荧光定量RT-PCR检测公猪精液和血液中猪瘟病毒载量

为快速检测规模化猪场猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV),本研究参考GenBank中登录的CSFV序列设计引物,利用实时荧光PCR技术,构建重组质粒作为阳性标准品,建立特异、敏感、重复性好的CSFV快速定量检测方法.同时建立标准曲线,用于对猪瘟病毒的定量分析.本方法对规模化猪场的100份抗凝血和50份公猪精液样品进行检测,常规PCR检出27份占18％,荧光定量PCR检出123份占82％.表明荧光定量RT-PCR方法在检测猪瘟样品中具有潜在的应用价值,同时可检测猪群中猪瘟病毒持续性感染的状态存在.     

规模化猪场库布病毒返饲及效果评估

2019年9月20日,沈阳市某1 500头规模猪场的仔猪发生病毒性腹泻,持续5周均检测为库布病毒阳性,治疗效果不显著,死亡率最高达29.66%,即使治愈,由于生长受到影响而成为僵猪,给该猪场造成较大经济损失,而经过库布病毒返饲后,仔猪腹泻率明显降低,仔猪腹泻死亡率也恢复到正常范围之内。因此,文章对此次库布病毒返饲的研究进行总结,旨在评估库布病毒返饲效果,为库布病毒的后续研究提供一些参考资料。     

某规模化猪场猪舍环境中猪圆环病毒3型的检测与分析

猪圆环病毒3型(PCV3)是危害我国养猪业的重要病原之一。为探索猪场环境因子与PCV3传播的相关性,揭示实际生产周期中的PCV3传播规律和环境关键风险控制点,在内蒙古自治区某规模化猪场,筛选5个有临床流行病学意义的猪舍,按照实际生产周期,分3批次共采集75份不同类型的环境样品,利用荧光定量PCR方法进行PCV3检测,分析不同生产阶段在不同类型环境样品中的PCV3分布情况。结果显示:在5个猪舍3批次采集的75份不同类型环境样品中,PCV3阳性率为60.00%;5个猪舍不同类型环境样品,在进猪前3 d检测均为PCV3阴性,在进猪后约15 d检测均为PCV3阳性,4个猪舍在进猪后约30 d检测均为PCV3阳性;5个猪舍的垫子、料槽、风机和漏粪板样品中病毒含量均较高。结果表明:5个猪舍流行的PCV3并非由进猪之前(空舍时期)的环境消毒不彻底所致,而可能与引进猪只的健康状况、生产管理等相关;猪舍内的垫子、料槽、风机和漏粪板等可能是PCV3传播中的关键环境风险控制点。本研究从环境控制的角度,提出了PCV3传播中的关键环境风险控制点,为PCV3感染的精准防控提供了参考。     

规模化猪场环境中病原菌的调查

为了解规模化猪场环境中的细菌数量与主要病原菌的分布情况。本试验在荣昌地区2个具有代表性的规模化养猪场中采集空气、排污水、粪便和土壤进行细菌总数检测,并对细菌(葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、沙门氏菌)进行分离鉴定。结果显示,2个猪场空气、排污水、粪便和土壤样本细菌总数分别为(7.95~50.7)×103 cfu/m3、(0.98~22.10)×105 cfu/mL、(989~12 600)×104 cfu/g、(6.30~37.2)×104 cfu/g;细菌经分离鉴定有79株,其中葡萄球菌30株、链球菌15株、大肠杆菌29株、沙门氏菌5株。结果表明该地区规模化猪场的土壤样本有轻、中度污染,其余样本的细菌总数都符合国家规定;分离的主要病原菌中葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌较多,沙门氏菌较少,其致病性还有待进一步检测。这为当地猪场的卫生消毒和疾病防控提供了重要的参考数据。     

黑龙江省某规模化猪场猪细小病毒的PCR检测

猪细小病毒病是由猪细小病毒(PPV)引起的以初产母猪发生流产、不孕、产死胎、畸形胎、木乃伊胎及弱仔等为特征的猪主要繁殖障碍性疾病之一。由于该病常呈地方流行性或散发性,特别是初次感染时,可呈急性爆发,对养猪业危害较大。为了解黑龙江省猪群中猪细小病毒的病原感染情况,对规模化猪     

规模化猪场猪舍环境控制措施

良好的猪舍环境是保障猪健康生长的重要因素,不仅能加快仔猪的生长发育,还能提高种猪的繁殖性能。养猪生产中存在猪舍通风不畅、降温设施陈旧、供暖方式单一等问题,严重影响猪的健康生长。本文剖析了环境因素对猪生产力的影响,并从减少有害气体排放、强化猪舍供暖通风、完善隔热降温设施等方面提出了优化猪舍环境控制措施。     

猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法研究进展

实时荧光定量PCR技术是结合PCR技术、光谱技术和计算机技术发展起来的一种新型分子生物学定量检测技术,其融合了PCR技术的高灵敏性、DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确定量的特点,它不仅实现了对核酸模板的定量,而且具有特异性强、灵敏度高、重复性好、准确性高、自动化程度高、速度快、全封闭反应、无污染等优点,在猪瘟疫苗的定量检测、猪瘟的诊断以及猪瘟病毒强、弱毒株鉴别诊断中得到了广泛应用,显示出了良好的应用前景。论文就荧光定量PCR技术及其在猪瘟诊断上的应用做一简要综述,为我国猪瘟的综合防控提供参考。     

实时荧光定量PCR检测猪细小病毒

根据已报道的猪细小病毒基因组序列,设计并合成了引物和探针,从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中提取DNA,经PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌JM109,筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行PCR和测序鉴定,表明目的片段已经成功克隆.将104～108拷贝反应的重组标准品质粒进行荧光定量PCR,系统自动分析软件显示Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系.动力学曲线分析表明,在该反应体系和反应条件下,标准曲线的灵敏度为102拷贝.本方法的建立为猪细小病毒感染的早期诊断奠定了基础.     

蓝舌病病毒荧光定量RT-PCR检测技术

蓝舌病是一种侵害反刍动物的虫媒传染病,被世界动物卫生组织(Office International des Epizooties,OIE)列为上报疾病,我国将其列为一类动物疫病.本研究利用计算机软件分析获取蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)核酸检测的保守靶序列,设计引物和TaqMan荧光探针,建立了BTV荧光定量RT-PCR技术,进行了特异性、敏感性、重复性等实验评价,并对动物样品进行检验.结果显示,该技术可有效检出不同血清型BTV,与流行性出血病病毒(Epizootic hemorrhagic disease virus,EHDV)无交叉反应;对RNA标准品的检测灵敏度为102 copies;重复检测CV<5%,可对动物样品进行有效检测.因此,所建立的BTV TaqMan/荧光定量RT-PCR技术可为蓝舌病诊断提供一种快速、可靠的病原检测手段.     

浅析规模化猪场环境控制措施

猪的环境包括影响猪生长、发育、繁殖和生产性能发挥的一切自然因素和社会因素。控制好环境是决定养猪成败的关键,规模化猪场主要关注的是温度、湿度、空气质量、饲养密度、病原微生物以及猪场与外界的隔离等,只有为猪生长发育创造适宜的小气候环境,才能保证猪食欲旺盛、生长发育快、耗料少、发病率低、生产性能充分发挥,从而获得较高的经济效益。结合工作实际,就规模化养猪场环境控制措施浅析如下：     

非洲猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法

试验旨在建立一种非洲猪瘟病毒（ASFV）的荧光定量PCR检测方法,根据ASFV P72基因核苷酸序列,通过基因克隆技术在质粒载体中克隆一段ASFV P72基因片段,设计一对特异性引物以及探针,通过带有基因序列的重组质粒绘制曲线,构建了一种ASFV荧光定量PCR检测手段。结果显示,该方法具有较高的敏感度,标准曲线线性关系较好,相关系数达到0.999 8,重复性较佳,变异系数小;且以其他疾病核酸为模板均未出现扩增曲线,特异性较好。研究表明,该荧光定量PCR方法能够为ASFV的检测提供帮助。     

荧光定量RT-PCR检测猪日本脑炎病毒

通过RT-PCR方法克隆了日本脑炎病毒(JEV)N基因片段序列,构建重组质粒作为标准阳性模板,同时根据GenBank中的靶序列设计了荧光定量R-PCR的1对引物和1条TaqMan探针.通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了JEV检测的荧光定量PCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108和1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为17.33、20.52和23.90,变异系数分别为0.54%、0.74%和0.53%,均小于5%.对阳性组织病料的检测表明该方法的灵敏度高出常规PCR,与套式PCR(nested-PCR,nPCR)具有相近的灵敏度.     

标准化规模化猪场中猪舍的环境控制

猪舍环境是影响生猪生产的重要因素,为了提高标准化规模化猪场生产力水平,分析了环境因素对生猪生产力的影响,对猪舍环境控制措施进行了阐述。猪舍环境影响生猪生产力主要表现在其影响仔猪成活率和繁殖猪的繁殖性能。猪舍环境控制包括舍内有害气体减排、供暖、通风与降温。其中,猪舍内有害气体可以通过改进饲养管理及舍内设施的设计进行控制。冬季供暖通风主要应从提高猪舍围护结构的保温节能效果和配置必须的供暖设施并合理组织通风几个方面同时着手。夏季隔热降温应从提高猪舍围护结构的隔热性能并采取适宜的降温措施综合考虑。     

