不同凝固剂对陆地棉体细胞胚胎发生和植株再生的影响

以陆地棉种质系珂字312和陆地棉标准系TM-1为材料,结合优化的陆地棉体细胞培养体系,系统地研究了琼脂、Gelrite和Phytagel3种培养基凝固剂对愈伤组织的诱导、胚性愈伤的增殖、体细胞胚状体的发生和植株再生的影响。结果表明,用Phytagel作为培养基的凝固剂,可显著改善陆地棉体细胞培养过程中的褐化问题,并具有提高胚性愈伤组织增殖速度、体细胞胚胎发生和植株再生频率等作用。Gelrite虽也能改善棉花体细胞培养中的褐化问题,但因水化现象严重而影响胚性愈伤组织增殖和体细胞胚状体发生,其效果不如Phy-tagel。因此,在陆地棉体细胞培养过程中的胚性愈伤组织诱导、体细胞胚状体发生和植株再生过程中,宜用Phytagel作为培养基的凝固剂,而无菌苗培养和愈伤组织诱导仍可以选用琼脂凝固剂。     

陆地棉（G．hirsutumL．）茎尖分生组织培养及其在基因导入上的应用

陆地棉栽培品种的种子无菌发芽１～３天。将萌动种子的顶端分生组织培养在无激素或附加低浓度激素ＭＳ基本培养基上，直接再生完整小植株。从顶端分生组织到再生植株所需的最短培养时间约１０天。顶端分生组织供体种芽的萌芽天数及其所连接的胚轴长度对植株再生频率有明显影响，但与品种的关系较小，不同品种均能获得再生植株。应用基因枪轰击法将ＣＰＴⅠ基因和ＮＰＴⅡ基因的重组质粒导入到棉花茎尖分生组织，培养获得卡那霉素抗性株。     

棉花黄萎菌毒素离体筛选再生植株的抗病性研究

棉花黄萎菌毒素离体筛选再生植株的抗病性研究ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＤｉｓｅａｓｅＲｅｓｉｓｔａｎｃｅｆｏｒｔｈｅＰｒｏｇｅｎｙｏｆＣｏｔｔｏｎｐｌａｎｔｓＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｂｙＥｘｎｌａｎｔＴｉｓｓｕｅＣｕｌｔｕｒｅｗｉｔｈＴｏｘｉｎｏｆＶｅｒｔｉｃ...     

中国棉花体细胞植株再生的基因型分析

我国开展棉花体细胞组织培养研究20多年来,已经成功的获得了戴维逊氏棉、雷蒙德氏棉、瑟伯氏棉、拟似棉、草棉、亚洲棉、海岛棉和陆地棉8个棉属的再生植株。其中陆地棉约占总数的70％,海岛棉约占20％。考查陆地棉栽培品种(系)的系谱亲缘关系,主要来源于斯字棉的材料约占26％、岱字棉约占23％、乌干达棉约占12％、珂字棉约占11％、爱字棉约占3％、福字棉约占1．5％。本文对我国再生植株品种(系)的差异进行了分析,并将开展棉花体细胞组织培养以来再生成功或研究利用的基因型加以整理,以期为进一步的研究提供参考。     

不同农杆菌菌株和棉花品种在转基因棉花中的应用研究

本试验采用农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）菌株ＡＧＬ—１—１１、４４０４—７、２０８—１、２８１—６，与陆地棉品种晋棉７号、柯字２０１、相字３１２、冀合３２１的下胚轴切段共同培养，将Ｂｔ内毒素基因导入棉花愈伤组织，经体细胞胚胎发生途径转化再生植株。试验结果表明：菌株间转化率差异较大，菌株ＡＧＬ—１—１１、４４０４—７表现较好。品种之间在转化率上互有高低，差异不显著     

棉花组织培养体细胞胚胎发生的扫描电镜观察

近年来棉花组织培养发展很快, 先后从陆地棉、 海岛棉、 克劳茨基棉、 戴维逊氏棉、 拟似棉等不同棉种的胚轴、 子叶、 茎段、 花药、 原生质体等诱导获得了体细胞胚胎发生和植株再生。 但是对棉花体细胞胚胎发生的机制还需要探索, 本文采用扫描电镜技术对棉花体细胞胚胎发生的形成过程和形态特征进行了研究, 旨在进一步了     

通过组织培养获得棉花不育株

棉花（ＧｏｓｓｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）体细胞培养获得的再生植株中存在很大差异,其中育性变异表现最突出,在１９９０～１９９１年培养再生的植株中发现９个不育株,其中１株雌雄全不育,形态上表现高大紧凑,花器小,畸形,柱头四裂,电镜观察表明其它粉粒空瘪,内容物少,另２株为雄性不育,电镜观察发现其花粉粒外壁发育不良。用鄂荆１号做父本与其杂交,Ｆ１代值株均不育,鄂荆１号回交ＢＣ１不育株与可育株呈１：１分     

