垂直平板PAGE检测牛血清碱性磷酸酶同工酶方法的改进

在参考有关资料基础上,对用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测牛血清碱性磷酸酶同工酶过程中凝胶配制、加样量及染色反应等条件进行了改进,探索出一套适用于牛及其它物种血清碱性磷酸酶同工酶分析的方法。     

牛4-细胞期胚胎mRNA的RT-PCR检测

凝胶银染法快速检测RT-PCR产物,有利于研究附植前胚胎的基因.选择体外培养的牛单个附植前胚胎,以锚定引物和随机引物RT-PCR扩增,用不同浓度聚丙烯酰胺凝胶在不同电压条件下电泳,2 g/L硝酸银染色,可以直接观察到大小不同的电泳条带,扩增的片段大多数在500 bp以下.研究表明,60g/L聚丙烯酰胺凝胶90 V电压电泳,电泳条带之间具有适当的距离,有利于差异条带分离和回收,是一种分离和检测DNA的有效方法.     

DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染方法的探讨

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是聚合酶链反应、单链构象多态(PCR-SSCP)分析中不可缺少的技术,多用于单链DNA碱基移位、插入或缺失等基因变异情况的筛查,还可以广泛用于遗传育种、基因定位、种子活力测定等方面。银染方法的建立,始于1979年对蛋白质的染色,以后逐渐应用于核酸。对蛋白质与核酸的检测灵敏度可达到纳克水平,促进了生物大分子结构与功能的研究。电泳完毕后,首先用固定剂将核酸或蛋白固定到凝胶上,然后使银染剂中的银离子与之牢固结合,再通过还原剂将银离子还原,从而发生银棕色显色反应。1材料和方法1.1材料垂直板电泳系统,PC…     

聚合酶链反应原理与操作(下)

5 扩增产物的测定和寡核苷酸探针扩增的 DNA 或在电泳过程后用溴化乙锭染色直接检出或与特异 DNA 探针杂交来检出。凝胶分析和两个杂交方法的优缺点列于表1中。直接凝胶电泳检出法简单,将扩增的 DNA 产物直接上样于琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶上,通过电泳分离,样品 DNA 可与已知大小的溴化乙锭染色后可见的 DNA 比较。但此法的不足之处:一是不敏感,许多阳性样品虽然可能有被扩增的 DNA 产物,但其量不足以用来直接显现;二是缺乏序列特异性,非特异的 DNA 也能被扩增,而且它们的泳动率和特异的扩增产物相似,因此,凝胶     

微卫星PCR产物PAGE与银染改良方法

对湘西黄牛的2个微卫星座位IDVGA44、IDVGA27 PCR,进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染。结果表明,在凝胶制备时,采用3%和8%两层凝胶结合的方法,能使电泳条带更加清晰,容易判读。按本文的方法配置试剂和染色,条带清晰,背景着色浅,染色效果理想。     

PAGE凝胶电泳银染方法的改进

为改良DNA聚丙烯凝胶电泳（PAGE）银染方法,采用PCR方法扩增鸡基因组微卫星DNA序列后,经PAGE分离扩增产物和pBR322 DNA/BsuRI标准分子质量,利用2种银染法对微卫星位点进行检测,分析其灵敏度和可行性。结果表明,2种方法都能染出Marker的所有条带,灵敏度均为25 ng,但在染色所需时间和可操作性方面,改进的染色方法优于Sanguinetti等所建立的方法。改进的银染方法染色过程较快,仅需25 min左右,且染色液和显影液可回收利用。该方法能显著提高检测分辨率,在实际应用中提高了染色效率。     

滨白鸡血清碱性磷酸酶AKP—2,AKP,AKP—0同工酶的初步研究

本文利用常规的聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE),对滨白鸡血清碱性磷酸酶(PAKP)同工酶进行分离.试验结果表明:(1)PAKP同工酶分离出三个区域,其中AKP区表现F和S两种变异型,对于AKP-2和AKP-0(暂命名)区新发现的变异,有待进一步研究证实.(2)本文调整和改进的PAGE电泳系统和染色方法,具有电泳效率高、分辩率高、染色效果好、节约成本等优点.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳快速鉴定牛乳蛋白质的研究

试验利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对牛乳进行快速质量检测研究,通过对样品稀释倍数、电压条件、染色时间、漂洗时间及次数等条件进行摸索,获得了条带清晰的牛乳蛋白电泳图谱.结果表明,快速聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定牛乳蛋白质的最佳条件是,用8%分离胶在120V电压下电泳.使用超级灵敏度蛋白质电泳快速染液染色,煮沸染色1 min,振荡10min,可实现快速鉴定牛乳蛋白的目的.     

