高灵敏电流型免疫传感器对流行性乙脑疫苗的测定

利用电沉积和多层组装技术, 将流行性乙脑疫苗抗体固定在多层聚邻苯二胺/纳米金及普鲁士蓝修饰的铂电极表面, 再用辣根过氧化物酶(HRP)代替牛血清白蛋白(BSA)封闭电极上的非特异性吸附位点, 并同时起到放大电流信号的作用, 从而制得高灵敏、高稳定电流型用于检测流行性乙脑疫苗的免疫传感器. 该传感器对乙脑疫苗检测的线性范围为6.1×10-9～8.6×10-7 lgpfu/mL. 实验结果表明, 该方法提高了抗体的固定量, 增强了传感器的灵敏度和稳定性, 且该传感器响应迅速、选择性好, 血清中常见抗原不干扰测定.     

猪流行性乙脑的发生和防治探讨

猪流行性乙型脑炎又叫做日本乙型脑炎,简称是乙脑,这是一种通过病毒所引发的人兽共患的急性传播疾病,它的主要传播方式是通过蚊虫类等吸血昆虫的叮咬。一般来说,怀孕母猪感染到这种疾病就会表现出流产、死胎以及木乃伊胎等情况,而公猪一旦感染就会诱发睾丸炎症,育肥的猪会出现持续高热的情况,猪仔则时长表现出脑炎等症状。所以,猪流行乙脑的会对猪造成很高的致死率,产生严重的影响。基于此,针对猪流行性乙脑的发生和防治方面的相关问题展开简要的分析,希望所得的结果可以引起大家的关注和重视,也希望这篇文字能够为相关的领域提供一个有价值的参考。     

电位控制血红蛋白(Hb)组装制备无媒介体过氧化氢生物传感器

通过电位控制的方法将血红蛋白Hb固定在由L 半胱氨酸自组装修饰的金电极上制得过氧化氢传感器Hb/L cys/Au,并通过电化学方法（CV）、原子力显微镜（AFM）等手段对电极的修饰过程进行了表征。试验显示,该传感器对H2O2催化还原性能优良、灵敏度高、稳定性好且非常易于制做。电极在（pH值5.5）0.1 mol/L PBS中对H2O2催化还原响应良好,线性可分为2段,低浓度段为8.21×10^－8～4.83×10^－6mol/L,高浓度段为4.83×10^－6～8.22×10^－3 mol/L,检测限为8.24×10^－9mol/L。     

基于普鲁士蓝和明胶修饰的过氧化氢生物传感器

以铂电极为基底,用恒电位沉积一层普鲁士蓝（PB）,然后用纳米金和明胶构成的复合固酶基质,结合溶胶-凝胶技术将辣根过氧化物酶（HRP）固定在普鲁士蓝修饰的电极表面,再用戊二醛（GA）对复合酶膜进行交联改性,从而制备了性能良好的过氧化氢传感器,采用循环伏安法（CV）、计时电流法、交流阻抗法（EIS）对传感器进行了电化学表征。在pH=6.0的磷酸盐缓冲溶液（PBS）中,探讨了工作电位、pH、温度以及干扰物质对传感器响应电流的影响。实验结果表明,此方法有较高灵敏度、较好抗干扰能力、良好稳定性及重现性。传感器对H2O2的线性响应范围为1．2×10^-6～1．3×10^-3mol／L,检测限为6．0×10^-7mol／L。     

免疫辣根过氧化物酶染色法诊断猪弓形虫病的研究

根据病猪临床表现以及病猪组织切片的常规苏木素-伊红(HE)染色和免疫辣根过氧化物酶染色对病猪作出初步诊断;采集病猪的各脏器组织,研磨后接种ICR鼠,分离鉴定病原,探讨免疫辣根过氧化物酶染色法快速诊断猪弓形虫病的可行性。结果表明:常规HE染色法和免疫辣根过氧化物酶染色法都能发现弓形虫的假包囊或速殖子。但是,HE染色切片仅能在个别视野中发现弓形虫,而免疫辣根过氧化物酶染色法可在许多器官切片的多个视野中观察到更多的被染成棕黄色的弓形虫速殖子和假包囊,证明免疫辣根过氧化物酶染色法是诊断猪弓形虫病的有效方法。     