四倍体野生棉毛棉体细胞胚胎发生与植株再生研究

通过对培养基激素配比,以及不同浓度的PEG、CuSO4和AgNO3等处理,对棉属四倍体野生棉种毛棉(G.tomentosum Nutt.Watt)进行了体细胞培养,获得了大量体细胞胚状体并实现植株再生。与四倍体陆地棉(G.hirsutum,cv.Coker 201)相比,毛棉体细胞培养难度较大,且体细胞胚畸形严重,萌发困难,但通过培养条件的调控可以得到大量胚状体和少量再生植株。试验结果表明,激素组合0.1 mg.L-1 KT+0.1 mg.L-1 2,4-D诱导的愈伤组织较松脆,分化潜力高;PEG处理不利于毛棉的胚性和非胚性愈伤的诱导,而不同浓度的CuSO4和AgNO3处理对于体细胞胚状体诱导和萌发以及植株再生效果有明显差异。其中3.5 mg.L-1 CuSO4+0.5 mg.L-1IBA+0.2 mg.L-1 KT和3 mg.L-1 AgNO3+0.5 mg.L-1 IBA+0.2 mg.L-1 KT组合利于胚性愈伤的增殖和体细胞胚的萌发。     

陆地棉抗病品种中521植株再生的研究

以农艺性状优良且抗枯黄萎病的陆地棉品种中521的下胚轴为外植体,采用固液结合的体细胞培养方法建立细胞悬浮系并进行植株再生的研究。结果表明,愈伤组织的诱导以MS 1.0 mg.L-1IBA 0.05 mg.L-1KT 0.1 mg.L-12,4-D 30g.L-1葡萄糖的固体培养基为最佳;体细胞胚的形成以MS 0.01 mg.L-1IBA 0.01 mg.L-1KT 0.005 mg.L-12,4-D 1.0g.L-1谷氨酰胺的液体培养基为最佳,悬浮30 d后可以发现体细胞胚的形成。之后转接入四种不同的MSB固体培养基上诱导再生植株形成,发现MSB 2 g.L-1谷氨酰胺 0.5 g.L-1天冬酰胺 30g.L-1蔗糖 6.0 g.L-1琼脂为最佳培养基,且发现此方法比全程固体培养缩短了体细胞再生的周期,此品种在本研究建立的再生体系下植株再生周期为6个月左右。     

豇豆胰蛋白酶抑制剂转基因棉花的获得

利用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂（Ｃｏｗ－ｐｅａＴｒｙｐｓｉｎＩｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＣｐＴＩ）基因转移进入棉花（ＧｏｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）。棉花幼苗的下胚轴与携带有ＣｐＴＩ基因和Ｎｐｔ－Ⅱ基因的根癌农杆菌共培养,在选择培养基上诱导出了卡那霉素抗性（Ｋｍｒ）愈伤组织。选择Ｎｐｔ－Ⅱ阳性的胚性愈伤组织在胚状体诱导培养基上进行胚状体诱导,继而在分化培养基上进行植株分化,最终获得了再生棉花植株。经Ｎｐｔ－Ⅱ分析、ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测证明,外源ＣｐＴＩ基因和标记基因（Ｎｐｔ－Ⅱ基因）存在于转化棉株及其后代中。抗棉铃虫（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａ）生物活性检测表明转基因植株后代具有明显的抗棉铃虫能力。     

棉花体细胞培养再生不育株的性状及细胞学研究

研究了以陆地棉（Ｃｈｉｒｓｕｔｕｍ）晋棉７号、冀合３２１、冀棉７１３、珂字棉３２１、珂字棉２０１等品种为外植体的体细胞培养获得再生突变不育株的形态性状及减数分裂过程中染色体的行为。与再生可育株相比，不育株的株型、分枝、叶、花各器官均较小。花柱、柱头、花丝、花药小而呈萎缩干瘪状，花药不开裂。减数分裂不正常，染色体普遍丢失减少，不能正常配对，出现很多单价体和染色体桥。产生二分体、三分体和多分体，也有正常的四分体。雌配子体和雌配子发育也不正常，胚囊结构不完整，反足细胞迟迟解体，表现雌雄不育。     

花粉特异性核糖核酸酶基因诱导籼稻特性不育及其遗传研究

以水稻愈伤组织和悬浮细胞系作为基因枪转化的外植体，把水稻花粉特异性基因ＰＳ１启动子与ｂａｒｎａｓｅ构成的嵌合基因导入籼稻，获得籼稻五个品种Ｂａｓｍａｔｉ－１，青油占，胜优２号，明恢复６３，新山占２９的转基因植株。试验以两个质粒ＰＳ１－ｂａｒｎａｓｅ和ｐＩＬＴＡＢ２２７共转化的方法，以潮霉素Ｂ作为筛选因子，选择抗性愈伤及再生植株。     