山东省规模化猪场四种病毒性疾病的抗体检测

为及时了解山东省规模化猪场重大病毒性疾病的抗体水平,试验采用进口ELISA试剂盒,分别对山东省不同地区7个规模化猪场分别送检的共224份血清进行猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病毒及猪圆环病毒的抗体检测。结果显示:7个规模化猪场猪瘟、猪蓝耳病、猪圆环病毒病的抗体阳性率分别在20.00%~87.50%、5.00%~93.10%、38.89%~100.00%之间;猪伪狂犬病野毒感染率为0.00%~88.89%,经SPSS 19.0软件分析知7个不同猪场之间各种疾病的抗体阳性率均存在显著差异性(P0.05)。根据以上数据对猪场四种病毒性疾病的抗体水平进行分析,为制定完善的免疫防控方案提供重要的依据。     

牡丹江市某规模化猪场日本乙型脑炎病毒RT-PCR检测

日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)又称乙型脑炎病毒,简称乙脑病毒,属于黄病毒科(Flaviridae)黄病毒属,所引起的疾病称为乙型脑炎或日本脑炎,是严重威胁人畜的一种急性传染病的季节性和一定的地理分布区域,多发生于蚊虫较多的夏秋季节,属于自然疫源性疾病.     

规模化猪场采样检测流程

1 送检样品分类与采样要求 1.1 唾液检测 适用于大栏饲养检测,选择吸水储水能力强的全麻粗绳,准备一次性手套、自封袋若干.将麻绳一端固定在围栏上,另一端与猪头等高即可,在栏外唤醒猪只,略微晃动棉绳吸引猪只咬食,过段时间后戴上一次性手套将麻绳取下,拧压,将挤出的唾液存放于自封袋内,密封送检.每次可检测一个大栏,需要对多...     

荧光定量PCR技术在猪瘟病毒定量检测中的应用

正猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种急性、热性和高度接触性传染病~([1]),该病流行范围广、致死率高、危害性大,是目前危害我国养猪业的头号杀手~([2])。近年来我国猪瘟发病趋势出现了明显的变化,发病率明显降低的同时出现了所谓的非典型猪瘟、温和型猪瘟和无名高热综合征等~([3]),使猪瘟野毒感染的临床诊断以及猪瘟强毒株与疫苗毒的鉴别诊断变得非常困难但又十分必要,亟待建立一种可以准确鉴别诊断猪瘟病毒强毒株敏感而特异的检测方法。同     

规模化猪场夏季各类猪舍环境气载细菌检测

旨在评价规模化猪场各类猪舍的环境卫生质量,选择河北省不同地区的5个规模化猪场,采用自然沉降法对夏季4类猪舍(共24个猪舍)的舍内外气载细菌数量进行检测分析。结果表明,产房的气载细菌数量最少,保育舍细菌数量最多,各类舍的气载细菌数量分别达到3.82×10~4~2.32×10~5 CFU/m~3(产房)、8.34×10~4~3.38×10~5 CFU/m~3(保育舍)、9.81×10~4~2.03×10~5 CFU/m~3(妊娠舍)和6.89×10~4~2.67×10~5 CFU/m~3(肥育舍)。96%的猪舍细菌数量超标,最高超出国家标准的5.6倍。各猪场场区的细菌数量虽然显著低于舍内(P0.05),介于4.88×103~2.87×10~4 CFU/m~3,但也应引起重视。此外,同一舍不同垂直空间(0.5m和1.0m)和不同时间段(早、中、晚)的细菌数量均差异不显著(P0.05)。除妊娠舍外,同类舍气载细菌数量间均差异显著(P0.05)。结果提示:猪舍的气载细菌数量不仅取决于猪群类型,还受建筑类型和通风条件等因素的影响,该研究结果可为完善猪场的环境调控和防疫制度提供参考。     

辽宁省某规模化猪场圆环病毒Ⅱ型的PCR检测

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是迄今为止发现的最小的一种脊椎动物病毒.PCV分为无致病性(或PK15源性)的猪圆环病毒Ⅰ型(PCV-1)和有致病性(PMWS源性)的猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)两个基因型[1-2].     

规模化猪场圆环病毒病的防控

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒2型(PCV2)引起的猪病毒性疾病,是继猪繁殖与呼吸综合征(猪蓝耳病,PRRS)之后又一免疫抑制性疾病。目前,我国猪群的PCV2感染十分普遍,在养猪生产的各个阶段都存在感染,特别是哺乳仔猪和仔培猪、母猪的感染率很高。近年来由PCV2感染所引发的疾病已成为我国规模化猪场的主要疫病,其危害十分严重,给我国养猪生产造成了巨大的经济损失。笔者就规模化猪场圆环病毒病的危害及控制措施作一阐述。