天津地区部分猪源大肠杆菌的OMP型

从天津各区主要养猪场分离的16株（7种血清型O20，O21，O139，O141，O93，O108，O147）大肠杆菌中提取外膜蛋白（OMP），经SDS－PAGE分析表明，5株O21菌株有2个OMP型（OMP－1和OMP－3型），3株130菌株和3株O20菌株各出现2个OMP型（OMP－1和OMP－2型），2株O141菌株共出现2个OMP型（OMP－2和OMP－3）。1株O93菌株，1株O108菌株和1株O147菌株均为OMP－1型，结果表明，相同血清型的菌株可以有不同的OMP型，不同血清型的菌株可以有相同的OMP型。     

陕西省部分禽源性大肠杆菌的外膜蛋白型

从陕西省部分优势血清型的禽源性大肠杆菌中提取外膜蛋白 (outer membrane protein,OMP) ,用 SDS- PAGE进行 OMP分型。 18株菌共产生了 3种 OMP型 ,其中 4株 O1菌株 ,4株 O2菌株 ,4株 O78菌株和 3株 O89菌株各属2个 OMP型 (OMP- 1,2型 ) ;3株 O75菌株属 3个 OMP型 (OMP- 1,2 ,3型 )。结果表明 ,陕西省分离的优势血清型禽源大肠杆菌具有多样性的 OMP型 ,且多种血清型间具有共同的 OMP型。     

鸡源大肠杆菌OMP和OmpT基因与血清型相关性

为了解禽致病性大肠杆菌分离株OMP、OmpT基因与血清型相关性,对6种血清型(O78、O38、O9、O91、O11、O157)的7株鸡源大肠杆菌菌株进行了外膜蛋白(OMP)和外膜蛋白酶T(OmpT)基因的研究.用N-十二烷酰肌氨酸法提取其外膜蛋白,经SDS-PAGE电泳后考马斯亮蓝染色,对鸡源大肠杆菌菌株进行了外膜蛋白分型;用PCR和生物信息学的方法对OmpT基因进行检测与分析.7株大肠杆菌共有3个OMP型,其中,分离株5,32,9主要由相对分子质量接近的2条带组成,为OMP-1型;分离株11主要由相对分子质量接近的3条带组成,为OMP-2型;分离株14,7主要由相对分子质量接近的1条带组成,为OMP-3型.这表明同一血清型的菌株可能属于不同的OMP型,而血清型不同的分离株之间却可具有相同的OMP型.PCR检测结果显示7株鸡源大肠杆菌均携带OmpT基因,与GenBank登录的序列比较发现其同源性为91.9％～100.0％,不同血清型菌株间的同源性为91.9％～98.0％.该试验证实了同一血清型分离株之间可发生遗传分化,而不同血清型分离株之间也可具有不同程度的遗传相关性;不同血清型分离株间的OmpT基因的同源性存在一定的差异.     

禽病原性大肠杆菌6种血清型分离株外膜蛋白型的研究

从病鸡中分离的６ 种血清型（ Ｏ２、 Ｏ４６、 Ｏ１８、 Ｏ１２１、 Ｏ７６、 Ｏ１３１）及５ 种标准血清型（ Ｏ１、 Ｏ１５、 Ｏ３５、 Ｏ３６、 Ｏ７８）大肠杆菌中提取外膜蛋白（ Ｏｕｔｅｒ ｍ ｅｍ ｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）,经 Ｓ Ｄ Ｓ－ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 分析表明,分离株 Ｏ７６、 Ｏ１３１及标准株 Ｏ１、 Ｏ３５的外膜蛋白型由２ 条带组成,为 Ｏ Ｍ Ｐ－ １ 型;分离株 Ｏ２、 Ｏ４６、 Ｏ１８、 Ｏ１２１和标准株 Ｏ１５、 Ｏ３６、 Ｏ７８的外膜蛋白型由３ 条带组成,为 Ｏ Ｍ Ｐ－ ２ 型,结果表明,不同血清型菌株之间有相同的 Ｏ Ｍ Ｐ型。     

