腈对4种病菌分生孢子芽管伸长均有明显的抑制作用,浓度越大抑制作用越强,各浓度间差异显著,其中对腔孢叶斑病菌芽管伸长抑制的EC_(50)为0.04μg·mL~(-1),抑制作用最强,对其他3种病菌芽管伸长的EC_(50)在0.08—0.22μg·mL~(-1);咯菌腈对黑斑病菌和黄斑病菌分生孢子和芽管的致畸作用强烈,可导致孢子及芽管膨大、过度分枝,而对叶霉病菌和腔孢叶斑病菌致畸作用较弱,芽管及孢子形态基本正常;咯菌腈可推迟黑斑病菌、黄斑病菌及叶霉病菌的产孢时间,对黑斑病菌产孢量的抑制作用最强,EC_(50)为0.05μg·mL~(-1),对叶霉病菌次之,EC_(50)为0.38μg·mL~(-1),但对腔孢叶斑病菌产孢有促进作用。【结论】咯菌腈对牡丹黑斑病菌及腔孢叶斑病菌的菌丝生长、孢子萌发及芽管伸长均有很强的抑制作用,但对腔孢叶斑产孢具有一定的促进作用;对叶霉病菌和黄斑病菌孢子萌发及芽管伸长、黄斑病菌菌丝生长及叶霉病菌产孢的抑制作用强烈;由于咯菌腈内吸活性较弱,无法抑制已侵入牡丹叶片的病原真菌的生长,故建议作为保护剂在病害发生前施用。     

适合Alternaria soloni的分类培养条件研究

链格孢属（Altermaria）中的A. soloni需要光照及其它条件的诱导才能产孢,许多研究者对此做了不少研究工作。尽管许多学者对A. soloni产孢和机理进行了有益的探索,但对适合于A. soloni分类的培养条件,即光质对产孢性能和诱发产孢方法的研究还未见报道. 1　材料与方法 1.1　培养条件　　选用适合于大多数种类的PCA培养基。培养箱：光照台上装有三支122 cm灯管,相距15 cm, 中央灯管是一支黑光灯（40 W或2支20 W）,两边各是一支40 W日光灯管。在灯管下36 cm处用一个122×30 cm的平板放置培养皿。 1.2　不同光质对A. soloni产孢性能的影响　　把A. soloni接种于PCA上,在黑暗条件下培养3 d（25 ℃）,置于培养箱（进行灭菌处理）内,进行如下处理： 　　①在同一条件下以日光灯（DL）为光源作三种处理;揭去皿盖,直接照射培养皿中的菌落、光透过玻璃皿盖照射菌落和透过塑料皿盖照射菌落。光照10 h后置22 ℃黑暗条件下,分别培养10 h,36 h后,检查产孢量;以黑布裹的培养皿为对照。 　　②近紫外线（NUV）处理。改用NUV灯管,处理及方法同上。 　　③DL+NUV处理,改用DL+NUV光照,处理方法同上。 1.3　诱发A. soloni产孢的方法　　把A. soloni接种于PDA上,在黑暗条件下培养4 d（25 ℃）,然后做如下处理： 　　①伤刺激：用灭菌针划破菌落,置22 ℃湿箱中,在黑暗条件下继续培养。定期观察产孢情况,等产孢后,制片镜检。 　　②日光灯照射：在培养箱内DL光照下直接照射菌落10 h,然后在22 ℃黑暗条件下培养 36 h, 制片镜检。 　　③近紫外光照射：在培养箱内NUV光照直接照射菌落10 h,然后在22 ℃下黑暗培养36 h,制片镜检。 　　④日光灯加近紫外灯照射：在培养箱 内 DL+NUV光照下处理（通过塑料皿盖）10 h, 培养条件同前,36 h后制片镜检。 　　⑤转接菌块于PCA培养基上,培养条件同①,36 h后制片镜检。 　　对上述处理后产生的分生孢子,每处理选代表性孢子50个,进行描绘,然后和自然寄主上的分生孢子进行形态比较,对分生孢子长、宽、横隔、纵隔、喙长、喙分隔数、喙分枝率等性状进行测定,求平均值,进行聚类分析。 2　结　果 2.1　不同光质对A. soloni产孢性能的影响　　本试验的结果表明： 　　①DL,NUV和DL+NUV三种光直接照射菌落时,DL和NUV分别照射诱发的分生孢子产孢量最大,DL+NUV光照次之。DL+NUV光线照射诱发的孢子梗数量接近于DL和NUV下产生的量,但出现大量的不育梗,造成产孢量减少。同时由于这种方法在强光下开盖时间较长,培养基的水份易散失,使培养基质干裂,且易污染。 　　②三种不同光质的光线透过玻璃培养皿盖照射处理,然后黑暗培养12 h,诱发产孢作用剧减或全无。其中NUV处理有稀少的分生孢子产生;DL和NUV+DL处理不能产生孢子。表明玻璃皿盖阻隔了大部分NUV光线的透过。 　　③当三种不同光质透过塑料培养皿盖后,DL+NUV诱发的孢子效能最佳,产孢量最大,DL和NUV次之。NUV比DL诱发产孢的时间短,DL+NUV能使产孢量迅速达到较高的水平。 2.2　诱发产孢方法对A. soloni产孢形态的影响　　将各种处理后产生的分生孢子形态与自然寄主上的分生孢子形态进行比较,发现： 　　①PCA上产生的分生孢子在孢子近基部显著变宽,分隔处有较深的缢缩,纵格增多,个别孢子表面具刺突;喙的分隔增多,其中一些喙在分隔处缢缩,分隔间的喙细胞上部或中部或下部膨大;分生孢子梗无明显的变化。这种方法显然不适合分类培养。 　　②DL处理下,分生孢子中部略宽,喙分隔较多,其它变化不显著。 　　③NUV处理下,喙的纵格数减少,喙分隔较多,其它变化不显著。 　　④创伤法处理下,孢子分隔处缢缩较深,一些孢子近喙基部的细胞显著膨大,其它性状变化不明显。 　　⑤DL+NUV处理下,在孢子中部分隔间的细胞上,纵、斜隔明显增多,其它性状变化不明显。 2.3　聚类分析表明　　刺伤法诱发的孢子形态最接近自然寄主上分生孢子的形态,其次是NUV+DL,最差的是DL光照处理。由于喙的分枝率在不同条件是不稳定的,除去喙分枝率的性状,用同样方法聚类,结果表明：NUV+DL光照直接或透过塑料皿盖照射处理,诱发的分生孢子形态最接近自然寄主上者,其次是伤刺法。 　　NUV和DL光照都使喙的分枝数比例增加,这种现象还未见有报道。其中,DL光照使A. soloni个别孢子喙的喙具有3个分枝现象（在自然条件下仅发现二叉式分枝喙）。Simmons提出PCA,Hay和V8培养基,8 h日光照射作为Alternaria的标准培养条件,同时,在研究A. passiflorae 时,发现该种在培养中（日光灯）,喙出现多分枝现象,他把这看作是该种的特有性状,而笔者根据对A. soloni的研究认为,多分枝现象也可能是由光质造成的。