中药复方调节猪流行性腹泻免疫效果研究

为了确定中药复方对接种猪流行性腹泻疫苗的免疫调节作用,试验通过对免疫猪只投服复方中药,观察猪只的发病情况和抗体生成水平,评估中药对疫苗的免疫效果。结果表明试验组猪流行性腹泻平均抗体效价明显高于对照组(P0.05);添加复方的免疫组的平均抗体水平显著高于单纯免疫组和空白对照组(P0.05),但添加复方两组之间差异不显著。说明自拟中草药组方对猪流行性腹泻免疫有显著的增强效果。     

检测牛奶中结合珠蛋白的电流型免疫传感器的研制

为构建可定量检测牛奶中结合珠蛋白(Hp)含量的电流型免疫传感器,以三电极系统中的金电极为工作电极,采用层层自组装技术将L-半胱氨酸、纳米金颗粒和抗牛Hp抗体依次组装在工作电极上,制成免疫传感器。制成的免疫传感器对Hp的线性检测范围为15～100 mg.L-1,最低检测限为0.63 mg.L-1,并具有较好的重现性和稳定性。分别采用该传感器和ELISA检测试剂盒对隐性乳房炎患牛乳样中的Hp含量进行检测的结果表明,两种检测结果间无显著差异(P>0.05)。结论:制备的免疫传感器可定量检测牛奶中的结合珠蛋白(Hp)。     

基于普鲁士蓝和明胶修饰的过氧化氢生物传感器

以铂电极为基底,用恒电位沉积一层普鲁士蓝(PB),然后用纳米金和明胶构成的复合固酶基质,结合溶胶-凝胶技术将辣根过氧化物酶(HRP)固定在普鲁士蓝修饰的电极表面,再用戊二醛(GA)对复合酶膜进行交联改性,从而制备了性能良好的过氧化氢传感器.采用循环伏安法(CV)、计时电流法、交流阻抗法(EIS)对传感器进行了电化学表征.在pH=6.0的磷酸盐缓冲溶液(PBS)中,探讨了工作电位、pH、温度以及干扰物质对传感器响应电流的影响.实验结果表明,此方法有较高灵敏度、较好抗干扰能力、良好稳定性及重现性.传感器对H2O2的线性响应范围为1.2×10-6～1.3×10-8 mol/L,检测限为6.0×10-7 mol/L.     

小剂量动物疫苗不同免疫剂量对免疫效果的影响

为探究不同免疫剂量的小剂量动物疫苗对免疫效果的影响,该试验选用180只3月龄绵羊,随机分为5组,每组36只,试验Ⅰ-Ⅴ组试验羊免疫剂量分别为正常剂量的1、 2、 3、 4和5倍,在相同饲养条件下按照正常免疫程序进行基础免疫后,分别用1、 2、 3、 4和5倍量的剂量接种口蹄疫疫苗,并定期测定各组试验羊的血清抗体效价和合格率。结果表明,使用不同剂量口蹄疫疫苗对试验羊进行免疫后,试验Ⅳ和Ⅴ组中血清中抗体效价显著高于前三组（P<0.05）,且试验Ⅴ组中免疫后14d时达到最高值5.22,试验羊免疫抗体合格率在第7天升至最高,其中试验Ⅴ组达97.22%,比同一时间段试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别高了83.34%、 77.78%、 55.56%和8.34%。因此,4或5倍量的口蹄疫疫苗接种拟为推荐接种剂量,而且延长了疫苗的有效保护期。     

牛AsiaI 型口蹄疫克隆纯化疫苗的免疫效果检验

对牛AsiaI口蹄疫克隆纯化疫苗的物理性状和无菌进行检验;采用豚鼠和小白鼠进行安全检验;并应用该疫苗在黄牛体内进行免疫效力检测.结果表明,应用克隆毒株研制的油乳剂灭活疫苗为乳白色,稳定、稀薄、无菌、安全而且在免疫效力方面克隆口蹄疫AsiaI_AKTO3毒株疫苗的PD50比普通疫苗提高2.4倍.     

