氧氟沙星联合多西环素对牛源大肠杆菌突变选择窗的研究

研究氧氟沙星与多西环素联用对牛源大肠杆菌耐药突变选择窗(MSW)及防突变浓度(MPC)的影响。该试验通过琼脂二倍稀释法分别测量了氧氟沙星(OFL)及多西环素(DOX)两药单用及联合用药时牛源大肠杆菌临床分离株E.coliⅠ、E.coliⅡ。试验结果测得E.coliⅠ、E.coliⅡOFL单独用药时MSW为2.95、9.74,DOX单独用药时MSW为48.43、53.64,OFL及DOX联合应用时对OFL其MPC分别缩小了4倍、6倍,与8MIC浓度DOX联用时分离株E.coliⅡMSW完全关闭。研究表明,OFL和DOX联用,可以缩小各自单独用药对牛源大肠杆菌的MSW,降低其MPC,减少耐药突变菌株产生。     

环丙沙星联合用药缩小鸡沙门氏菌耐药突变选择窗的研究

为研究环丙沙星联合用药对鸡沙门氏菌耐药突变选择窗(MSW)的影响,本研究采用琼脂二倍稀释法测定环丙沙星、阿米卡星、多西环素3种药物单独使用及联合用药对鸡沙门氏菌的最小抑菌浓度(MIC)、防耐药变异浓度(MPC)和MSW.结果显示,环丙沙星联合阿米卡星和多西环素后鸡沙门氏菌MPC分别降低了8倍和16倍;环丙沙星和16 MIC多西环素联合时,能完全关闭环丙沙星的MSW.本研究表明环丙沙星联合阿米卡星和多西环素能够有效缩小鸡沙门氏菌的MSW,并且联合多西环素能关闭MSW,防止耐药突变株的富集.     

酒石酸泰乐菌素联合阿莫西林钠缩小猪链球菌耐药突变选择窗的研究

为了使临床合理使用抗菌药物,防止细菌耐药性的产生提供理论依据。本研究探讨了在体外初步联合用药缩小猪链球菌(S.suis)的耐药突变选择窗(MSW)。应用肉汤法富集1010CFU/mL细菌,琼脂平板二倍稀释法分别测定酒石酸泰乐菌素(TLST)、阿莫西林(Amoxil)钠及两药联用后对S.suis分离株D10的防突变浓度(MPC)和MSW。TLST、Amoxil钠单药和两药联用对S.suis分离株D10的MSW分别为9.71、5.16和2.81。TLST和Amoxil钠联合用药使TLST对D10的MSW缩小3.5倍;TLST和Amoxil钠联合用药使Amoxil钠对D10的MSW缩小1.8倍。TLST和Amoxil钠联合用药可缩小各自单药对S.suis分离株D10的MSW。     

头孢喹肟对大肠杆菌防突变浓度的测定

采用标准琼脂二倍稀释法测定了头孢喹肟对大肠杆菌的最低抑菌浓度;用肉汤法富集了大肠杆菌;用琼脂稀释法测定了头孢喹肟对大肠杆菌的暂定防突变浓度（MPCPr）及防突变浓度（MPC）。结果显示,头孢喹肟对大肠杆菌标准株（ATCC25922）的MIC和MIC99分别为0．125μg／mL和0．1μg／mLMPCPr和MPC分别为0．5μg／mL和0．256μg／mL,MPC／MIC99比值为2．56。头孢喹肟对50株大肠杆菌临床分离株的MIC90和MPC90分别为0．2μg／mL和0．8μg／mL,MPC90／MIC90比值为4。说明头孢喹肟限制大肠杆菌耐药突变的能力很强,ATCC25922的选择指数（SI）仅为2．56,临床分离株的SI为4。     

牛至油与5种抗生素联合用药的抗菌作用研究

该试验旨在测定牛至油及其与5种抗生素联合应用的抗菌活性。用两倍稀释法测定牛至油对16株临床分离大肠杆菌,包括8株产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌和8株不产ESBLs菌的最小抑菌浓度（MIC）值．挑选几株耐药菌株用棋盘法测定牛至油与头孢噻呋、左旋氧氟沙星、阿奇霉素、多西环素、氟苯尼考联用的抗菌活性。结果表明：牛至油对产ESBLs和不产ESBLs菌的MIC值均为0．25mg／ml;牛至油与左旋氧氟沙星和氟苯尼考之间存在协同作用．与头孢噻呋、阿奇霉素、多西环素存在相加作用或无关作用。     