对FC株猪源性肠毒素型大肠杆菌致病因子的研究

FC菌株是一株从腹泻仔猪粪便中分离的肠毒素型大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)。在MRHA反应中,本菌能凝集人O型、豚鼠、马、绵羊、牛、鸡和兔的红细胞,对人O型和豚鼠红细胞有很高的血凝性,血抗K88和K99血清不能抑制其对豚鼠和绵羊红细胞的血凝。在体外小肠上皮细胞吸附试验中,本菌对仔猪小肠上皮细胞具有强烈的吸附作用;透射电镜和扫描电镜观察证实了FC株菌除表面具有一种纤毛样结构外,还能定居在仔猪小肠段。血清学试验结果表明,本菌的O抗原属于O101。K88和987P两种抗血清均不能凝集本菌,而K99和F41抗血清均可凝集。对纯化的FC株菌粘着素抗原作等电聚焦和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,结果表明,该菌的粘着素是由等电点分别为4.61和9.78,分子量分别为29500和17500的两种蛋白质抗原所组成。此外,用乳鼠胃内投服试验和兔肠结扎试验证明,该菌只产生热稳定肠毒素。总之,本菌是一株能产生ST的K99,F41的肠毒素型大肠杆菌。     

天津地区鸡致病性大肠杆菌血清型分布及其优势血清型的外膜蛋白型研究

从天津地区各区县养鸡场分离 ,鉴定出 45株鸡致病性大肠杆菌。对 45株致病性大肠杆菌进行血清型鉴定 ,共定型出 3 1株 ,分属 1 4个血清型 ,其中 O78、O88、O2 、O4 5、O53、O14 5为优势血清型 ,占定型菌株的 58.3 %。提取 O78、O88、O2 、O4 5、O53和O14 56个血清型 1 8个分离株的外膜蛋白 ( Outermembrane protein,OMP) ,测定外膜蛋白型 ( Outmembrane protein patterns,OMPS) ,SDS-PAGE分析表明这些分离株共产生了 3个 OMP型 ( 1～ 3型 )。 OMP-1型为 O78、O88、O2 、O53、O14 55个血清型分离株所共有 ,OMP-2型为 O78、O4 5、O14 53个血清型分离株所共有。这表明同一血清的菌株可能属于完全不同的 OMP型 ,而血清型不同的菌株也可能为同一 OMP型。     

广东省猪大肠杆菌优势血清型O107外膜蛋白的提取

实验室从广东省鉴定的猪大肠杆菌优势血清型O₁₀₇中,选出一株有致病性菌株。通过细菌培养、超声波裂解、N—十二烷基肌氨酸钠处理和超速离心技术提取出大肠杆菌O₁₀₇的外膜蛋白。提取物经SDS—PAGE电泳检测后发现蛋白条带大小与预期的实验结果相同。     

兔源高致病性大肠杆菌外膜蛋白型的差异性分析

从山东某地区大、中型兔场连续三年（2002-2004年）分离、鉴定的43株高致病性大肠杆菌体内提取外膜蛋白（OMP）,测定其外膜蛋白型（OMPs）,通过SDS-PAGE分析,比较不同年份间高致病性大肠杆菌分离株的外膜蛋白型。结果表明：三年共产生了三种OMP型（A-C）。且在同年份内具有多样性,不同年份之间具有差异性。     

兔源高致病性大肠杆菌外膜蛋白型的差异性分析

从山东某地区大、中型兔场连续三年(2002-2004年)分离、鉴定的43株高致病性 大肠杆菌体内提取外膜蛋白(OMP),测定其外膜蛋白型(OMPs),通过SDS-PAGE分析,比 较不同年份间高致病性大肠杆菌分离株的外膜蛋白型。结果表明:三年共产生了三种OMP型 (A-C)。且在同年份内具有多样性,不同年份之间具有差异性。     

广东地区5种优势血清型猪大肠杆菌的外膜蛋白型研究

对从广东地区部分猪场分离的大肠杆菌进行血清型鉴定后,选取优势血清型O₉、O₂₆、O₆₀、O₁₀₁和O₁₀₇的8个致病性较强的分离株,采用超声波裂解、N-十二烷基肌氨酸钠处理和超速离心技术提取大肠杆菌的外膜蛋白（OMP）,利用SDS-PAGE电泳进行OMP分型。结果8个菌株共有3个OMP型（Ⅰ～Ⅲ型）,其中O₂₆、O₁₀₁、O₁₀₇型的3个分离株的外膜蛋白型由1条带组成,为OMP-Ⅰ型;O₆₀、O₁₀₁、O₁₀₇型的4个分离株的外膜蛋白型由2条带组成,为OMP-Ⅱ型;O₉型的1个分离株的外膜蛋白型由3条带组成,为OMP-Ⅲ型。这表明,优势血清型O₉、O₂₆、O₆₀、O₁₀₁、O₁₀₇的分离株OMP型不单一;同一血清型的分离株,存在不同OMP型;而不同血清型的分离株却可有相同的OMP型。     