陆地棉体细胞植株再生及其移栽技术研究

以7个陆地棉（Gossypium hirsutum L.）品种为材料，对体细胞植株再生及移栽技术进行了研究。在含IAA和KT和0.5ppm的MSB培养基上，Coker312、Coker201、鲁棉1024、冀合3016和河南79等5个品种能形成数量不等的胚性愈伤组织，中棉12和邯郸14的愈伤组织继代后便褐化死亡。胚性愈伤组织振荡培养1个月以上转移到成熟培养基上获得大     

不同陆地棉品种辐射效应研究初报

不同陆地棉品种辐射效应研究初报①Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｒａｄｉａｔｉｏｎｅｆｅｃｔｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｃｏｔｏｎｖａｒｉｅｔｉｅｓ（Ｇ．ｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）试验以近几年育成的１０个综合性状较好的陆地棉品种（系）为材料，包括５个中熟品种：鲁棉９号（ｖ１）...     

基因型在棉花花药培养中的效应

棉花花药培养愈伤组织的诱导是植株再生的第一步，基因型在愈伤组织诱导上的差别必将影响着植株再生。本试验中，亚洲棉愈伤组织诱导率最高，陆地棉次之，海岛棉较差，野生种最差。在花药愈伤组织诱导上，种间杂种没显示出优势，但陆地棉品种间杂交则表现出优势。不同基因型诱导产生的花药愈伤组织的颜色、质地、生长量和生活力不同，亚洲棉生长量最大，但活力较差。     

通过游离小孢子培养获得绿菜花（Brassica oleracea var.italica）再生植株

通过游离小孢子培养获得绿菜花（Ｂｒａｓｉｃａｏｌｅｒａｃｅａｖａｒ．ｉｔａｌｉｃａ）再生植株ＰｌａｎｔＲｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｏｍＩｓｏｌａｔｅｄＭｉｃｒｏｓｐｏｒｅＣｕｌｔｕｒｅｏｆＢｒａｓｉｃａｏｌｅｒａｃｅａｖａｒ．ｉｔａｌｉｃａ７０年代初...     

低酚陆地棉直接体细胞胚胎发生和植株再生

选用低酚陆地棉无菌苗下胚轴为材料进行全固体组织培养,直接诱导获得了胚性愈伤组织,并进一步分化为再生植株.结果表明,激素是影响棉花直接体细胞胚胎发生的重要因素.MSB培养基中添加2,4-D有利于愈伤组织的形成,却不能直接诱导获得胚性愈伤组织.MSB培养基中添加IBA和BA也不能直接诱导获得胚性愈伤组织.MSB培养基附加适当浓度的IBA和KT能直接诱导出胚性愈伤组织.最适激素组合(1.0 mg/L IBA,0.5 mg/L KT)能使诱导棉花下胚轴产生大量胚性愈伤组织,并且在3个月内就可肉眼观察到不同发育时期的胚.MSB培养基中附加1.0 g/L谷氨酰胺和0.5 g/L天门冬酰胺有利于胚萌发成苗.本研究建立了简便高效的棉花直接体细胞胚胎发生和植株再生培养体系,从胚性愈伤组织诱导到植株再生约需5～6个月时间.     

光敏核不育水稻（31301s）原生质体培养再生成株

从光敏核不育水稻３１３０１ｓ胚性细胞悬浮系分离培养原生质体，成功地实现了植株再生，原生质体在ＫＰＲ培养基中植板率达２．４％，在ＳＫＰＲ（除去ＫＰＲ中复杂的有机成分，以及葡萄糖以外的糖类）中获得了较高的植板率（１．８％），在高压灭菌取代过滤除菌的ＳＫＰＲ中也能培养成功。３１３０１ｓ原生质体再生细胞团直接分化的分化率达１０％，再生细胞团在含３％蔗糖和５００ｍｇ／Ｌ脯氨酸的Ｎ６培养基上增殖后再分化，可明     

甘薯和Ipomoea lacunosa的种间体细胞杂种植株再生及鉴定

用ＰＥＧ融合法融合甘薯品种高系１４号和近缘野生种Ｉｐｏｍｏｅａ ｌａｃｕｎｏｓａ的原生质体，将融合原生质体培养在含有０．０５ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ和０．５ｍｇ／Ｌ ＫＴ的ＭＳ培养基上，愈伤组织迅速增殖。将其中的７０个愈伤组织培养在添加３．０ｍｇ／Ｌ ＢＡＰ的ＭＳ培养基上，并进一步培养在ＭＳ基本培养基上，获得９株再生植株。过氧化物酶同工酶、酯酶同工酶和ＲＡＰＤ分析表明，其中２株再生植株（ＫＬ１和ＫＬ３）     

大豆组织和细胞培养研究进展

从大豆组织培养的培养基选择、基因型和外植体类型培养差异、器官和胚胎发生再生植株、花药和花粉及 原生的南体培养再生植株、体细胞无性系变异体选择和基因转化等方面综述了大豆作物组织和细胞培养所取得的进展，并对今后的研究提出了建议。