河南省部分地区猪群大肠杆菌分离菌的耐药性比较分析

为掌握河南省猪源大肠杆菌的耐药情况,于2013年至2018年对河南省郑州、开封、焦作、许昌四个地区部分规模化养猪场分离出的856株大肠杆菌,采用CLSI推荐的微量肉汤稀释法,调查其对8类13种代表性抗菌药物的耐药性。结果表明,856株大肠杆菌对氧氟沙星、黏菌素、庆大霉素、头孢噻呋和阿莫西林/棒酸等5种药物的耐药率在35.0%以下,分别为32.2%、31.1%、25.5%、15.5%和30.0%;对恩诺沙星、四环素、多西环素、大观霉素、氟苯尼考、磺胺异恶唑、复方新诺明和氨苄西林等8种药物的耐药率范围为45.0%～95.0%,其中对四环素、多西环素和磺胺异恶唑等3种药物的耐药率高达90.0%以上;多重耐药集中于耐5、6和7类抗生素,耐3类及以上药物的菌株占90.0%。本研究结果表明河南省部分养殖场猪源大肠杆菌耐药形势严峻,应加强对其监测和控制。     

头孢噻肟-恩诺沙星联合用药对携带F17毒力基因牛源大肠埃希氏菌耐药突变选择窗的影响

为研究头孢噻肟-恩诺沙星联合用药对携带F17毒力基因牛源性大肠埃希氏菌(E.coli)耐药突变选择窗的影响,采用琼脂二倍稀释法测定头孢噻肟(CTX)和恩诺沙星(ENR)对11株携带F17毒力基因E.coli分离株单独用药及联合用药的最低抑菌浓度(MIC)、耐药突变度(MPC),计算耐药指数(SI)。结果显示,CTX和ENR联合用药后,CTX的MPC_(90)降至256 mg/L,SI下降了4倍,MPC_(90)/MIC_(90)为1,即联合ENR后能使CTX的耐药突变选择窗(MSW)完全关闭;同样联合用药后ENR的MPC_(90)降至256 mg/L,SI下降了2倍,MPC_(90)/MIC_(90)为2,MSW变窄,即联合CTX后能使ENR的MSW减小。结果表明,CTX联合ENR能够缩小甚至关闭其单药的MSW,有效防止耐药的产生。本研究为E.coli的耐药性防止提供了新思路,同时也为指导临床用药提供了新的思路。     

大肠杆菌耐药性的测定

目的:研究抗敌素、氟奇霉素、喹乙醇对大肠杆菌耐药突变株的选择能力,比较了其防耐药突变能力。方法:MH-肉汤富集3×1010CPU/mL大肠杆菌,采用平板稀释法测定抗敌素、氟奇霉素、喹乙醇对大肠杆菌的MIC、MPC和MSW值。结果:抗敌素的MIC、MPC为25μg/mL、100μg/mL;氟奇霉素的MIC、MPC为6.25μg/mL、25μg/mL;喹乙醇的MIC、MPC为62.5μg/mL、500μg/mL;结论:氟奇霉素的防突变能力强于抗敌素和喹乙醇。     

有机农场鸡、猪源大肠杆菌耐药性研究

为了解有机养殖模式下鸡、猪源大肠杆菌的耐药情况,2014年从广东从化某有机农场鸡、猪粪便中采集并分离出118株大肠杆菌,包括55株鸡源大肠杆菌和63株猪源大肠杆菌,采用琼脂稀释法测定大肠杆菌对18种抗菌药的敏感性。结果发现,同一有机农场中,鸡源大肠杆菌与猪源大肠杆菌在耐药种类及耐药率上均呈现相似规律,对头孢他啶、头孢喹肟、头孢噻肟、头孢西丁、阿米卡星、安普霉素、庆大霉素、新霉素、氟苯尼考、氯霉素、亚胺培南、环丙沙星、喹乙醇等较敏感(鸡0~21.8%,猪0~14.3%),对氨苄西林、链霉素呈现轻度耐药(鸡29.1%~38.2%,猪23.8%~27.0%),对复方新诺明、四环素、多西环素呈现较严重耐药(鸡45.5%、76.4%和72.7%,猪50.8%、81.0%和68.3%)。鸡源大肠杆菌中3耐及3耐以上的菌株占56.4%,猪源大肠杆菌占47.6%。结果表明有机养殖模式下鸡、猪源大肠杆菌耐药率相对较低,多重耐药现象存在但相对轻微,对个别临床常用抗菌药耐药率虽较严重但比常规养殖场低。由于目前国内大部分学者致力于研究常规养殖方式下细菌耐药情况,本研究很好地填补了有机养殖模式下畜禽大肠杆菌耐药性研究的空白。     