猪瘟病毒与猪流行性乙型脑炎病毒复合RT-PCR检测方法的建立

猪瘟病毒(CSFV)和流行性乙型脑炎病毒(JEV)是引起种猪繁殖障碍的病原,而且经常混合感染,及时准确诊断是防治的前提.根据CSFV的E2基因保守序列和JEV的E基因保守序列,选取 2 对引物建立检测CSFV、JEV的复合RT-PCR方法,分别扩增出了大小为 508 和1 015 bp 特异性基因片段.应用此方法检测了10份临床样品(淋巴结、脾、肝、肺等组织),结果4份CSFV阳性,3份JEV阳性,其余为阴性.结果表明此CSFV 和 JEV 复合RT-PCR 诊断方法,具有很好的特异性和敏感性,可用于临床检测.     

基于纳米材料电化学免疫传感器检测禽呼肠孤病毒研究

【目的】构建一种用于检测禽呼肠孤病毒(ARV)的新型电化学免疫传感器。【方法】将石墨烯(G)和甲壳胺(Chi)分散在乙酸溶液中得到均匀的混合物后,加入HAuCl4溶液于80℃还原成金纳米粒子（AuNPs）,得到石墨烯-甲壳胺-金纳米粒子(G-Chi-AuNPs)纳米复合物。将石墨烯(G)和甲壳胺(Chi)分散在乙酸溶液中得到均匀的混合物后,先加入AgNO3溶液于80℃还原成银纳米粒子（AgNPs）,再加入禽呼肠孤病毒单克隆抗体(ARV-MAb),得到石墨烯-甲壳胺-银纳米粒子-禽呼肠孤病毒单克隆抗体（G-Chi-AgNPs-ARV-MAb）纳米复合物。将G-Chi- AuNPs纳米复合物修饰金电极作为传感器平台,固定待检测样品,然后加入G-Chi-AgNPs-ARV-MAb纳米复合物,并对G-Chi-AgNPs-ARV-MAb纳米复合物的孵育时间进行优化,构建了ARV电化学免疫传感器。使用构建的ARV电化学免疫传感器,对禽流感（H5N1、H3N6和H9N2亚型）、新城疫病毒（NDV）、喉气管炎病毒（LTV）、传染性支气管炎病毒（IBV）和传染性法氏囊病毒(IBDV)进行检测,以确定ARV电化学免疫传感器的特异性。使用构建的ARV电化学免疫传感器,对106.5-100.5 TCID50/mL的病毒进行检测,以确定ARV电化学免疫传感器的敏感性试验。使用构建的ARV电化学免疫传感器,对临床样品进行检测,其确定ARV电化学免疫传感器的实用性。【结果】所建立的ARV电化学免疫传感器,G-Chi-AgNPs-ARV-MAb纳米复合物的最佳孵育时间为40 min。当检测的样品为阳性时,ARV与ARV-MAb特异结合,G-Chi-AgNPs-ARV-MAb纳米复合物被固定到电极的表面使其线性伏安曲线出现AgNPs的氧化峰;当检测样品为阴性时,其线性伏安曲线不出现AgNPs的氧化峰。特异性结果表明,所建立的方法仅对ARV的检测为阳性（出现AgNPs的氧化峰）,而对非目标禽流感（H5N1、H3N6和H9N2亚型）、NDV、LTV、IBV和 IBDV的检测为阴性（不出现AgNPs的氧化峰）。敏感性结果表明,所构建的ARV电化学免疫传感器,具有很高的敏感性,对ARV检测的敏感性达101.5 TCID50/mL。使用建立的ARV电化学免疫传感器对22份临床样品进行检测,结果与病毒分离方法相符。【结论】所建立的ARV电化学免疫传感器,具有特异性强、敏感度高及快速的特点,为有效检测诊断禽呼肠孤病毒提供了一种新的快速检测诊断技术。     

复合RT-PCR检测猪乙脑病毒和猪流感病毒方法的建立

根据GenBank上已发表的猪乙脑病毒(JEV)的E基因序列和猪流感病毒(SIV)的NP基因序列,设计合成了2对特异引物,分别建立了JEV和SIV的单项RT-PCR诊断方法,通过对扩增条件的筛选,最终成功地建立了JEV和SIV的复合RT-PCR诊断方法,利用一次RT-PCR反应,即可同时扩增JEV的349 bp和SIV 155 bp的特异性片段,而猪瘟病毒(HCV)、猪蓝耳病病毒(PRRSV)、正常细胞(PK-15)核酸扩增结果为阴性,对JEV和SIV的最低检出量分别为100和10 pg的cDNA. 该方法适合对JEV和SIV的联合检测和鉴别诊断.     

