高海拔地区不同品种种公牛离体精子遭受低温打击和冷冻伤害研究

精子的耐冻性在牛品种之间、个体之间均存在差异。离体精子遭受低温打击和冷冻伤害后,畸形精子数会增加,精子顶体会受到损伤。本试验对高海拔地区的荷斯坦、西门塔尔和牦牛三个品种种公牛离体精子遭受低温打击和冷冻伤害后的品质变化情况进行了研究,结果显示,荷斯坦牛、牦牛精子畸形率显著增加(P0.05),三个品种种公牛离体精子的顶体受损情况无显著差异(P0.05),但牦牛离体精子遭受低温打击和冷冻伤害后,Ⅳ型(顶体脱落)精子比例显著大于荷斯坦、西门塔尔两个品种(P0.05)。     

德国牧羊犬冷冻精子超微结构的研究

运用电子显微镜技术观察了２头德国牧羊犬冷冻精子超微结构的变化，结果表明，冷冻的犬精子畸形率明显上升，表现出不同程度的质膜破损或脱落，精核膨胀，中段膨胀，顶体膨胀、部分脱落或全部脱落，螺旋线粒体膨胀、断裂、剥离和丢失。犬精子的原生质膜、顶体、线粒体在冷冻过程中最易受到损害，２头公犬冷冻精子的顶体完整率分别为３６．９％和２５．８％。     

内蒙古绒山羊精液冷冻过程中胆固醇、磷脂变化的研究

冷冻精液受胎率的高低易受多因素的影响,其中顶体异常率较高可能是因素之一。精子磷脂和胆固醇可能与稀释液中的磷脂和胆固醇发生部分交换而导致精子中的胆固醇降低,致使精子提前获能甚至部分发生顶体反应。系统地分析了山羊精液冷冻过程中每个处理磷脂、胆固醇含量的变化。     

抗氧化剂对马精子低温及冷冻保存效果的影响

试验旨在研究不同抗氧化剂对马精子低温保存及冷冻效果的影响。选取6匹英纯血种公马作为试验动物,以INRA82液作为基础稀释液（对照组）,分别添加谷氨酰胺（0.015 g/mL）、甘氨酸（0.019 g/mL）、半胱氨酸（0.024 g/mL）、甲硫氨酸（0.015 g/mL）、牛磺酸（0.063 g/mL）、维生素C（0.4 mg/mL）、维生素E（0.5 mg/mL）、褪黑素（0.001 mg/mL）制备成含有不同抗氧化剂的低温保存和冷冻保存稀释液,将浓缩处理后的马精子分别置于上述稀释液中保存或冷冻,检测低温保存48 h后精子运动参数,评价抗氧化剂对精子低温保存的影响;检测精子冻融后运动参数、精子质膜完整性、线粒体膜电势及顶体完整性,评价抗氧化剂对精子冷冻效果的影响。结果表明,精子低温保存48 h后,添加牛磺酸组活精子比例和前向运动精子比例显著高于对照组（P<0.05）,添加维生素C组前向运动精子比例显著高于对照组（P<0.05）。冷冻解冻后结果表明,添加不同抗氧化剂没有改善精子冻融后活精子比例和前向运动精子比例,但添加甲硫氨酸显著延长了精子体外存活能力（P<0.05）;添加不同抗氧化剂精子质膜完整性与对照组间无显著差异（P>0.05）,但甲硫氨酸和甘氨酸组有高于对照组的趋势;添加维生素E和甲硫氨酸组精子线粒体膜电势显著高于对照组（P<0.05）,不同抗氧化剂组精子顶体完整性与对照组间均无显著差异（P>0.05）。结果提示,低温保存时添加牛磺酸和维生素C可以提高精液低温保存效果;冷冻时添加甲硫氨酸能提高精子质膜完整性和线粒体膜电势,且能够延长精子冻融后的存活时间。     