多西环素、氟苯尼考注射液的稳定性试验

多西环素、氟苯尼考注射液，内含多西环素与氟苯尼考。体外抑菌试验表明：多西环素、氟苯尼考注射液对鸡大肠杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、马链球菌兽疫亚种（ATCC35246株）有较好的抑制效果，均优于单方；从临床治疗试验上看．多西环素、氟苯尼考注射液能有效控制猪链球菌病。     

盐酸多西环素注射液在猪体内药效-药代动力学研究

为研究自制盐酸多西环素注射液在猪体内的药代动力学-药效学,对10头健康猪单次肌内注射盐酸多西环素注射液,采用UPLC法测定血浆中药物浓度,利用药代动力学软件WinNonlin进行数据处理。结果显示,主要药代动力学参数：消除半衰期t1/2为（31．3±9．2）h,达峰时间Tmax为（0．80±0．7）h,峰浓度Cmax为（4132±2475）μg/L,药时曲线下面积AUC为（88378±88095）（μg／L）·h,平均滞留时间MRT为（20．5±2．5）h;PK／PD参数T〉MIC为24h,AUC／MIC〉50。试验表明该制剂以10mg／kg剂量肌内注射,给药间隔两天一次为宜。     

兽药氟尼康中主要成分的高效液相色谱分析

建立了HPLC法同时测定药物氟尼康中盐酸多西环素、氟苯尼考的含量,实现了氟尼康中盐酸多西环素、氟苯尼考的较好分离。采用Hypersil-ODS2（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈∶甲醇∶磷酸二氢铵（0.1 mol/L）=1∶2∶5,pH=3.50,检测波长为254 nm,流速为1 mL/m in。结果表明,盐酸多西环素在6.25~200μg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 4,平均回收率为99.29%,RSD为0.51%;氟苯尼考在6.25~250μg/mL范围内线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为98.87%,RSD为0.32%。该方法快速简便,灵敏度高,重现性好,可用于药物氟尼康质量控制的测定方法。     

高效液相色谱法测定复方氟苯尼考粉剂中各组分的含量

用高效液相色谱法同时测定复方氟苯尼考粉剂中氟苯尼考、盐酸多西环素、甲氧苄啶乳酸盐的含量。色谱条件:固定相为C18柱(5m,4.6150mm),流动相为0.2mol/L高氯酸钠溶液(用0.1mol/L盐酸调节至pH3.0):乙腈=73:27,检测波长220nm,流速1.0mL/min,进样量20L。氟苯尼考、盐酸多西环素、甲氧苄啶乳酸盐三组分的回收率分别为(98.90.9)%、(99.91.0)%、(99.60.5)%,线性范围分别为0.016~0.08、0.032~0.16、0.016~0.08mg/mL,相关系数分别为0.99998、0.9996、0.99998。本方法操作简便、快捷,结果准确、可靠。     

猪肺炎支原体体外抗菌药物敏感性试验研究

为了解猪肺炎支原体对抗菌药物的敏感性,采用宏量肉汤稀释法对4株猪肺炎支原体的最小抑菌浓度（MIC）值进行了测定。结果表明,猪肺炎支原体对泰妙菌素和环丙沙星最为敏感,MIC≤0．03μg／mL,其次分别为四环素类药物（包括四环素和多西环素）、林可霉素和泰乐菌素,而对氟苯尼考的敏感性则较差。本研究可为猪支原体肺炎的防控以及抗菌药物的合理使用提供参考。     

Study on Drug Resistance of Escherichia coli Isolated from Chicken and Swine in Organic Farm