2种检测阿勒泰羊Fec~B基因酶切产物方法的比较

为了比较3%琼脂糖凝胶和12%非变性聚丙烯酰胺凝胶的溴化乙锭(EB)染色法检测阿勒泰羊FecB基因酶切产物的准确性,试验采用通用引物对阿勒泰羊的FecB基因序列进行PCR扩增,通过限制性内切酶AvaⅡ对扩增产物进行酶切消化,用EB染色的琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶检测相同条件下酶切的FecB基因产物,通过紫外凝胶成像仪(型号为Gel Doc 2000)进行比较,分析结果。结果表明:EB染色的12%非变性聚丙烯酰胺凝胶所得的酶切结果明显优于3%琼脂糖凝胶所得的酶切结果,因此可采用EB染色的12%非变性聚丙烯酰胺凝胶检测FecB基因。     

PCR法筛选大黄鱼微卫星DNA

构建大黄鱼部分基因组DNA文库。以M13通用引物和根据微卫星核心序列所设计的引物，用PER法直接对文库进行扩增，获得15个PER阳性克隆，对阳性克隆测序。测序结果说明，6个阳性克隆中含有微卫星核心序列，用Primer3引物设计软件对侧翼序列进行微卫星引物设计。用6对引物扩增大黄鱼基因组，PER结果经6％聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，其中2对引物能得到稳定的扩增。     

鸡蛋黄碱性磷酸酶的提纯和性质

用乙醚抽提、硫酸铵沉淀,凝胶过滤、亲和层析等方法从鸡蛋黄中提取碱性磷酸酶,提纯倍数为470倍。用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测得该酶的等电点为3.85和4.35;用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得该酶的分子量为148000和70500;该酶对热不稳定;聚丙烯酰胺凝胶电泳出现二条带,证明该酶可能存在两种同工酶。     

用SDS-PAGE电泳测定豆粕酶解物中的低分子多肽分子量

通过改进一般SDS PAGE电泳 (十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 ) ,用Tricine (三羟甲基氨基甘氨酸 )代替甘氨酸作为尾随离子 ,在分离胶中加 8mol/L尿素 ,水浴加热染色、脱色 ,用 2层胶就可以测定豆粕酶解物中低分子多肽的分子量 ,结果较理想     

旋毛虫肌幼虫可溶性抗原,排汇分泌抗原的电泳分析

枉文报道了应用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦（ＩＥＦ）电泳及二维电泳（ＩＥＦ／ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对旋毛虫肌幼虫排汇分泌（ＥＳ）抗原和肌幼虫可溶性抗原的分析结果。肌幼虫ＥＳ抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后用考马斯亮蓝染色蛋白质，结果显示１６条蛋白带，分子量范围２１￣８０ＫＤ，其中主带９条。ＩＥＦ电泳后分别用ＰＡＳ染多糖、考马斯亮蓝Ｒ－２５０染蛋白质、Ｎｉｌｅ＇     

囊尾蚴病猪血清抗体的制备及其相对分子量的测定

用盐析法初步分离囊尾蚴病猪血清中的抗体,用离子交换柱色谱,凝胶过滤层析进一步分级分离纯化,并用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析抗体的组成。应用１０％连续凝胶系统,圆盘电泳,考马斯亮蓝染色测定相对分子量。     

仔猪轮状病毒核酸的检测

用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检查了二个猪场的42份仔猪腹泻粪样。轮状病毒(RV)核酸(RNA)检出率分别为11.1%(3/27)和33.3%(5/15)。通过PAGE 法,检出了5株 A 组 RV 和5株 C 组 RV,证实了 A组 RV 和 C 组 RV 可同时感染某一猪场和混合感染同一只猪。     

微卫星PAGE银染法及其干胶的简易制备

为了使微卫星PCR扩增的DNA片段能得到较好的分离和长期保存实验胶片 ,研究利用 1 5对猪的微卫星引物 ,经PCR扩增 ,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,银染法显色 ,然后制成了干胶。结果表明 ,聚丙烯酰胺凝胶具有很好的分离微小差异DNA片段的能力 ,而且银染后制成的干胶可长期保存。此法尤其适用于不具备凝胶成像系统和干胶机的实验室使用。     

对虾中酚酶特性电泳分析方法浅析

提纯对虾中的多酚氧化酶（PPO），除采用常规的化学方法外，还可运用电泳分析技术。国外报道的有Chen等采用浓度（T）为５％的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进一步纯化地区龙虾和西部澳大利亚龙虾中的PPO，并采用厚度为１．５mm的T为７．５％的分离胶和丙烯酰胺浓度为４％的浓缩胶对上述PPO的同功酶之分子量进行测定。目前国内尚未见有这方面的报道。本文研究了用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分析日本对虾中PPO同功酶和分子量时，分离胶和浓缩胶工作溶液的配制及蛋白质银染色法。１材料和方法１．１材料来源活对虾购自当地市场，取其头部…     

聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定禽呼肠孤病毒

从感染禽呼肠孤病毒的细胞中,以SDS和酚提取病毒核酸,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法将分节段的核酸分开,经银染色显示,呈3-3-1-3分布,此法可用于禽呼肠孤病毒的快速检测、鉴定。同样方法未能使传染性法氏囊病毒核酸显示。     

猪乳中蛋白质多态性

采用垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和等电聚焦法(IEF)分析不同品种383头(德系长白287头、德国Edelschwein37头和Pietrain32头)母猪的乳样。电泳后的图谱用柱层析(G-100,CM-50)进一步识別,并且用免疫学和生化方法进一步研究其各组分的特性。     

Masson-Fontana银染色法改良研究

为简化常规Masson-Fontana染色法显示嗜银细胞的染色流程、缩短染色时间,并获得良好染色效果,通过研究对改变影响染色效果最为关键的氨银溶液浓度、浸染温度和时间等因素对该方法进行了改进,经过反复实验,探索出在60℃水浴中用2.5%氨银溶液浸染石蜡切片1 h能得到较好的染色效果,嗜银细胞着色深浅适宜,背景较浅,嗜银颗粒清晰可辨,细胞核明显。说明改良后的Masson-Fontana银染法更为便捷,可以用于嗜银细胞的染色。