肌醇类冰晶抑制剂和海藻糖对山羊精子冷冻保存效果的影响

为进一步降低冷冻解冻过程对山羊精子的理化损伤,本试验系统检验了肌醇类冰晶抑制剂(SIB)和海藻糖对山羊精子的冷冻保护效果。采用假阴道法采集6只云南黑山羊精液,离心洗涤去除精浆后和冷冻稀释液混合,经4℃平衡、液氮气相预冻后直接投入液氮保存。解冻后检测精子活力、顶体、质膜以及低渗耐受性。同时采用透射电镜(TEM)观察冷冻对精子超微结构的影响。结果表明:1,4-环己二醇(1,4-CHD)和海藻糖处理组精子活力(41.35%±8.14%和43.59%±6.23%)、顶体完整性(62.73%±7.62%和64.29%±7.81%)和低渗耐受性(40.29%±7.41%和39.79%±6.58%)均显著高于对照组(35.97%±6.21%、55.46%±8.91%和34.17%±5.68%,P0.05),且海藻糖可以有效抑制冷冻解冻过程导致的精子凋亡。流式分析结果表明,1,4-CHD不能降低冷冻对山羊精子质膜完整性和磷脂酰丝氨酸(PS)分布的损伤,但是海藻糖可以显著降低冷冻解冻过程中对山羊精子质膜的损伤。电镜结果表明,冷冻对精子质膜和顶体等结构损伤严重,解冻后部分精子质膜发生肿胀、脱落或断裂等现象。而且,顶体外膜存在脱落现象,顶体内容物发生部分甚至完全泄漏。电镜结果进一步证实海藻糖对冷冻精子质膜的保护效果要优于1,4-环己二醇。总之,肌醇类SIB和海藻糖可以降低山羊精子的冷冻损伤,但相对于海藻糖而言,肌醇类SIB并不能降低冷冻对山羊精子质膜的损伤。     

不同比例稀释液对精子冷冻前后死活百分率的影响

为研究生产中需要的最适合冷冻精液稀释液的添加比例,本试验观察了不同比例稀释液对精子冷冻前后死活百分率的影响;试验结果表明:冷冻前各试验组和对照组精子死活百分率差异不显著(P0.05);试验Ⅰ组和试验Ⅱ组冷冻后精子死活百分率显著地高于试验Ⅲ组、试验Ⅳ组和对照组(P0.05)。试验Ⅰ组与试验Ⅱ组两个比例的稀释液对精子冷冻保存的效果最好。     

β-环糊精胆固醇包合物对牛冷冻精子品质的影响

为了研究添加胆固醇与β-环糊精的包合物(CLC)对荷斯坦牛冷冻精子品质(AR)的影响,试验分不同剂量CLC组和对照组,分别测定牛冻精的精子活率、精子顶体反应(AR)并进行比较。结果:添加1.5 mg CLC冷冻后活率最高[(60.4±7.38)%,P<0.05];孵育时间对冷冻后精子活率影响显著(P<0.05),添加1.5 mg CLC孵育15 min精子活率显著高于对照组(P<0.05);精子在BO液孵育15,30,45和60 min的酸性磷酸酶(ACP)吸光度值,1.5 mg CLC组与对照组比较差异都极显著(P<0.01)。试验证实,CLC可提高牛冷冻精子的活率,可用于牛精子的冷冻保存。     

亚硒酸钠维生素E对牛冷冻精液品质的影响

本试验研究了亚硒酸钠维生素E对牛冷冻精液品质的影响。以常规Tris卵黄冷冻稀释液中分别添加2.5μL、5μL、7.5μL、10μL稀释后的亚硒酸钠维生素E(注射液)为试验组,以常规Tris卵黄冷冻稀释液为对照组,对解冻后的精液品质进行测定。结果显示添加5μL、7.5μL、10μL亚硒酸钠维生素E能够显著降低冷冻精液的精子畸形率,且10μL组顶体脱落的精子数量显著降低,精子顶体完整率上升。小剂量(<10μL)组改善了精子存活时间,使精子在体外37℃的存活时间延长至8.5h。     

兔精液冷冻复温后超微结构变化和低渗膨胀实验

实验从精子超微结构的变化对冷冻解冻精子的损伤进行研究。结果表明冷冻复温后兔的一些精子不同程度出现了质膜膨胀、变薄、皱褶及损伤；顶体肿胀、顶体外膜、内膜囊泡化或不连续，及顶体完全脱落；部分精子中段质膜破损。线粒体裸露、断裂、电子密度降低或部分丢失；少数主段末段质膜破损，抽丝断裂、散开。实验验证HOST（hypoosmotic swelling test)适合于兔精子膜功能活性检测。     

外源性胆固醇对精子膜的保护作用

由于胆固醇可延迟精子获能而增强精子存活的作用,已成为哺乳动物精子冷冻保存研究热点, 其中胆固醇与环糊精包合物(CLC)倍受关注。本文重点探讨胆固醇结构功能和转入方式,并对牛精子的研究现状进行综述。