To determine the drug resistance of E.coli strains from swine and chicken in organic farm,collection of stool specimens was conducted in one organic farm in Conghua city,Guangdong province in 2014,in which 118 E.coli strains were separated,including 55 from chicken and 63 from swine.The sensitivity of the E.coli strains from swine and chicken to 18 kinds of drugs was detected through agar dilution method.Similar properties in drug resistance were observed both in E.coli strains from swine and chicken in the same organic farm.In consideration of the resistance rate,samples were relatively sensitive to ceftazidime,cefquinome,cefoxitin,amikacin,apramycin,gentamicin,neomycin,florfenicol,chloramphenicol,imipenem,ciprofloxacin and olaquindox (chicken 0 to 21.8%;swine 0 to 14.3%).These isolates showed moderate resistance to ampicillin and streptomycin (chicken 29.1% to 38.2%;swine 23.8% to 27.0%).About 56.4% chicken isolates and 47.6% swine isolates showed resistant to more than 3 kinds of drugs.However,severe resistance was observed in trimethoprim-sulphamethoxazole,tetracyclineand and doxycycline (chicken 45.5%,76.4% and 72.7%;swine 50.8%,81.0% and 68.3%).The results also indicated that under organic farming mode,the drug resistance rates of E.coli strains from swine and chicken were relatively low in general.Multi-drug resistance existed but was relatively slight.Although the drug resistance rate to several specific antimicrobials was high,it was still lower than that in conventional farms.Since most studies focused on the drug resistance of the bacteria under conventional farming model,this study filled the blank of the research of drug resistance under organic farming model.     

Technical note: Development of an enzyme-linked immunosorbent assay for the determination of florfenicol and thiamphenicol in swine feed

One polyclonal antibody against florfenicol and thiamphenicol was produced and a competitive ELISA was developed for the detection of florfenicol and thiamphenicol in swine feed. The ELISA gave a 50% inhibiting concentration of 1.02 ng/mL for florfenicol. For swine feed fortified with 0.05 to 3.0 mg/kg, the interassay recoveries of florfenicol and thiamphenicol ranged from 86.4 to 118.6%, whereas intraassay recoveries of both drug ranged from 90.1 to 126.5% with less than 15% CV. Results obtained from HPLC-tandem mass spectrometry indicated this ELISA procedure could be used as a convenient method for rapid screening of florfenicol and thiamphenicol in swine feed.     

垂盆草组织培养高效再生体系的研究

本文以垂盆草的茎段为主要试验材料,测定了适合垂盆草生长的各种培养基中的最适浓度,包括蔗糖、BA、NAA;此外对垂盆草组织培养高效再生体系的建立进行了探索,得到的主要研究结果如下:(1)研究垂盆草的培养基类型,得出1/2MS基本培养基最适合垂盆草的生长。(2)研究含有1%、2%、3%、4%、5%蔗糖浓度的培养基,发现3%的蔗糖浓度最适合垂盆草的生长;(3)研究含有0.2、0.4、0.6、0.8mg/L的NAA浓度的培养基,发现0.4mg/L的NAA浓度最适合垂盆草的生长;同样得出0.2mg/L的BA浓度最适合垂盆草的生长。(4)适合垂盆草组织培养高效再生体系的基本培养基配方为:1/2MS+0.4mg/L NAA+0.2mg/L BA+3%蔗糖+0.7%琼脂的培养基。同时观察试验结果时,可以看出:适当的增减BA的浓度,可以使茎秆粗壮。     

硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药的急性毒效应评价

通过对小鼠进行硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合应用的急性毒效应评价,初步探讨这2种抗菌药联合应用的合理性,以期为进一步评价其安全指标提供可靠依据。经查证,硫酸卡那霉素对小鼠腹腔注射的LD_（50）为1 973.95 mg/kg,其95%可信限为1 969.22~1 978.71 mg/kg;氟苯尼考对小鼠腹腔注射的LD_（50）为636.68 mg/kg,其95%可信限为538.5~735.1 mg/kg,该试验利用等效应线图法求出硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药时的LD_（50）。试验表明,硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合用药中,硫酸卡那霉素对小鼠腹腔注射的LD_（50）为510.51mg/kg,其95%可信限为437.52~595.66 mg/kg;氟苯尼考对小鼠腹腔注射的LD_（50）为765.60 mg/kg,其95%可信限为656.15~893.31 mg/kg。结果显示,硫酸卡那霉素和氟苯尼考联合应用后的LD_（50）剂量直线交点落在95%可信限上限之外,即这2种抗菌药的联合用药产生毒效应颉颃,初步认为联合使用具有一定的合理性与可靠性。