肉鸡源致病性大肠杆菌外膜蛋白型的研究

对分离自陕西省的16株肉鸡源致病性大肠杆菌的外膜蛋白（outer membrane proteins,OMP)进行提取，采用SDS-PAGE法进行分型，结果发现有3种外膜蛋白型，其中2株O4、2株O35、2株89，1株O18、1株O78属OMPⅠ型，2株O35，1株O4，1株O18属OMPⅡ型；1株O2，1株O75，1株O78，1株O89属OMPⅢ型，表明肉鸡源E.coli同一血清型中有不同OMP型，而不同血清型间也有相同OMP型，其中有2株菌OMP型表达丰富。     

温度对嗜水气单胞菌外膜蛋白表达的影响

提取嗜水气单胞菌J-1、Y-1、F-155 株的外膜蛋白(OMP)作SDS-PAGE,结果显示,它们的电泳图谱属于同一模式,均含有22 000、31 000、38 000、43 000 和50 000 等5 条主要OMP带。温度影响嗜水气单胞菌OMP的表达,28℃培养时表达的OMP以43 000 者为最多;而37℃培养时表达最多的是38 000 的条带。J-1株37℃培养时对鲫鱼和小鼠的LD50分别为3.4×106、2.5×106 CFU;28℃时则为8.7×105、1.8×105 CFU,表明28℃培养时J-1 株毒力较强。随着OMP在载样缓冲液中煮沸时间的增加,主要蛋白带的浓度降低,相对分子质量小的蛋白带增多。免疫转印显示,这些蛋白带均能与J-1 株OMP多抗呈显色反应。抗原性分析表明,J-1 株OMP与HEC毒素之间无抗原性交叉。     

鸭致病性大肠杆菌外膜蛋白型研究

测定了从我国分离到的130株鸭病原性大肠杆菌外膜蛋白型（Outer membrane protein patterns,OMP型）,其中O93、O92、O78和O76优势血清型53株,O46等30个其他血清型分离株77株,这些分离株共产生了4个OMP型,其中OMP-1型81株,占62.3%（81/130）,覆盖O93、O92、O78和O76等29个血清型,占85.3%（29/34）,为主要的OMP型;根据GenBank中大肠杆菌K-12外膜蛋白A基因（ompA）的核苷酸序列设计引物,从9株优势血清型和1株O46血清型的鸭大肠杆菌中分别扩增得到ompA基因,进行序列测定及分析,发现优势血清型9个菌株的ompA均由1 171个碱基组成,均只有1个大的开放阅读框（ORF）,长1 053 bp,编码由350个氨基酸组成的前外膜蛋白A（pro-OmpA）,前21个氨基酸残基组成信号肽,成熟的OmpA由329个氨基酸残基组成;O46菌株的ORF全长1 041 bp,在400-411 bp位缺失了12个碱基,成熟的OmpA由325个氨基酸残基组成;10个鸭致病性E.coli的ompA基因核苷酸序列高度同源,相似性达95.8%~100%。     

猪致病性大肠埃希菌外膜蛋白亚单位疫苗免疫效果观察

用超声波破碎并采用N-十二烷基肌氨酸钠进行猪致病性大肠埃希菌外膜蛋白提取,提取物经SDS-PAGE电泳检测后制备成疫苗,以肌肉注射方式免疫SPF小鼠,于免疫前及免疫后每隔1周分别收集血清.以间接ELISA的方法检测血清中IgG抗体水平,同时用不同血清型大肠埃希菌菌株与免疫血清做玻板凝集试验和攻毒保护试验.结果表明,在免疫小鼠后的第28天左右机体内的抗体水平达到最高值,免疫血清能够与不同菌株发生凝集反应且不同菌株对小鼠的攻毒都具有免疫保护力,说明外膜蛋白不仅具有一定的免疫原性而且对不同菌株具有交叉免疫保护力,因此外膜蛋白亚单位疫苗作为一种新型疫苗可望适用于防控猪大肠杆菌病.     

坏死梭杆菌外膜蛋白基因的克隆与表达

依据GenBank中登录的坏死梭杆菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)基因序列,设计1对引物进行PCR扩增OMP片段并克隆至pET-28a中,构建原核表达重组质粒pET-28a-OMP。将pET-28a-OMP转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态中,表达含2个His的重组蛋白。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,该重组蛋白分子质量为93 ku,为包涵体表达,具有反应原性。本试验结果为坏死梭杆菌OMP免疫机制的研究提供了基础数据。     

松桃县猪大肠杆菌病调查报告

大肠杆菌是一种条件性病原菌,主要感染仔猪发病,由于猪的年龄和病原菌血清型的差异,分为仔猪黄痢、仔猪白痢和水肿病.