蛋白质凝胶电泳的高灵敏度染色法——复合银染

本实验以牛血清白蛋白为样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,然后用考马斯亮兰Ｒ－２５０和银染法分步染色。这种复合银染法的灵敏度比单独使用银染法提高约１０００倍,比单独使用考马斯亮兰Ｒ－２５０染色法提高约１０６倍。它在１ｍｍ厚的聚丙烯酰胺凝胶上至少可检测出５ｐｇ／ｍｍ２的蛋白质。在没有放射性防护设施的任何一个生物实验室中,采用复合银染法基本上能够达到或接近放射性标记检测的灵敏度。相比之下,它不仅省去了繁琐的各式各样的标记过程及其放射性污染,同时还具有很高的灵敏度,因此复合银染具有广泛的应用性。     

快速检测水中多氯联苯含量的电化学免疫传感器设计

检测水中多氯联苯含量传感器由电化学三电极、信号采集及转换电路、单片机和显示单元组成。采用示差脉冲法,在单片机的控制下,为三电极提供-0.3~0.6 V连续变化电压信号,驱动三电极系统中待测液发生氧化/还原反应。该系统实现了对多氯联苯含量的快速检测。     

猪流行性乙型脑炎RT-LAMP方法的建立与初步应用

[目的]建立1种快速、灵敏、特异的检测猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。[方法]根据JEV E基因序列的保守区6个位点设计了4条特异性LAMP引物,以JEV阳性样品RNA为模板进行一步法扩增,并对反应条件和反应体系进行了优化。[结果]该方法具有较高的灵敏度,其检测极限为0.5 pg;特异性试验表明其具有较高的特异性,对其他病毒性病原体均无扩增反应。与RT-Nested-PCR相比,2种方法检出率的符合率为90.9%。反应结束后可以通过添加化学发光剂进行可视化观察,大大缩短了检测时间。该方法无需特殊仪器,只需在水浴锅中进行,是一种适于基层的简便、灵敏、快速的猪JE的检测方法。[结论]成功建立了猪流行性乙型脑炎RT-LAMP方法,并在临床上进行了初步应用。     

检测H9亚型AIV的压电免疫传感器研究(英文)

[目的]研制检测H9亚型禽流感病毒的压电免疫传感器。[方法]用巯基丙酸在镀银电极石英晶体自组装巯基丙酸单分子膜再通过N-乙基-N'-(3-二甲氨基)丙基碳化二亚胺盐酸(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)偶联抗H9亚型禽流感病毒的特异性单抗构建传感器芯片,建立可以检测H9N2亚型禽流感病毒的免疫传感器。[结果]该方法具有较好的特异性,不与H5亚型流感病毒和新城疫病毒(NDV)反应,检测灵敏度达到20～100个EID50。[结论]该结果为检测禽流感病毒免疫传感器的进一步深入研究奠定了基础,这为其他相关病毒的监测提供了一种新途径。     

检测H9亚型AIV的压电免疫传感器的研究

[目的]研制检测H9亚型禽流感病毒的压电免疫传感器。[方法]用巯基丙酸在镀银电极石英晶体自组装巯基丙酸单分子膜再通过N-乙基-N-′（3-二甲氨基）丙基碳化二亚胺盐酸（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）偶联抗H9亚型禽流感病毒的特异性单抗构建传感器芯片,建立可以检测H9N2亚型禽流感病毒的免疫传感器。[结果]该方法具有较好的特异性,不与H5亚型流感病毒和新城疫病毒（NDV）反应;检测灵敏度达到20~100EID50。[结论]该研究为深入研究检测禽流感病毒的免疫传感器奠定了基础,为其他相关病毒的监测提供了一种新途径。